GBZ T 240.21-2011 化学品毒理学评价程序和试验方法 第21部分：致畸试验.pdf

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1、ICS 13. 100 C 52 , 中华人民共和国国家职业卫生标准GBZ/T 240.21-2011 化学晶毒理学评价程序和试验方法第21部分:致畸试验Procedures and tests for toxicological evaluations of chemicals一Part 21 : Teratogenicity test 2011-08-19发布2012-03-01实施中华人民共和国卫生部发布室主闰防伪目Ij1=1 根据中华人民共和国职业病防治法制定本部分。GBZjT 240(化学品毒理学评价程序和试验方法现分为以下四十四部分:一一第l部分:总则;一一-第2部分z急性经口毒性

2、试验;-一一第3部分:急性经皮毒性试验;一一第4部分:急性吸人毒性试验;一一第5部分:急性眼剌激/腐蚀性试验;一一第6部分z急性皮肤剌激性/腐蚀性试验;一一一第7部分:皮肤致敏试验;一一第8部分:鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验;一一第9部分:体外哺乳动物细胞染色体畸变试验;-一一第10部分:体外哺乳动物细胞基因突变试验;一一第11部分:体内哺乳动物骨髓嗜多染红细胞微核试验;一一第12部分:体内哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验;一一第13部分:哺乳动物精原细胞/初级精母细胞染色体畸变试验;一一第14部分:啃齿类动物显性致死试验;一一第15部分:亚急性经口毒性试验;一一第16部分z亚急性经皮毒性试验;一

3、一第17部分:亚急性吸入毒性试验;一-一第18部分z亚慢性经口毒性试验;第19部分:亚d慢a性经皮毒性试验;一一第20部分:亚慢性吸入毒性试验;一一第21部分:致畸试验;第22部分:两代繁殖毒性试验;一一第23部分:迟发性神经毒性试验;一-第24部分:慢性经口毒性试验;一一第25部分z慢性经皮毒性试验;一二第26部分:慢性吸入毒性试验;一二第27部分:致癌试验;第28部分:慢性毒性/致癌性联合试验;一一第29部分:毒物代谢动力学试验;一一第30部分:皮肤变态反应试验-局部淋巴结法;一一第31部分:大肠杆菌回复突变试验;一一第32部分:酵母菌基因突变试验;一一第33部分z果蝇伴性隐性致死试验;一

4、一第34部分z枯草杆菌基因重组试验;-一一第35部分:体外哺乳动物细胞程序外DNA合成(UDS)试验;一一第36部分z体内哺乳动物外周血细胞微核试验;GBZjT 240.21-2011 I GBZ/T 240.21-2011 E 第37部分:体外哺乳动物细胞姊妹染色单体交换试验;第38部分:体内哺乳动物骨髓细胞姊妹染色体交换试验;一一第39部分z精子畸形试验;一一第40部分:繁殖/生长发育毒性筛选试验;一一第41部分:亚急性毒性合并繁殖/发育毒性筛选试验;一一第42部分:一代繁殖试验;一一第43部分:神经毒性筛选组合试验;第44部分z免疫毒性试验。本部分为GBZ/T240的第21部分。本部分由

5、卫生部职业卫生标准专业委员会提出。本部分由中华人民共和国卫生部批准。本部分起草单位:上海市疾病预防控制中心、中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所。本部分主要起草人z肖萍、孙金秀、薛春霄、林铮。1 范围化学晶毒理学评价程序和试验方法第21部分:致畸试验GBZ/T 240.21-2011 GBZ/T 240的本部分规定了动物致畸试验的目的、试验概述、试验方法、数据处理与结果评价、评价报告和结果解释。本部分适用于检测化学品的致畸性。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用

6、于本文件。GBZ/T 224 职业卫生名词术语GBZ/T 240.1 化学品毒理学评价程序和试验方法第1部分:总则3 术语和定义GBZ/T 240.1界定的术语和定义适用于本文件。3. 1 母体毒性maternal toxicity 引起亲代雌性娃振动物直接或间接的健康损害效应。4 试验目的检测娃振动物接触化学品后引起胎仔畸形的可能性。5 试验概述试验应设多个剂量组。选择处于胚胎发育器官形成期的娃振动物进行染毒，并在胎仔出生前将娃振动物处死，取出子宫，检查其吸收胎、死胎、活胎及胎仔的骨髓和内脏畸形的情况。6 试验方法6. 1 实验动物首选健康、刚进入性成熟期、未经交配的雌性大鼠或家兔，按雌雄动

