GB T 28086-2011 长针线虫属(传毒种类)检疫鉴定方法.pdf
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1、ICS 65.020.01 B 16 量昌中华人民共和国国家标准GB/T 28086-20门长针线虫属(传毒种类)检疫鉴定方法Detection and identification of Longidorus spp. as virus vectors 2011-12-30发布事宜码1l1伪/中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会2012-06-01实施发布GB/T 28086-20门前言本标准按照GB/T1. 1-2009给出的规则起草。本标准由全国植物检疫标准化技术委员会CSAC/TC271)提出并归口。本标准起草单位:中华人民共和国珠海出入境检验检疫局、中华人民
2、共和国宁波出入境检验检疫局、中华人民共和国云南出入境检验检疫局和珠海市质量计量监督检测所。本标准主要起草人z陈其文、张卫东、廖力、蒋立琴、顾建锋、杜宇、徐森锋、迟远丽、乐海洋、张慧娟、彭仁。I GB/T 28086-2011 长针线虫属(传毒种类)检疫鉴定方法1 范围本标准规定了长针线虫属传毒种类的检疫鉴定方法。本标准适用于植物根系、土壤及栽培介质中长针线虫属传毒种类的检疫鉴定。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T 24830 拟毛刺线虫属(传毒种类
3、)检疫鉴定方法SN/T 1157 进出境植物苗木检疫规程SN/T 1158 进出境植物盆景检疫规程3 长针线虫属(传毒种类)基本信息中文名:长针线虫属传毒种类。学名:Longidorus spp.。英文名:virus vectors species of Needle nematodeso 剑线虫属传毒种类隶属于线虫门NematodaCRudolphi , 1808) Lankester, 1877、元侧尾腺纲Adenophorea Linstow, 1905、矛线目DorylaimidaPearse, 1942、长针线虫科LongidoridaeCThorne,1935) Fil ipjev
4、,1934、长针线虫属LongidorusCMicoletzky,1922) Filipjev , 1934。长针线虫属传毒种类是植物根系的迁移性外寄生线虫,主要依靠土壤、介质土和带根苗木、球茎等寄主植物材料的调运传播。长针线虫属传毒种类的其他信息参见附录A。4 方法原理将现场检疫中发现的介质土、土壤以及植株,经漏斗法或浅盘法分离获得线虫,制成临时或永久玻片,显微镜下对雌、雄虫主要鉴定特征仔细观察并测量数据,依据本标准描述的长针线虫属传毒种类形态鉴定特征与其基本生物学信息,按系统分类学方法,鉴定其生物学种类。5 仪器和用具仪器和用具按GB/T24830执行。6 试剂试剂按GB/T24830执行
5、,分样筛选用300目。1 G/T 28086-2011 7 现场检疫对苗木、球茎等寄主材料进行检查,注意观察苗木的生长状况、根部为害状,以及是否带介质、土壤等。重点选取植株矮化、萎缩,根畸形、粗短、侧根消失等症状的苗木及根际介质或土壤,如元可疑症状则按要求随机取样。取样后立即置密封塑料袋,标记后及时送实验室检测。具体抽样比例按SN/T1157和SN/T1158执行。8 实验室检验8. 1 钱虫分离线虫分离按GB/T24830执行。8.2 体视显微镜镜检分离获得的水样在10倍以上体视显微镜检查,观察线虫的形态结构。8.3 标本制作标本制作按GB/T24830执行。8.4 生物显微镜观察、摄影和测
6、量应针对雌、雄虫主要鉴定特征仔细观察并显微摄影,重点包括整体形态、齿尖针、前唇区形态、侧器囊形态、雌虫阴道骨化结构及雄虫交合刺等,并在每张图片上加相应标尺。需观察、测量获得多岐检索表中各鉴定特征数字代码(参见附录白,并计算a,b、c和V等值。9 形态鉴定特征9. 1 长针线虫属鉴定特征9. 1. 1 雌虫虫体细长,热杀死后虫体直到弯成C形,有1排2排侧体孔。头部圆,连续或锺缩z侧器口小孔状、不明显,侧器囊袋状。齿尖针长、针状,不高度硬化,齿尖针基部平滑、不分叉,齿托长约为齿尖针长的三分之二、中等硬化,基部略厚但不呈凸缘状E齿针导环为单环,距头端的距离通常小于2倍头宽,偶尔位置较后(距头端距离达
