GB T 5009.30-1996 食品中叔丁基羟基茴香醚(BHA)与2,6-二叔丁基对甲酚(BHT)的测定方法.pdf

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1、中华人民共和国国家标准食品中叔丁基控基面香酷(BHA)与2.6-二叔丁基对甲酣(BHT)的测定方法Method for determinatlon of butyJated hydroxyaniooJe and butyJated hydroxytoluene in foodo 1 主题内容与适用范围本标准规定了糕点和植物泊等食品中BHA、BHT的测定方法。本标准适用于糕点和植物油等食品中BHA与BHT的测定.GB/T 5009. 30 1996 代替GB5009. 3085 最低检出浓度g气相色谱法最低检出量为2降，油脂取样量为O.5 g时最低检出浓度为4mg/kg o 比色法最低检出量为1

2、0阔，油脂取样量为0.25g时最低检出浓度为4mg/kg o 2 引用标准GB/T 5009.6 食品中脂肪的测定方法第一篇气相色谱法(第一法)3 原理样品中的叔丁基瓷基菌香隧(BHA)和2.6二叔丁基对甲盼(BHA)用石油隧提取，通过层析柱使BHA与BHT净化，浓缩后，经气相色谱分离后用氢火焰离子化检测器检测，根据样品峰高与标准峰高比较定量。4 试剂4. 1 石油隧2沸程30-600C。4.2 二氯甲烧。4.3 二硫化碳.4.4 无水硫酸锅。4.5 硅胶:60-80目于120C活化4h放干燥器备用。4.6 弗罗里砂土(Florisil):60-80日，于120C活化4h放干燥器中备用.4.

3、7 B日A、BHT混合标准储备液g准确称取BHA、BHT各0.1000 g混合后用二硫化碳溶解，定容至100 mL.此溶液分别为每毫升含LOmgBHA、BHT.置冰箱保存。4.8 BHA、BHT混合标准使用液s吸取标准储备液4mL于100mL容量瓶中，用二硫化碳定容至100mL.此溶液分别为每毫升含0.040mgBHA、BHT.置冰箱中保存。5仪器51 气相色谱仪s附FID检测器。中华人民共和国卫生部1996-06-19批准1996-09-01实施16 5 2 蒸发器g容积200mI,. 5. 3振荡器。5.4 层析柱:lX30cm玻璃柱，带活塞。G嚣/古部在9.30-19965. 5 气相色

4、i普拉.-i走1.5 m，内径3mm玻璃枝，于GasChrom Q(80-100日担体上涂10%(m/m)QF斗。6样品处理6. 1 试样的制备采取0.5kg含油脂较多的样品，1kg含油脂少的样品，然后用对角线取2/4或2/6或根据串串品情汲取有代表性样品，在玻璃乳钵中研碎，混合均匀后放置广口瓶内保存于冰箱中，6.2 旨Z幸的提取6.2.1 含1毒瘾离前样品如桃酥等)，称毒虫50.0g.混合均匀，登于25号四L具塞锥形瓶中，直在5岳阳L石浓重盖沸程为30-60l:)，放量过夜，惑决这滤级过滤窟，提t1E留较落剿，残留黯草草备用.6.2.2 含汹黯中等前祥品如蛋糕、江米条等)，称取100g左右，

5、混合均匀，置于钩。mLJ电善事锥形瓶中，加100-200mL石油黯沸程为30-60C)，放t过夜，用快速滤纸过滤后，减压因牧挥军剂，残留指肪备用。6.2.3 含油脂少的样品(如面包、饼干等)，称取250-30Qg混合均匀后，于500mL具察镀形瓶中，加入滔最石油隧浸泡样品，放置过夜，用快速滤纸过滤后，减压回收溶剂，残留脂肪备用。7分析步骤7. 1 试料的制备7. 1. 1 层析柱的J!itJ备s子层析柱底部加入少戴被璃棉，少量无水硫酸锅，将硅胶-弗罗里砂土(6十4)共10嚣，用石油画童湿法t!i合装柱，柱顶部再加入少最无水硫酸锅，7.1.2 试样制备s称取6.2制备的腾坊。.50-1.00g

6、J苦i5mL石油磁溶解移入7.1. 1的层在野校上，再以100mL二氯审统分五次淋泼，合并淋泼泼，减琢浓缩远子时，用二藻化碳定容至2mL.该滚滚为待泌滚滚。7疆1.3植物油试料的和j备z称取混合均匀样.2.在Qg放入50mL烧杯中，如30mL石汹醒醒溶解转移到7.1.1层析柱上，再用lOmL石油重量分数次就搬烧杯并传移到层析柱，用100四L二氯甲统分五次淋洗，合并淋洗液，减压浓缩近干，用二硫化碳起然mL，该溶液为待测溶液。7.2 测定注入气相色谱3L标准使用液，绘制色谱阁，分别量取各组分峰高或面积，进3L样品待测游液(!t:视样品含量而定)，绘制包谱图t分别取峰高l!.tjj耳积，与标准峰高或