7、物比例2: 1或1: 1交配。试验前的适应期至少为3d。为了获得足够的胎仔数，正确地评价受试样品致畸的可能性，对于大鼠，每个剂量组和对照组至少应有15只娃振动物，家兔至少为12只。1 GBZ/T 240.21-20门6.2 剂量设计试验至少设3个剂量组、1个阴性对照组，必要时可设1个阳性对照组。阳性对照物可选用环磷酷胶、阿司匹林或维生素Ao对照组动物除了不给予受试样品外，其他处理应与剂量组完全相同。试验可以先采用预试验，了解受试样品引起胚胎或胎仔死亡的剂量。在受试样品理化和生物特性允许的条件下，高剂量组剂量应使母体出现明显的毒性反应，如轻微的体重下降，但不能引起超过10%的母体死亡;低剂量应不

8、引起动物任何可观察到的毒性反应;在低剂量和高剂量之间可按几何级数设置中间剂量。如果受试样品的毒性较低，1000 mg/kg体重的剂量对胚胎元明显毒性或致畸作用，则可以采用限量试验，即试验不需要设其他剂量组。若高剂量的预试验对母体确有一定的毒性作用，但对胚胎无不良影响，也可以采用限量试验。6.3 试验步骤6.3. 1 染毒途径通常为经口灌胃，也可以采用其他与人的接触方式相同的给样方式。每天的染毒应在同一时间进行。如果受试样品是通过灌胃染毒的，应按每只母体动物的体重来确定每日的染毒量。6.3.2 交配及染毒期限雄性和雌性动物按1: 1或1: 2的比例合笼交配e每天早晨应对雌性动物进行检查，查看阴道

9、中是否有精子或阴栓。将检查到精子或阴栓的当天计为雌性动物娃振的第0天。将娃振动物随机分组后，于胚胎器官的形成期开始染毒(大鼠为孕后6d15 d，家兔为孕后6d18 d)，每天一次。6.3.3 观察期限及指标6.3.3.1 每日至少对娃振动物进行次仔细的临床观察。发现虚弱或濒死的动物，应进行隔离或人道处死，对死亡的动物应进行尸检。如母体有流产、早产症状者也应处死并作大体检查。6.3.3.2 每日称取娃振动物体重，每周记录摄食量，并观察其临床症状，包括皮肤、毛、眼睛、蒙古膜、呼吸系统、循环系统、神经系统、四肢活动和行为方式的改变。6.3.3.3 及时记录任何毒性反应，包括出现的时间、程度和持续的时

10、间。6.3.4 观察指标分娩前一天处死娃振动物(大鼠为任振第20天，小鼠为娃振第18天，家兔为娃振后第29天)，立即进行解剖检查。6.3.4. 1 子宫观察取出子宫，分别称取子宫、胎盘和活胎的重量，记着床数、活胎数、死胎数及吸收胎数。6.3.4.2 外观栓查逐一记录活胎仔的身长和尾长。检查外观有元异常，如头部:无脑、脑膨出、露脑、头盖裂、脑积水、小头、颜面裂、小眼、元眼、眼球突出、元耳、小耳、耳位低、元鄂、小顿、下鄂、兔唇和下领裂;躯干部:胸骨裂、胸部裂、脊椎裂、脊椎侧弯、脊椎前弯、脊椎后弯、脐茄、尿道下裂、无虹门、短尾、卷尾、元尾和腹裂;四肢:多肢、无肢、短肢、半肢、多趾、无趾、并趾、短趾和

11、缺趾。胎鼠畸形检查方法见附录Ao6.3.4.3 骨髓检查将每窝1/2的胎仔放入茜素红液(配制方法见附录B的B.1)中染色，进行骨髓检查。测量囱门大小，矢状缝的宽度，头顶间骨及后头骨缺损情况，然后检查脊柱骨的数目、融合、纵裂、部分裂开、骨化中GBZ/T 240.21-20门心数、发育不全、缩窄、脱离和形状;骨盆的弓数目、骨化中心数、形状异常、融合、裂开、缩窄和脱离;四肢骨的形状和数目;腕骨的骨化中心数;掌骨、趾骨的形状;肋骨的数目、形状、融合、分叉、缺损和发育不全;胸骨的形状、完全缺失、胸骨节融合、裂开、形状异常和发育不良等情况。6.3.4.4 内脏检查将每窝另一半的胎仔放入Bouins液(配制

