GB T 28091-2011 剑线虫属(传毒种类)检疫鉴定方法.pdf
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1、ICS 65.020.01 B 16 道国中华人民共和国国家标准GB/T 28091-2011 剑线虫属(传毒种类)检疫鉴定方法Detection and identification of Xiphinema spp. as virus vectors 2011-12-30发布、量生蚂防伪F 中华人民共和国国家质量监督检验检夜总局中国国家标准化管理委员会2012-06-01实施发布GB/T 28091-2011 目。吕本标准按照GB/T1. 1一2009给出的规则起草。本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)提出并归口。本标准起草单位:中华人民共和国珠海出入境检验检疫局、浙
2、江大学和珠海市质量计量监督检测所。本标准主要起草人z张卫东、郑经武、廖力、蒋立琴、张燕、郭皑、陈其文、乐海洋、徐森锋、迟远丽、吴长坤、彭仁。I GB/T 28091-2011 剑线虫属(传毒种类)检疫鉴定方法1 范围本标准规定了剑线虫属传毒种类的检疫鉴定方法。本标准适用于植物根系、土壤及栽培介质中剑线虫属传毒种类的检疫鉴定。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T 24830 拟毛剌线虫属(传毒种类)检疫鉴定方法SN/T 1157 进出境植物苗木检疫规程
3、SN/T 1158 进出境植物盆景检疫规程3 剑线虫属(传毒种类)基本信息中文名:剑线虫属(传毒种类)。学名:Xiphinemaapp.。英文名:virus vectors species of Dagger nematode。剑线虫属传毒种类隶属于线虫门Nematoda(Rudolphi, 1808) Lankester, 1877、元侧尾腺纲Adenophorea Linstow , 1905、矛线目DorylaimidaPearse, 1942、长针线虫科Longidoridae( Thorne, 1935) Filipjev,1934剑线虫属XiphinemaCobb ,1913 o
4、剑线虫传毒种类是植物根系的迁移性外寄生线虫,主要依靠土壤、介质土和带根苗木、球茎等寄主植物材料的调运传播。剑线虫属(传毒种类)的其他信息参见附录Ao4 方法原理将现场检疫中发现的介质土、土壤以及植株,送实验室经漏斗法或浅盘法分离获得线虫,制成临时或永久玻片,显微镜下对雌、雄虫主要鉴定特征仔细观察并测量数据,依据本标准描述的剑线虫属传毒种类形态鉴定特征与其基本生物学信息,按系统分类学方法,鉴定其生物学种类。5 仪器和用具仪器和用具按GB/T24830执行。6 试剂试剂按GB/T24830执行,分样筛选用300目。1 GB/T 28091-2011 7 现场检测对苗木、球茎等寄主材料进行检查,注意
5、观察苗木的生长状况、根部为害状,以及是否带介质、土壤等。重点选取植株矮化、萎缩,根部肿大、粗短、畸形,侧根丛生等症状的苗木及根际介质或土壤,如无可疑症状则按要求随机取样。取样后立即置密封塑料袋,标记后及时送实验室检测。具体抽样比例按SN/T1157和SN/T1158执行。8 实验室检测8. 1 线虫分离线虫分离按GB/T24830执行。8.2 体视显微镜镜检分离获得的水样在10倍以上体视显微镜检查,观察线虫的形态结构。8.3 标本制作标本制作按GB/T24830执行。8.4 生物显微镜观察、摄影和测量应针对雌、雄虫主要鉴定特征仔细观察并显微摄影,重点包括整体形态、头区轮廓、齿尖针、尾部形态、雌