7、面积比较计算命鸳。7.3 汁算m=幻hl. VIft、vIHfdp一整一y y .在fnvft尘:川。;.t中g刑一待测溶液BHA(或BHT)的m:J量，mg;h量一注入色谱样品中BRAG卖主陆瀚海敝蘸sh，一标准使用液中BHA(或BHT)灼峰离草草草草草需2ve一注入色谱样品草草尊重的体积草草草喜事g，V牛二一待泌样品定窑的体穗，mL.; v，一一注入包游中标准使用液梅体积;mL，CF-一标准使用液的浓度.mg/mL.H( 1 ) 11 GB/T切09.30-1996X一旦三i旦旦j - m, X 1 000 式中:Xj一一-食品中以脂肪计BHA(或BHT)的含量，g/kg，mj一一待测济液

8、中BHA(或BHT)的质量tmgJ叫一一油脂质量或食品中脂肪的质量)，g。结果的表述s报告平行测定算术平均值的二位小数值.7.4 允许差相对相差(BHA、BHT)运15%07.5 其他BHA、BHT气相色谱图s气相包谱参考条件，担IJ. f四色谱柱d是1.5 m，内径3阻m玻璃栓，1)%(m!m)QF-l的GasCIu-OmQ(80-100吕)0检测器:FIDo温度z检测窒200C，进样口200C，往温140C0 载气流量，氯气(N，)70mL/min，氢气(H，)50mL/min，空气500mL/mino 第二篇!薄屠tfa遭法(第二法8 原理. ( 2 ) 用甲醇提取泊脂或食品中脂肪的抗氧

9、化剂，用薄层色谱定性，根据其在薄层板上显色后的最低撞出量，与标准品最低检出量比较而概略定量，对高脂肪食品中的BHT、BHA、没食子酸丙酶(PG)能定性检出.18 9试lliJ以下试剂均为分析纯。9. 1 甲醇。9. 2 石油商量(3060C)0 9. 3 异辛烧。9.4 丙隅。9.5 冰乙酸。9.6 正己烧.9.7 二氧六环。9.8 硅胶G，薄层用。9.9 聚酷胶粉:200目。9.10 可溶性淀粉。GB/T 5009.30-1996 9.11 BHT、BHA、PG混合标准溶液的配制z分别准确称取BHT、BHA、PG各10.0mg.分别用丙酣溶解转入三个10mL容量瓶中，用丙嗣稀释至刻度，每毫升

10、含1.0 mgBHT、BHA、PG.吸取BHT(1. 0 mg/mL)1. 0 mL、BHAO.0 mg/mL)、PGO.0 mg/mL)各0.3mL置同一5mL容量瓶中，用丙酬稀释至刻度。此溶液每毫升含0.20mgBHT、0.060mgBHA、0.060mgPG。9.12 显色弗IJ:2.6-二氯酿氯亚胶的乙醇溶液(2g/L)。10仪器10. 1 减压蒸馆装置。10.2 浓缩瓶具刻度的尾管。10.3 层析槽a. 24 cmX6 cmX4 cm, b. 20 cmX13 cmX8 cmo 10.4 玻璃板:5cmX20cm、10cm20 cm. 10.5 微量注射器:10L。11 分析步骤11

11、. 1 提取11.1.1 植物泊(花生泊、豆油、菜籽泊、芝麻油):称取5.00g油量10mL具塞离心管中，加入5mL甲醇，密塞振播5mn，放置2min，离心(30003 500 r/min)5 min.吸取上层清液置25mL容量瓶中，如此重复提取共五次，合并每次甲醇提取液，用甲膊稀稀至J度。吸取5mL甲醇提取液置一浓缩瓶中，于40C水浴上减压浓缩至0.5mL.留作薄层色谱用。11. 1.2 猪油g称取5.00g猪油量501llL具磨口的锥形瓶中，加入25.mL甲醇，装上冷凝管于75C水浴上放置5min，待猪油完全溶化后将锥形瓶连同冷凝管一起自水浴中取出，振摇30s.再放入水浴30 s，如此振摇