12、方法见附录B的B.2)中，固定两周后作脏器和软组织检查。检查有无异常，如头部:嗅球发育不良、侧脑室扩张、第三脑室扩张、角膜缺损等;胸部:右心位、房中隔缺损、室间隔缺损、主动脉弓、食道闭锁、气管狭窄、元肺、多肺、肺叶融合、踊茄、气管食管瘦和内脏异位等;腹部:肝分叶异常、肾上腺缺失、多囊肾、膀肮缺失、辜丸缺失、阴辜、卵巢缺失、卵巢异位、子宫缺失、子宫发育不全、肾积水、肾缺失和输尿管积水等。对于家兔每个胎仔都应解剖进行脏器检查和骨髓检查。7 数据处理与结果评价7. 1 数据处理数据可以用统一的表格进行统计，表中应显示每组的实验动物数、平均体重、受孕动物数、黄体数、着床数、吸收胎数、活胎数、死胎数及其

13、百分率、胎仔的情况(体重、胎盘重、体长、尾长、畸胎的类型(包括外观、骨悟和内脏)、数目及百分率。数据可采用任何一种适当的统计方法进行处理。应将各剂量组的指标相应地与对照组进行显著性检验。其中，以畸胎率最为重要，主要有以下两种:出现畸形的活胎总数。/每组动物总畸胎率=山，比t:r-Y1:，.且血L:XIOO%注:凡每一活胎出现一种以上畸形时，均作一个畸胎计。当出现的畸胎是以某一种或某几种畸形为主时，就应按畸形种类单独计算该畸形率。一出现某种畸胎总数每组动物某单项畸胎率血L:X 100% 一该组母体所产的宫、致畸指数二雌性动物LD旷最小致畸剂量7.2 结果评价7.2.1 评价时应结合所用动物品系的

14、历史性的资料进行，包括自发畸变种类和频率。7.2.2 如果某剂量组的总畸胎率或某单项畸胎率与对照组相比明显增高，且差异有显著性，可表明该剂量有致畸作用。7.2.3 试验结果应能得出受试样品是否有母体或胚胎毒性、致畸性，最好能得出元致畸剂量和最小致畸剂量。8 评价报告除GBZ/T240.1规定的一般项目外，评价报告还应包括以下内容:a) 给予受试样品的方法和期限;b) 孕鼠体重增长和娃振情况;c) 受孕动物数、黄体数、着床数、吸收胎数、活胎数、死胎数及其百分率;d) 胎仔的情况(体重、胎盘重、体长、尾长)、畸胎的类型(包括外观、骨髓和内脏)、数目及百分率。9 结果解释解释致畸试验结果时，应注意种

15、属的差异。试验结果从动物外推到人存在着一定的局限性。3 GBZ/T 240.21-2011 A.1 胎鼠外观检查附录A(资料性附录)胎鼠畸形检查方法对每只胎鼠先经肉眼检查，如果肉眼不能确定某种畸形时，将胎鼠放在解剖显微镜下进一步确定并照相，胎鼠的检查顺序如下。A.2 胎鼠的头部检查有无露脑(元头盖骨)，脑膜膨出，头部大小(大头可能脑积水、小头为头部发育不良)。眼睛的有元，眼所在部位，大小(小眼或大眼)，突眼或开眼等。两耳、鼻和嘴外表是否正常和对称，上下顿有无唇裂。A.3 四肢的检查四肢有无多趾(指)、并趾、少趾、无趾、足内外翻、短肢等畸形。A.4 躯干的检查有元脐茄、腹裂(内脏膨出)，脊髓膨出

