CNS 15091-18-2007 Method of test for deep sea water - Determination of bacteria abundance (DAPI)《深层海水检验法－总细菌数之测定(DAPI染色法)》.pdf

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1、1 印月966月 本標準非經本局同意得翻印 中華民國國家標準 CNS 總號 號 ICS 71.040.40 N7001-1815091-18經濟部標準檢驗局印 公布日期 修訂公布日期 966月26日 月日 (共2頁)深層海水檢驗法總細菌數之測定(DAPI 染色法) Method of test for deep sea water Determination of bacteria abundance (DAPI) 1. 適用範圍：本標準規定深層海水中總細菌數之檢驗。 2. 檢驗方法：海水 中總細菌數之檢驗方法一般均以染色體染色法來進行，樣本於現場取得後隨即以 glutaraldehyde 溶

2、液固定，回實驗室後取適量體積的樣本染色並過濾於孔徑 0.2 m 的濾紙上，然後在螢光顯微鏡下以紫外光激發進行計數。 3. 器材及儀器 3.1 採樣及樣本分裝容器： 50 mL、 5 mL 無菌有蓋之塑膠製離心試管。 3.2 1 mL、 2 mL 的自動滴管。 3.3 濾膜：直徑 25 mm，孔徑 0.2 m Polycarbonate 材質，黑色之 Nuclepore 濾膜。 3.4 過濾幫浦、過濾器材、載玻片、蓋玻片。 3.5 螢光顯微鏡 (含有 1000 物鏡 )。 3.6 鏡油 (immersion oil)：一般市售無色指甲油 (密封用 )。 4. 試劑與配製 4.1 固定液（戊二醛）

3、： glutaraldehyde solution 25%。 4.2 染色劑：濃度 1 g/mL 的 DAPI (46-diamidino-2-phenylindole)。 5. 採樣及分析步驟 5.1 以無菌之離心試管收取 50 mL 之樣本，隨即加入 5 mL 之固定液，然後將樣本保存於 4 的冰箱中。 5.2 取 2 mL 樣本分裝至 5 mL 無菌試管中，然後加入 1 mL 之 DAPI 染色劑染色至少3 分鐘。 5.3 將染色後之樣本過濾於直徑 25 mm、孔徑 0.2m 之濾膜上。過濾壓力應小於 100 mmHg。 5.4 將已過濾於濾膜上之樣本放置於載玻片上，加上鏡油蓋 上蓋玻片

4、，再以指甲油密封固定。 5.5 將製好之玻片置於螢光顯微鏡 (10100)倍下，以 UV 光投射樣本。 5.6 細菌在 UV 光的投射之下會激發出藍色光點，此藍色光點（顯微鏡的目尺下直徑在 1 m 以內）即被視為細菌。 5.7 隨機計數 10 個視野下的細菌數量，並逐一記錄之。 6. 總細菌數量 (Bacteria Biomass)計算公式： 2 CNS 15091-18, N 7001-18 總細菌數 ( Abundance Bacteria )5055VaAn)mL (cells 1-= n：平均每個視野之細胞數量 A：濾紙有效面積 (cm2) a：視野面積 (cm2) V：過濾樣本體積

5、(mL)： 2 mL 7. 當細菌密度 1.4103 mL-1時將無法測出。 備考： 深層海水泛指位於海平面 200 公尺以下之海水。圖 1 為在台灣東部深水海域以本方法實測之海水總細菌數 (Bacteria)隨深度之變化情形。 圖 1 台灣東岸台東知本深層海水總細菌數 (Bacteria)隨深度變化之檢驗實例（現場採樣日期、位置與海底深度： 2006 年 10 月 12 日、 121.0633oE； 22.6437oN、 650 m） 0 5 10 156005004003002001000Depth (m)60050040030020010000 5 10 15Bacteria (*105cells/mL)總細菌數深度