7、齿尖针长的40%);有1个背食道腺和2个腹亚侧腺,背食道腺细胞核位于背食道腺开口后一段距离、小于腹亚侧腺细胞核;阴门横裂、位于虫体中部,双卵巢对伸、转折。尾短,呈弓圆锥形,端细圆或宽圆,有几对尾孔。9.1.2 雄虫长针线虫属部分种类雄虫未发现,雄虫双生殖腺、对伸,后精巢转折,交合刺粗大、向腹面弯,交合刺顶端部有短的附导片,斜纹交配肌显著、延伸至泄殖腔前几倍体宽处,泄殖腔区有1对交配乳突(有的种有2对3对),在其前有1列腹中交配乳突,最多有20个,有些种的部分腹中交配乳突交错排列成双排。长针线虫属与近似属的区别见表1。2 GB/T 28086-2011 表1长针线虫科各属的主要鉴别特征线虫种类鉴
8、定特征长针线虫属类长针线虫属拟长针线虫属剑针线虫属拟剑针线虫属剑线虫属Longidorus Longidooides Paralongidorus Xihidorus Paaxiphidous Xiphinema 单环,位于单环,位于单环,位于单环,位于单环,位于双环,位诱导环齿尖针前部齿尖针前部齿尖针前部齿尖针后部齿尖针后部于齿尖针后部齿尖针基部平滑平滑平滑或叉状叉状叉状叉状齿托基部不呈凸缘状不呈凸缘状不呈凸缘状凸缘状凸缘状凸缘状侧器口孔状横裂缝状横裂缝状小裂缝状或宽横裂缝状宽横裂孔状缝状伽j器囊袋状袋状漏斗状至fjJ袋状倒马铿状漏斗状至马铿状倒马俊状背食道腺小,位于背小,位于背小,位于背小
9、,位于背小,位于背大,紧接核大小及其食道腺开口后食道腺开口后食道腺开口后食道腺开口后食道腺开口后背食道腺位置一段距离一段距离一段距离一段距离一段距离开口9.2 长针线虫属传毒种类形态鉴定特征(参见附录B和附录。9.2. 1 阿普尔长针线虫(Longidorusapulus Lamberti, 1977) 雌虫虫体细长(5.1 mm9. 1 mm),热杀死后呈c字形;唇区扁平,有轻微继缩,唇区宽度14m17m,虫体前端至诱导环的长度27m34m;侧器囊大多对称二裂;齿尖针弱,长度为91m1l2m,齿托较长60m88m;尾部呈圆锥形。雄虫稀少。9.2.2 Longidorus arthensis
10、Brown, 1994 雌虫虫体细长(5.1 mm7. 6 mm),热杀死后虫体弯曲呈c形;唇区钝圆,有轻微缝缩,唇区的宽度大约为16m;侧器囊大而明显,存在二裂,延伸到口腔到导环距离的三分之二处;尾部钝圆锥形,尾长约为旺门处体宽。雄虫有发现,交合刺典型矛形。9.2.3 浙狭长针线虫(Longidorusattenuates Hooper, 1961) 雌虫虫体细长(5.2 mm7. 5 mm),热杀死后,虫体后半部形成稍大的弯曲,成c形。头部扁平,稍阔,有明显锺缩,继缩处体宽为导环处体宽四分之三。侧器囊大,基部对称二裂,延伸到口腔到导环距离的二分之一,侧器囊几乎围绕着头部,侧器孔很小;齿尖针
11、细长,是齿托的2倍长,并与齿托有简单的交叉E尾部背面凸起,呈锥形,尾长是胆门处体宽的1.5倍1.75倍。雄虫稀有,交合刺长45m。侧附导片末端二裂。9.2.4 短环长针线虫(Longidorusbreviannulatus Norton , 1975) 雌虫虫体细长(4.0 mm5. 9 mm),热杀死后常弯曲成c形,有时不规则;体细,平均体宽50m(除尾端部分);阴门处有轻微突起,阴门孔倾斜;唇区扁平,有锺缩;侧器囊二裂,延伸到几乎接近导环,侧气孔模糊,位于唇区后部;尾部圆锥形,但在有些成虫尾端有短而宽的突起。雄虫未发现。3 GB/T 28086-20门9.2.5 草皮长针线虫(Longid
12、oruscaes piticola Hooper , 196 1) 雌虫虫体细长(5.2 mm8. 2 mm),热杀死后虫体成C形;唇区圆球状,表面光滑,有锺缩,继缩处体宽少于导环处体宽的二分之一;侧器囊大,不二裂,呈长瓶状或袋状,延伸到口腔到导环距离的三分之二处;齿尖针细长,与齿托有简单的交叉,齿托略微超过齿尖针长度的二分之一;尾部背面凸起,呈圆至钝圆锥形,尾长接近与旺门处的体宽。发现雄虫,交合刺长90m,有附导片,雄虫与雌虫的比例通常为1: 20 9.2.6 折环长针线虫(Longidorusdiadecturus Eveleigh , 1982) 雌虫虫体细长(3.3 mm4. 0 mm