12、三次后放入75C水浴，使甲醇层与泊层分清后，将锥形瓶连同冷凝管一起置冰水浴中冷却，猪油凝固，甲醇提取液通过滤纸滤入50mL容量瓶中，再自冷凝管顶端加入25mL甲醇，重复振摇提取一次，合并二次甲醇提取液，将该容量瓶置暗处放置，待升至室温后，用甲醇稀释至刻度。吸取10mL甲醇提取液置一浓缩瓶中，于40C水浴上减压浓缩至0.5mL.留作薄层色谱用。11.1.3 食品(油炸花生米、酥糖、巧克力、饼干h按6.2测定脂肪的含量，并称取约2.00g的脂肪，视提取出的油脂是植物油还是动物性脂肪而决定提取方法。可按11.1. 1或11.1. 2操作。11. 2 测定19 GB/T 5009.30-1996 11

13、. 2. 1 薄层板的制备11. 2.1.1 硅胶G薄层板g称取4g硅胶G置玻璃乳钵中，加10mL水，研磨至粘稠状，铺成5cmX 20 cm的薄层板三块，置空气中干燥后于80C烘1h，存放于干燥器中。11.2.1.2 聚酿胶板z称取2.4g聚酸胶粉，0.6g可溶性淀粉置于玻璃乳钵中，加约15mL水，研磨至浆状铺成10cmX20 cm的薄层板三块，置空气中干燥后于80C烘1h，置干燥器中保存。11. 2. 2 点样11. 2. 2. 1 用10L微量注射器在5cmX20 cm的硅胶G薄层板上距下端2.5cm处点三点z标准溶液5L、祥晶提取液6-30L、标准溶液5L。11. 2. 2. 2 另取一

14、块硅胶G薄层板点三点g标准溶液5L、样品提取液1.5-3. 6L、加标准溶液5L。11. 2. 2. 3 用10L微量注射器在10cmX20 cm的聚戳胶薄层板上距下端2.5cm处点z标准溶液5L，样品提取液10L，加标准溶液5L，边点样边用吹风机吹干，点上一滴吹干后再继续滴加。11.2.3 展开11.2.3.1 溶剂系统硅胶G薄层板z正己烧-二氧六环-乙酸(42+6十3)，异辛婉-丙盲目-乙酸(70+5+12)。聚醺胶板ga. 甲醇-丙酬-水(30十四十10)，b. 甲醇-丙嗣-水(30十四十12.5), C. 甲醇-丙嗣水(30+10+ 15)。对甲醇一丙嗣-水系统，芝麻油只能用a、菜籽泊

15、用b，食品用c。展开系统中水的比例对花生泊、豆泊、猪油中PG的分离无影响.将点好祥的薄层板置预先经溶剂饱和的展开槽内展开16cm. 11. 2. 3.2 展开11. 2. 3. 2. 1 硅胶G板自层析槽中取出，薄层板置通风橱中挥干至PG标准点显示灰黑色斑点.p llJ认为溶剂巴基本挥子，啧显色剂，置110C烘箱中加热10min，比较色斑颜色及深浅，趁热将板置氨蒸气槽中放置30s，观察各色斑颜色变化.11. 2.3.2.2 聚酸胶板g自层析槽中取出薄层板置通风橱中吹子，喷显色剂，再通风挥干，直至PG斑点清晰。11. 2. 4评定11. 2. 4. 1 定性根据样品中显示出的BHT、BHA、PG

16、点与标准BHT、BHA、PG点比较R，值和显色后斑点的颜色反应定性.如果样液点显示检出某种抗氧化剂，则样品中抗氧化剂的斑点必须与加入内标的抗氧化剂斑点重叠。当点大量样液时由于杂质多，使样品中抗氧化剂点的R，值略低于标J准点。这时必须在样品点上滴加标准溶液作内标，比较R，值。BHT BHA PG 袭1BHT、BHA、PG在薄层板上的最低撞出量、R，值及斑点颜色R，僵，四胁-晶d咱-g 0.73 1 0.37 q哥0.04 。.3 色斑颜色桔红紫红灰黄棕R.值0.52 0.66 聚院，JIt极。.3 0.3 注，PG在硅胶G扳上定性及半定量不可靠，有干扰且R，值太小.须进一步用囊酷胶板展开回20

17、色斑颜色灰棕蓝GB/T 5009.30-1996 11.2.4.2 概由各定量及限度试验根据薄层极上祥浓点抗氧化剂所显示的-.斑深钱与标准抗氧化剂色斑比较而估计含溃，如果在11.2.2.1条下的硅胶G薄层板上，样品中各抗氧化剂所显色斑浅子标准抗氧化剂色斑，则桦品中各抗氧化剂含量在本方法的定性检出限量以下(BHA、PG点样量为6L，BHT点样量为30L)。如果在11.2.2.2条下的硅胶G薄层板上，样品中各抗氧化剂所显色斑的颜色浅于标准抗氧化剂色斑，则样品中各抗氧化剂的含量没有超过使用卫生标准创刊A、PG点样量为1.5L.BHT点样量为3.日Ll。如果桦品点色斑颜色较标准点深，可稀释后主重新点样