6、虫生殖系统及雄虫交合刺等,并在每张图片上加相应标尺,测量并计算、b,c和V等值。9 形态鉴定特征9. 1 剑线虫属形态鉴定特征9. 1. 1 雌虫虫体细长,热杀死后虫体直或腹弯或呈侧器囊倒马锺形或漏斗形;齿尖针细长、针状、高度硬化,齿尖针基部呈叉状,齿托基部呈显著的凸缘状;齿针导环为双环、后环高度硬化,导环位于齿尖针后部靠近齿尖针与齿托相连接处;背食道腺核位于背食道腺开口附近、大于腹亚侧腺核。雌虫生殖腺有4种类型:前后生殖腺均发育完全的双生殖腺型、前生殖腺退化但结构尚完整的双生殖腺型、前生殖腺退化且结构不完全的假单生殖腺型和无前生殖腺的单生殖腺型等,有些种类的子宫内有骨化结构。尾部形态多样:短
7、、半球形、有或元1个指状尾突,圆锥形,前部圆锥形后部渐变细成丝状等。9. 1. 2 雄虫雄虫(有些种至今未发现体长、形态、头部、口针、食道和尾形的特征均似雌虫,双生殖腺、对伸,交合刺矛线型、粗壮、有侧附导片,斜纹交配肌发达、由泄殖腔向前延伸,泄殖腔区有1对交配乳突,其前一段距离有1列腹中交配乳突(最多7个)。9.2 剑线虫属传毒种类的形态鉴定特征剑线虫属传毒种类形态鉴定特征参见附录B和附录C。2 GB/T 28091-2011 9.2. 1 美洲剑钱虫(x.americanum Cobb, 1913) 雌虫虫体细长(1.4 mm1. 7 mm),形成一个开阔的螺旋形;唇区半球形、轻微膨胀;齿尖
8、针中空,长约为72m,基部分叉;齿托有凸缘,长约为45m47m;双生殖腺,在输卵管处回折,子宫伸长,窄、内元特殊分化结构;尾呈圆锥形,背面有一大弯,末端半球形,末端角质层元盲管。雄虫极少,虫体与雌虫相似,但后三分之一部分比雌虫弯曲更大;精巢成对,伸展而对称:交合剌很直,骨化,长为29m。9.2.2 贝克剑线虫(X.bakeri WilIiams, 1961) 雌虫虫体细长(3.7 mm4. 7 mm),热杀死后弯曲成钩状;唇区与体壁不连续,轻微缝缩;口针细长,齿针和齿托部之和超过200m;阴门位置较前,双卵巢,两侧生殖系统结构完整,长度相同或几乎相同,元子宫分化;尾短圆锥形,末端有一指状突。雄
9、虫极少发现。9.2.3 拜西尔剑钱虫(X.basiri Siddiqi, 1959) 雌虫虫体细长(2.9 mm3. 5 mm),弯曲成钩状或螺旋形;唇区轻微缝缩,齿尖针和齿托长度分别为120m132m和54m70m;生殖腺成对,两侧生殖系统结构完整,长度相同或几乎相同,子宫存在假Z字形结构;尾短圆锥形,末端有一明显指状突。雄虫稀少。9.2.4 X. brevicollum Lordello, 1961 雌虫虫体细长(1.8 mm2. 2 mm),弯曲呈螺旋形或钩状;唇区与体壁不连续,继缩;齿尖针和齿托之和在86m150m之间;双生殖腺,两侧生殖系统结构完整,长度相同或几乎相同,子宫元分化器官
10、;尾短圆锥形或半圆形,背面呈一个突圆形的大弯,腹面呈指状,尾尖钝圆。9.2.5 加州剑线虫(X.californicum Lamberti, 1979) 雌虫虫体细长(1.8 mm2. 2 mm),弯曲呈螺旋形或钩状;唇区与体壁不连续,继缩;齿尖针长83m98m;双生殖腺,对伸,子宫无分化,Z宇型器官缺失;尾短圆锥形至半圆形,背面呈一个突圆形的大弯,腹面呈指状,尾尖圆锥形,末端角质层元盲管。9.2.6 考克斯剑钱虫(X.coxi Tarjan, 1964) 雌虫虫体细长(3.1 mm4. 0 mm),热杀死后呈C字形;唇区轻微锺缩,齿尖针和齿托长度分别为113m127m和68m82m;双生殖腺
11、,两侧生殖系统结构完整,长度相同或几乎相同,子宫存在假Z字形结构;尾短圆锥形,末端有一指状突。雄虫稀少。9.2.7 裂尾剑线虫(X.diversicaudatum Micoletzky, 1927) 雌虫虫体细长(4.0mm 5.5 mm),热杀死后体弯曲:唇区扁,光滑,缆缩;齿尖针平均长度为143m;双卵巢,折叠,两侧生殖系统结构完整,长度相同或几乎相同,每个子宫有一个明显的假Z字形器官;尾部尾短圆锥形,末端有一指状突。雄虫虫体与雌虫类似,齿尖针长134m,基部有分叉,齿托长75m,导环距齿针尖前端125m;交合刺强大,中央弯曲,长度为75m,侧引带15m。9.2.8 标准剑线虫(X.ind