13、),热杀死后虫体直到弯成C形。虫体前端至诱导环的长度50m64m;齿尖针和齿托的长度分别为109m121m和55m-66m,尾部钝圆形。雄虫未发现。9.2.7 移去长针线虫Longidoruselongatus(de Man , 1876) Thorne, 1936J 雌虫虫体细长(4.5 mm6. 4 mm),热杀死后虫体直到弯成C形。唇区扁平,微维缩,缝缩处体宽占导环处体宽的二分之一到三分之二,口孔有16个乳突;侧器囊大,袋状,延伸到口腔到导环位置的距离的二分之一处,侧器口孔状,难辨认,位于唇区基部;齿尖针细长,与齿托有细微交叉,齿托为齿尖针的二分之一长度;尾部背面凸起,腹面平或稍凹陷,呈
14、圆锥形,尾长是旺门处体宽的1倍-1.3倍。雄虫在大多数种群中通常稀有或没有。9.2.8 卫矛长针线虫(Longidoruseuonymus Mali , 1974) 雌虫虫体狭长(6.0mm-7. 6 mm),热杀死后虫体向腹部弯区;唇区圆滑,前端扁平,唇宽约14m,深度维缩,口孔周围有16个乳突;侧器囊大,延伸到口腔到导环位置的二分之一距离,侧器囊基部不明显,有轻微的二裂。齿尖针长而细,齿托约为齿尖针的三分之二。尾长是旺门处体宽的1.3倍,尾部呈钝圆形。雄虫未发现。9.2.9 横带长针线虫(Longidorusf asciatus Roca , 198 1) 雌虫虫体细t长(6.6 mm8.
15、 5 mm),热杀死后稍呈14m,口孔处呈圆形,不锺缩;侧器囊不对称二裂,两裂片间有一定深度手齿尖针细t长,长度为1四02m1口19m,有齿托;尾部钝圆形。雄虫未发现。9.2. 10 瘦头长针线虫(Longidorusle ptoce phalus Hooper , 196 1) 雌虫虫体细长(3.5 mm6. 3 mm),热杀死后弯曲成C形;唇区圆形,有轻微缝缩,锺缩处体宽占导环处体宽的二分之一到三分之二,口孔处有16个乳突;侧器囊大,基部对称二裂,延伸至口腔到导环距离的二分之一,侧器孔不明显,位于唇乳突的外环;尾部背面凸起,圆锥形,腹侧有轻微的凹陷,约为旺门处体宽的1倍1.4倍。雄虫很少发
16、现。9.2. 11 大体长针线虫(Longidorusmacrosoma Hooper , 1961) 雌虫虫体粗壮(6.8 mm12 mm),热杀后虫体向腹部弯曲;唇区扁平至轻微凹陷,有缝缩,锺缩处体宽约占导环处体宽的二分之一;侧器大,呈长瓶状,基部有二裂,但从背腹面看则呈袋状;齿尖针细长,齿托超过齿尖针长度的二分之一,尾部短,半圆形到钝圆形,为旺门处体宽的二分之一到三分之二。雄虫普遍,交合刺大,长105m,钝弓形。GB/T 28086-2011 9.2. 12 马丁长针线虫(Longidorusmartini Mer町,1966)雌虫虫体细长(3.2 mm4. 3 mm),热杀死后虫体向腹
17、部弯区;虫体前端明显变细,唇区有明显缝缩;虫体前端至诱导环的长度大于50m;侧器囊呈袋状,没有明显的基部裂片;尾部较长27m29m,呈圆至钝圆锥形。雄虫有发现。9.2. 13 Longidorus profundorum Hooper, 1966 雌虫虫体细长(6.0 mm12. 0 mm),唇区平截状,不缝缩,唇宽约为食道基部体宽的四分之一,口孔处有16个乳突,侧器囊大而明显,二裂,延伸至口腔到导环距离的三分之二处;齿尖针长而细,齿托超过齿尖针长度的二分之一;尾长约为旺门处体宽的四分之三,尾圆锥形。雄虫有发现,交合刺矛形,有附导片。9.3 长针线虫属主要传毒种类测计值长针线虫属传播种类的测计
18、值见表20表2长针线虫属传毒种类测计值测计值传毒线虫种类L ODS ODP OGR V a b C 口1口1m m m % 阿普尔长针线虫 5.1-9.1 110-169 10.7-18.3 128-216 91-112 60-80 24-34 49-54 L.aulus 合6.2-6.3 129-131 13.8-15.3 142-143 102-103 64-66 31 5.1-7.6 74.5-118 11. 9-15. 7 123-184 98-111 65-75 30-38 48-53 L. arthensis 合4.6-7.0 88.0-99.7 10.5-14.8 117-174
