GB T 18634-2009 饲用植酸酶活性的测定.分光光度法.pdf

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1、rcs 65. 120 8 46 GB 中华人民圭t/飞、和国国家标准GB/ T 18634-2009 代拌G/T18634-2002 2009-05-26发布饲用植酸酶活性的测定分光光度法Oetermination of feed phytase activity一Spectrophotometric method 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国回家标准化管用委员会2009-10-01实施发布目IJS:I 本标准代替GB/T 8634 200U伺用棉酸酶惰性的测定分光光皮法。本桥t与G/T18634 2002相比主要变化如下:缩小了方法的适用范围;一一改变了方法的最低定量限;改变

2、了缓冲醉浓的配制方法;细化了测定过程中的操作步骤;一一删除了相对法;扩大了添加拍酸酶的配合饲料样品两次词验的允许恙，相对偏差15%。本标准附录A为资料性附录。本标准由全国饲料t业标准化技术委员会提出并归n.GB/ T 18634-2009 本标准负责起草单位=中国农业科学院农业质;在标准与检测技术研究所闰家饲料质址监督检验中心(北京汀，广东溢多利生物科技股份有限公司，武汉新华扬生物有限公司。71立标准主要起J;L人:马东霞、如H.、史草草、必;晓鸥、詹连生、梁雪霞、张苏.卒标准所代替标准的历次版本发布情况为:GB/ T 18634 2002. 1 范围饲用植酸酶活性的测定分光光度法本标准规定了

3、以分光光度法测定饲用植酸酶的活性.G/ T 18634-2009 *标准适用二作为饲料添加剂使用的植酸酶产品，也适用于添加有植酸酶的配合饲料.方法最低定盘限为L30U/ kg . 2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注问期的引用文件，其随后所有的修班机不包括四j氏的内容或修订版均不适用f本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可位用这些文件的是新版本.凡是不注目期的引用文件，其最新版本适用于本标准.G/ T 14699.1饲料采样3 术语和定义下列，.1语和定义适用于本标准.3. 1 植酸酶活性phytase acti vity 在视皮37.C、

4、pH5.50条件下，每分钟从浓度为5.0mmol/L植酸销溶液中释放Imol:无机磷，即为一个梢般酶活tF.lJt位，以U是示.4 原理植酸酶在一定温度和pH条件下，将底物植酸铀*解，生成正磷酸和l肌醇衍生物.在酸性溶班中，能与钮钮酸接生成黄色的复合物，可于波长415nm下进行比色测定。5 试剂和材料除非另有说明.在分析中仅使用确认为分昕纯的试剂和蒸惯水或去离F水或相当纯度的水.清洗试验用器皿不要用含磷消洗剂.5.1 磷酸二氧梆CKHzPOt):基准物.5.2 乙酸缓冲破(1). c(C H3COONa) =0. 25 mol/L:称取20.52g无水乙酸铀于1000 mL烧杯中，加入900m

5、L *搅拌溶解，用冰乙酸调节pH至5.50士0.01.再转移至1000 mL容量瓶中，并用蒸儒水定容.刻皮.室温下存放2个月内有效.5. 3 乙般缓冲液(2), dCH3COONa) = 0. 25 mol/L:称取20.52g无水乙酿锅，0.5 g fl战通X-I00( Triton X-I00) , 0. 5 g tt二血清白蛋白(13SA)于1000 mL烧杯rll，加入900mL ，.1.搅拌溶解，用冰乙酸调节pH至5.50士0.01，再转穆至1000 mL容量服巾，并用蒸熠/.)(定容至1j皮.室温下有-放2个月内有效。5.4 底物溶液，c(CHs 024 P6Nal2 ) = 7.

6、 5 mmol/L:称取0.69g植酸铀(C民OuP，Nal1，相对分子质1t为923.8.纯度为95%).精确至0.1mg，置于100mL烧杯中，用约80mL乙酸缓冲液(5.2)溶解，用冰乙般调节pH至5.50土0.01.转移骂骂100mL容量瓶中，并用乙酸缓冲液(5.2)定容至刻度，现用现配GB/ T 18634- 2009 (实际反应液中的最终浓度为5.0mmol/U。5.5 硝酸溶液:1+2水溶液。5.6 铝酸镀洛蔽，100g/L:称取10g铝酸锁(N H . )6 M07 ()z. 4H20J子50mL烧杯中加水溶解，必要时可微加热，再转移至100mL容量瓶中，加入1.0 mL氨本(