12、ex Thorn, 1950) 雌虫虫体为长圆柱形(2.8mm 3. 6 mm),形成一个开阔的螺旋形;唇区为半圆形,有轻微锺缩;齿尖针中空,平均长度为126m,基部分叉与齿托形成牢固的连接,齿托长约为70m,有3个大的凸缘;生殖腺成对,在输卵管处回折,子宫腔高度肌肉化,长与体宽接近,元子宫分化,Z器官缺失;尾短圆锥形至半圆形,末端有圆形或半圆形指状突,背面呈一个突圆形的大弯,腹面呈指状。雄虫数量极少,3 GB/T 28091-2011 对繁殖不起决定性作用;虫体形态,唇区,食道,尾形等都与雌虫相似;交合刺粗状,但不骨化,长约为63m。9.2.9 意大利剑钱虫(x.italiae Meyl ,
13、 1953) 雌虫虫体细长(2.3 mm2. 8 mm),热杀死后弯曲成针长度8盯7m9冈6m,齿托长度为54m6归4m;双卵巢,两侧生殖系统结构完整,长度相同或几乎相同,元子宫分化;尾长圆锥形。雄虫极少发现。9.2. 10 里弗斯剑钱虫(X.rivesi Dalmasso, 1969) 雌虫虫体细长(1.7 mm2. 1 mm),弯曲呈螺旋形或钩状;唇区与体壁连续,元锺缩;齿尖针长度90m101m;双卵巢,两侧生殖系统结构完整,长度相同或几乎相同,子宫元分化,Z字形器官缺失;尾短圆锥形至半圆形,背面呈一个突圆形的大弯,腹面呈指状,尾尖端圆,末端角质层无盲管。9.2. 11 塔简剑线虫(X.t
14、arjanense Lamberti, 1979) 雌虫虫体细长(1.2 mm1. 4 mm),弯曲呈螺旋形或钩状;唇区与体壁不连续,撞缩;齿尖针长度78m88m;生殖腺成对,两侧生殖系统结构完整,长度相同或几乎相同,子宫元分化,元Z字形器官,尾短圆锥形至半圆形,背面呈一个突圆形的大弯,腹面呈指状,尾尖圆锥形,末端角质层元盲管。9.3 自j线虫属主要传毒种类测计值剑线虫属传毒种类的测计值见表10表1剑线虫属传毒种类测计值测计值传毒线虫种类L ODS ODP V a b C 口1口1m m % 美洲剑线虫 1.41.7 4657 5. 38. 2 3952 7483 4247 49-53 x.
15、americanum 舍1. 6 46 8.9 40 74 49 贝克剑线虫 3. 74. 8 68. 998. 8 7.1-11. 4 55.6-83.1 28.3-31. 8 X. bakeri 合4. 15 68 8. 7 63.9 拜西尔剑线虫 2. 93. 5 56-75 4.2-8.0 5877 120132 5470 4953 X. basiri 合3.1-3.3 57-73 5.6-6.3 59-66 124-126 64-66 40.7- 5.6- 60.3- 84. 7 48.8- 1. 8-2. 2 51-54 X. brevicollum 50.1 7.7 94 108
16、.2 60 合加州剑线虫 1. 8-2. 2 52-68 5.5-8 58-76 8398 44-53 49-55 X. californicu: 告1. 8 68 5.9 61 89 48 考克斯剑线虫 3.1-4.0 66-82 7.5-9.2 59-82 113-127 68-82 40-46 X. coxi 合3.5-4.0 74.4-96.。8.9-10.6 59.3-72 113-123 66-70 裂尾剑线虫 4.0-5.5 57-92 6.6-11.4 61-134 130-157 70-97 39-46 X. diversicaudatum 合4.1-6.2 57-96 7.