19、 102-116 64-76 浙狭长针线虫 5.2-7.5 109-210 12.7-22.5 82-147 73-93 36-45 27-32 44-55 L. attenuatus 合5.5-6.3 119-171 12.9-17.1 99-114 80-84 38-40 30-32 短环长针线虫 4.0-5.9 86-119 12.3-23.8 111-154 76-88 28-45 21-26 43.1-50.2 L. breviannulatus 合草皮长针线虫 5.2-8.2 63-84 10.4-17.。83-162 100-120 56-90 30-41 44-58 L. ca
20、espiticola 合5.4-7.5 64-86 10.0-16.2 76-173 99-115 52-80 32-45 折环长针线虫 3.3-4.0 122-177 101-121 55-66 50-64 L. diadecturus 合移去长针线虫 4.5-6.4 76-123 9.7-17.5 73-141 81-102 34-71 28-37 45-53 L. elongatus 合5.0-6.4 93-127 11. 5-15.3 89-155 72-98 43-58 30-33 卫矛长针线虫 6.1-7.8 124-186 13.3-22.8 125-198 81-90 45-7
21、6 26-33 47-56 L. euonymus 色横带长针线虫 6.6-8.5 121-143 11. 8-25. 5 187-283 102-119 45-70 33-39 42-52 L. fasciatus 合瘦头长针线虫 3.5-6.3 74-137 8.0-20.0 75-154 58-78 30-62 25-32 45-59 L. leptocephalus 合5 GB/T 28086-2011 表2(续)测计值传毒线虫种类L ODS ODP OGR V a b C % m口1m m m 大体长针线虫 6.8-12.0 66-142 11. 0-21. 0 148-290 11
22、9-150 53-95 37-48 41-59 L. macrosoma 合6.7-11. 1 76-120 11. 0-19.9 148-268 113-147 53-97 40-47 马丁长针线虫 3.2-4.3 81-160 9.1-17 110-184 83-96 51-61 51-66 52-56 L. martini 古2.8-3.9 93-133 10.2-13.5 68-162 80-94 46-70 60-68 6.0-8.8 81-119 11. 1-19.1 124-222 88-105 34-41 45-58 L.户rofundorumt 5.7-7.6 83-138
23、10.2-19.4 120-189 92-103 32-40 注:L一-体长;a体长/最大体宽;b体长/体前端至食道与肠连接处的距离;C一一体长/尾长;ODS一一Odontostyle齿尖针长度;ODP一一Odontosphore齿托长度;V体前端至阴门处距离x100/体长;R-Oral aperture to guide ring口孔到诱导环长度。10 结果判定将观察、测量获得的各鉴定特征数字代码与多歧检索表按字母顺序进行核对,如果所有数字均与某种相符,则初步鉴定为该种。若初步鉴定为长针线虫属传毒种类,且符合第9章对应形态鉴定特征以及表2测计值,可判为检出长针线虫属传毒种类,其寄主和地理分布
24、等信息可供参考。11 样晶保存若鉴定为长针线虫属传毒种类,则将剩余的线虫杀死、固定制成永久玻片保存;也可以用4%甲醒固定后长期保存。标签上应注明样品编号、种名、寄主、产地、制作人和制作时间等。对己鉴定出带有长针线虫的植物材料,经登记后,要保存在50C100C及干燥、防鼠防虫处,并标明样品编号、截获日期、截获人、寄主名称、运输工具名称、输出国名等,样品需至少保存6个月,以备复验、谈判和仲裁。6 GB/T 28086-20门附录A(资料性附录)长针线虫属(传毒种类)相关资料A.l 长针线虫属传毒种类以及传播的病毒种类见表A.l。表A.l长针线虫属传毒种类以及所传播的病毒种类介体线虫所传病毒种类阿普
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