7、25O用水定容至亥IJ度。5. 7 偏钊酸锻溶液，2.35g/L:称取0.235g偏饥酸镀(N凡V03)于50mL烧杯中，如!人2roL硝酸溶液(5.5)及少量71，并用玻璃棒研磨溶解，再转移至100mL棕色容量瓶中，用水定容至刻皮。避光条件下保存一周内有效。混合后使用，现用现配。6 仪器和设备实验室常用仪器设备6.1 分析天平:感量O.1 6.2 6. 3 6. 4 6.5 6.6 6. 7 6.8 超声波溶解6.9 回旋式振荡7 试样制备o r/min 上.准确称取0.6804 g在105.C创液(5.2)洛解，并定容至主IJ度，撒度为50.bx)。标准溶液序号2 3 4 5 2 一咽饵(

8、5肉。omL容量瓶中，用乙酸缓冲用乙酸缓冲掖(5.3)稀释成不同浓表1标准稀释比例稀释放/mL浓度/(mol/mL)0. 5 16 1. 562 5 O. 5 8 3. 125 0 0.5 4 6. 2500 0.5 2 12. 500 0.5 1 25. 000 CB/ T 18634-2009 8.2 试样溶液的制备8. 2.1 酶制于同样品中酶的提取参照附法八中j议的称样盘称取报酸酶试样两份，精确0. 000 1 g.置于100mL容量瓶中，加入乙般缓冲液(5.3)摇句)f定容至J度.放入一个磁力棒.在磁力搅拌器(6.4)1:高速搅排30min.或在超卢波辩解器(6.8)1:超声需解15

9、on.再放入回旋式撮韵器(6.9)小撮萌30min. 8. 2.2 加酶饲料样品中酶的提取称取添加州俄酶的饲料试样两份，精确至O.000 g. 11.于200时，刻皮锥J瓶巾.hu人乙酸缓冲液(5.3川00.0mL. .(f.;，Wlr放前彻拇(6.8)t.旬，所有提1&币的凶样必要时在离，、8.3 反应取10mL试行按中.从加入庇物消液解30min. J.混合1.水ffH6.2时9. !介总体管19 结果计算和袋示9.1 结果计算10 mL 心矶(6卢七以1000 r min离心10min. 测定试样宅白(Ao)和试样洛液(A)试样!lfiUW前活性以x.;.是示，单位为酶括性单位每先(U

10、/ g) !,x Nl活性fJlJ.每毫升(U/mL).按式(1) 11 T): : 式1: x = Y X II m X t X 试拧th(般耐的前ft.fJl.位为酶洁性单位每克(U/g)或酶活性单位饨毫升(U/mL)i . ( 1 ) 3 GB/ T 18634- 2009 y 根据实际样液的吸光值由直线回归方程计算出的元机磷的量，单位为微摩尔mol);酶解反应时间，单位为分钟Cmin); 一一试样的稀释倍数;m一一试样的盐，单位为先(g)或毫升(mL).9.2 结果表示两个平行试样的测定结果用算术平均值表示，酶制剂样品保留整数，加酶饲料样品保留三位有效数字.9. 3 重复性同一试样两个

11、平行测定值的相对偏差，植酸酶产品不大于8%，添加植酸酶的各种饲料样品不大于15%。4 附录A(资料性附录)建议称样量根据样Alt植酸酶活性的不同，建议称样盘见者A.1.表A.1建议称样量榄般酶活性/(U/g)5000以上1 000-5000 500- 1 000 1-500 0.13- 1 GB/ T 18634-2009 称梯酷/g0.1- 1 0.2- 1 1-2 2-5 5-10 5 mCON-守的户H筒。凶华人民共同东标准饲用植酸酣活性的测定分光先度法CB/ T 18631 和中2009 1国标准出版社出版发行j;j(复兴门外三里河北街16号邮政编码:1 00045 间址WW电话:6852391668517548 1 ll1标准出版社必垒岛印刷厂印刷各地新华行店经销 印弦。.75字数9子宁2009年8月第一次印刷开本880X1230 1/ 16 2009牵r8月第一版y巳如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究拳报电语:(010)68533533定价16.00IS : 155066 1 38459 GB/ T 18634- 2009 1JrIl IIJUJ: 20mI11:g JJII.1