17、4-11.3 55-100 131-153 72-90 4 GB/T 28091-2011 表1(续)测计值传毒线虫种类L ODS ODP V a b E 口1口1m m % 标准剑线虫 2.8-3.6 54-61 6.2-8.0 72-98 123-134 74-81 40-42 x. index 合3.6 63 7.3 88 意大利剑线虫 2.3-2.8 75-84 6.4-7.3 30-40 87-96 54-64 41-50 X. italiae 合2.4-3.4 79-101 6.4-9.2 47- 50 93-102 里弗斯剑线虫 1. 7-2.1 37-49 5.7-6.9 51
18、-59 90-101 48-57 51-54 X. rivesi 合塔简剑线虫 1. 2-1. 4 34-42 5.4-6.1 38-42 78-88 43-47 53-56 X. tarjanense 合注:L一体长;a一一体长/最大体宽;b-一体长/体前端至食道与肠连接处的距离;c一一体长/尾长;ODS一一Odontostyle齿尖针长度;ODP一一一Odontosphore齿托长度厅一一体前端至阴门处距离X100/体长。10 结果判定将观察、测量获得的各鉴定特征数字代码与多歧检索表按字母顺序进行核对,如果所有数字均与某种相符,则初步鉴定为该种。若初步鉴定为剑线虫属传毒种类,且符合第9章对
19、应形态鉴定特征以及表1测计值,可判为检出剑线虫属传毒种类,其寄主和地理分布等信息可供参考。门样晶保存若鉴定为剑线虫属传毒种类,则将剩余的线虫杀死、固定制成永久玻片保存;也可以用4%甲醒固定后长期保存。标签上应注明样品编号、种名、寄主、产地、制作人和制作时间等。对已鉴定出带有剑线虫的植物材料,经登记后,要保存在5oClO oC及干燥、防鼠防虫处,并标明样品编号、截获日期、截获人、寄主名称、运输工具名称、输出国名等,样品需至少保存6个月,以备复验、谈判和仲裁。5 G/T 28091-2011 附录A(资料性附录)剑线虫属(传毒种类)相关资料A.1 剑线虫属传毒种类以及传播的病毒种类见表A.l。表A
20、.1剑线虫属传毒种类以及传播的病毒种类介体线虫病毒1.樱桃铿叶病毒Cherryrasp leaf virus (CRLV) 美洲剑线虫2.烟草环斑病毒Tobaccoringspot virus (TRSV) X. americanum 3.番茄环斑病毒Tomatoringspot virus (ToRSV) 4.桃丛簇花叶病毒Peachrosette mosaic virus(PRMV) 贝克剑线虫X. bakeri 南芥菜花叶病毒Arabismosaic virus (ArMV) 拜西尔剑线虫虹豆花叶病毒Cowpeamosaic virus (CPMV) X. basirl X. brevi
21、collum 番茄环斑病毒ToRSV加州J线虫1.樱桃铿叶病毒CRLV2.番茄环斑病毒ToRSVX. californicum 3.烟草环斑病毒TRSV1.南芥菜花叶病毒ArMV考克斯剑线虫2.草莓潜隐型环斑病毒Strawberrylatent ringspot virus (SLRSV) X. coxi 3.烟草环斑病毒TRSV4.雀麦花叶病毒Bromemosaic virus (BMV) 1.南芥菜花叶病毒ArMV裂尾剑线虫2.悬钩子环斑病毒Raspberryringspot virus (RpRSV) X. diversicaudatum 3.雀麦花叶病毒BMV4.香石竹环斑病毒Carn
22、ationringspot virus (CRSV) 5.草莓潜隐型环斑病毒SLRSV标准剑线虫1.商芥菜花叶病毒ArMVX. index 2.葡萄错色花叶病毒Grapevinechrome mosaic virus (GCMV) 3.葡萄扇叶病毒Grapevinefanleaf virus( GFL V) 意大利剑线虫葡萄扇叶病毒GFLVX. italiae 里弗斯剑线虫1.樱桃铿叶病毒CRLVX. rivesi 2.烟草环斑病毒TRSV3.番茄环斑病毒ToRSV塔简剑线虫1.烟草环斑病毒TRSVX. tarjanense 2.番茄环斑病毒ToRSV6 GB/T 28091-2011 A.2
23、 剑线虫属传毒种类主要寄主及地理分布见表A.2。线虫名称美洲剑线虫X. americanum 贝克剑线虫X. bakeri 拜西尔鱼j线虫X. basirl X. brevicollum 加州剑线虫X. californicum 考克斯剑线虫X. coxi 裂尾剑线虫X. diversicaudatum 表A.2剑线虫属传毒种类主要寄主及地理分布主要寄主葡萄(Vitisspp. )、番茄(Lycopersicoesculentum)、桃(Prunusersica)、玫瑰(Rosaspp.)、结缕草属(Zoysia spp. )、草莓(Fragariavesca)、大豆(Glycinemax)和
24、杂草大花卷耳(Cerastium四19atum)、普通繁缕(Stellaria media)、黎(Chenoodium album)、草莓(Fragaria ananassa)、野茅(Dactylisglomerata)、悬钩子(Rubusidaeus)、马铃薯(Solanumtuberosum )、草莓(Fragariavesca)、黑麦(Lycoersiconesculentum)、豌豆(Pisumsativum)、宽色黎(Cheno户odiumama ranticolor)、越桶(Vacciniumcoymbosum) 向日葵(Helianthus annnus)、茄子(Solanumm
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