18、，估计含量。11. 3 计算刑3X 1 000 X几，=一咛，.川. m叫，X卡?DX1000XlB ;tJ:中，X，一一本芋品中抗氧化剂(BHA，BHT、PG)以黯肪汁的含量，g/kg，盹薄层板上苦睡得祥品J点抗氧化剂的孩蠢，将手只一一供薄层层析蹲点辛辛液定容后的体积，mLJ只一满加样液的体积，mL;D一一样液的稀释倍数，叫一一定容后的薄层层析用祥液相当于样品的脂肪质量，表2所示样品中各抗氧化剂定性检出限度由!fmg/kg抗氧化剂BHT BHA l, 、油炸花生米2S 10 酥糖10 10 饼干10 10 巧克力25 25 油路2S 25 L 第三篇比色法第三法12 原理PG 10 10 1

19、0 25 25 样品通过水蒸气蒸馆，使BHT分离，用甲醇吸收，遇邻联二酋香胶与亚硝酸销溶液:E成撩红色，用22氯甲惋提取，与标准比较定量.13试剂13.1 无水氯化钙，13.2 骂骂董事。13. 3 三氯甲婉a13.4 甲董事(50%) 13. 5 亚硝酸锁滚滚(3g/L)，避光保存。13. 6 邻联二茵香胶挥军液g称取125mg邻联之在古香膀子50mL棕色容量瓶中，加25mL f廓，报摇使余部溶解，加50mg活性炭，振摇5min，过滤，取20mL滤液，置于另一50mL棕色容量瓶中，加盐酸(121 GB/T 5009.30-1996 +11)至J度。临用时现配并避光保存。13.7 BHT标准溶

20、液3准确称取0.050g BHT.用少量甲醇溶解，移入100mL棕色容量瓶中，并稀释至刻度，避光保存。此溶液每毫升相当于0.5mg BHTo 13. 8 BHT标准使用液:1情用时吸取1.0 mL BHT标准溶液，置于50mL棕色容量瓶中，加甲醇至刻度，混匀，避光保存。此溶液每毫升相当于10.0ILgBHT。14 仪器14. 1 水蒸气蒸馆装置。14.2 甘油浴。14.3 分光光度计.15 分析步骤15. 1 样品处理称取2.005.00g样品(约含0.4mg BHT)于100mL蒸馆瓶中，加16g无水氯化钙粉末及10 mL水，当甘泊浴温度达到IJ165C恒温时，将蒸馆瓶浸入甘油浴中，连接好水

21、蒸气发生装置及冷凝管，冷凝管下端浸入盛有50mL甲醇的200mL容量瓶中，进行蒸馆，蒸馆速度每分钟1.52 mL.在5060 min内收集约100mL馆出液(连同原盛有的甲醇共约150mL.蒸汽压不可太高，以免油滴带出)，以温热的甲醇分次洗涤冷凝管，洗液并入容量瓶中并稀释至J度。15.2 测定准确吸取25mL上述处理后的样品溶液，移入用黑纸(布)包扎的100mL分液漏斗中，另准确吸取。，1.0.2. 0,3. 0,4. 0,5. 0 mL BHT标准使用液(相当于0，10，20，30，40，50gBHT)，分别置于黑纸(布)包扎的60mL分液漏斗，加入甲醇(50%)至25mL。分别加入5mL邻

22、联二菌香胶溶液，混匀，再各加2 mL亚硝酸锹溶液(3g/L)，振摇1min，放置10min，再各加10mL三氯甲饶，剧烈振摇1mn，静置3 min后，将三氯甲烧层分入黑纸布包扎的10mL比色管中，管中预先放入2mL甲醇，混匀。用1cm比色杯，以三氯甲烧调节零点，于波长520nm处测吸光度，绘制标准曲线比较。16 计算x= .丁饵，X 1 00。. . .( 4 ) em只有Xl000 X 1呗0式中:X一一样品中BHT的含量.g/kg;m5一测定用样液中BHT的质量，闭m，一-样品质量.g;V , 蒸馆后样液总体积，mL，V，一测定用吸取样液的体积，mLo结果的表述:报告算术平均值的二位有效数。17 允许差相对相差运10%。22 G B /T 5009. 30-1996 附加说明2本标准由卫生部卫生监督司提出.本标准第一法由江苏省卫生防疫站负责起草，第二法由卫生部食品卫生监督检验所、武汉市卫生防疫站、郎嘟市卫生防疫站负责起草，第三法由上海市卫生防疫站负责起草.本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释.23