16、、脊柱裂、脊柱侧突等。A.5 尾部检查有无短尾、卷尾、无尾和尾分叉等。A.6 标本的制作将每窝1/2胎鼠放入Bouins液固定，作为内脏检查，另1/2放入95%酒精中固定作为骨髓检查。A.7 骨髓标本的制备胎鼠放入1%KOH溶液中软化至能很清楚地看见骨髓为止，必要时中间可更换1次KOH溶液。A.8 骨髓染色将骨锦标本放入茜素红应用液中染色16h，直至全部骨髓染成紫红色为止，中间可更换一次染液。A.9 骨髓透明染好色以后，用自来水冲净标本，倒掉染液，将标本置于50%甘泊中脱色3d5 d。4 GBZ/T 240.21-2011 A.10 骨髓检查A. 10. 1 头骨检查:颅骨是否完整，有元骨化不

17、全，骨缝的宽窄，枕骨的形状。胎鼠上枕骨骨化程度的分级标准如下:一一0级:上枕骨成片状或哑铃状，两侧骨化点完全融合，融合处宽度大于两侧的1/30一-1级:上枕骨两侧骨化点相连，相连处宽度小于两侧的1/3。一-ll级:上枕骨两侧骨化点不相连，但可清楚地见到两个较大的骨化点。一-ill级:上枕骨两侧的骨化点不相连，仅见小骨化点或仅见一侧骨化点。一-N级z元上枕骨骨化点。A.10.2 胸部骨髓z正常胸骨为6块，畸形时可有骨髓错位及骨化不全，注意观察第2胸骨和第5胸骨。小鼠正常肋骨为13对，观察有元多肋、少肋、肋骨分叉、融合、波状肋等畸形。A. 10.3 四肢骨:检查骨化程度、长短粗细、指趾骨的发育状况

18、。A.11 胎鼠内脏徒手切片检查将胎鼠从Bouins液中取出，自来水冲净。测量每只胎鼠身长及尾长。A.12 头部切片将胎鼠放在蜡板或木板上，第1刀由嘴开始经两耳切开，暴露舌、腾、上唇和下颁，检查舌有元异常，有元膊、唇裂。将头翻过来前背向上，切剩下的切片。第2刀从眼睛前面切下，暴露鼻中隔、鼻窦，记录鼻腔是否通。第3刀平眼切下，暴露脑鼻叶，品中隔后区的大部分及鼻咽腔、眼组织、视网膜、玻璃体、晶状体和角膜，检查这些组织结构有元异常。第4刀从眼后切开，暴露大脑半球和侧脑室，并注意有元畸形和扩张。第5刀横切大脑半球，暴露间脑的第E脑室、侧脑室、脉络膜等检查这些部位有元异常。A.13 内脏切片栓查沿胸腹壁

19、中线和肋下沿水平线各切一刀，暴露胸腔与腹腔内脏，检查各脏器有无异常。A.14 统计应用适当的统计学软件对数据进行分析处理。各组母鼠平均体重，胎鼠体重、身长、尾长，计量资料以均数士标准差(王:l:s)表示，数据采用F检验进行显著性分析。活胎、死胎、畸形、吸收胎等计数资料用百分率表示，数据采用扩检验进行显著性分析。一一一活胎率=活胎数/胎鼠数X100%; 一死胎率=死胎数/胎鼠数X100%; 一一-吸收胎率=吸收胎数/着床数X100%; 一一畸形率=畸形仔鼠数/受检胎鼠数X100%; 一一孕鼠体重净增长=解剖前体重一受孕第6天体重一含胎子宫重。5 GBZ/T 240.21-2011 B.1 茜素红

20、渡配制方法冰醋酸纯甘油附录B(资料性附录)茜素红液和Bouins液配制方法5 mL 10 mL 1%水合氯醒60 mL 临用时用1%KOH稀释成0.1%的应用液。B.2 Bouins液配制方法6 苦味酸饱和液甲醒冰醋酸混合使用。75 mL 25 mL 5 mL -FON-N.O叮NHN因。华人民共和国家职业卫生标准化学晶毒理学评价程序和试验方法第21部分:致畸试验GBZ/T 240.21-2011 国中祷中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045 网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销* 印张o.75 字数13千字2011年10月第一次印刷开本880X 1230 1/16 2011年10月第一版晤16.00元定价书号:155066. 2-22234 如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533GBZ/T 240.21-2011 2011年11月11日F002 打印H期: