GB 15193.14-1994 致畸试验.pdf

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1、中华人民共和国留家标准GB 15193. 14-94 致畸试验Teratogenicity test 1 主题内容与运用范噩本标准规定了预测环境有密物质对人体产生胚胎毒性及致崎性实验方法。本标准适用于在我国生产和销售的切食品原料及食品用产品的致畸性评价如新资源食品、食品添加巍、食品烧包装材料及洗涤消毒剂等。2 原理母体在孕期受到可通过胎:Cit屏障的某种有密物质作用，影响胚胎的器官分化与发育，导致结构和机能的缺陷，出现胎儿畸形，因此，在受孕动物的胚胎着床后，并已开始进入缎熄及器官分化规则授与受试物，可捡出该物质对精JL豹致童音作用e3 试ll!J及其配制j实验用水为蒸饿水3. 1 平盔、冰乙毅

2、、2,4,6兰墓葬葵童音事氢氧化善事、1t泊、水含章在贱、童音素红，3.2茜素红贮备液g茜素红S,50%乙酸饱和液5.0mL，甘袖10.0mL,1%水含氯惑溶液60.o mL混食，放入棕色瓶中。3. 3茜素红应用液E取贮备液35mL，用12g/100 mL氮氧化御液稀稀烹1000 mL，存于棕色瓶中，3.4 透明液A:1t油20由四L、氮氧化狮10嚣，蒸缩水790mL混合，3.5透明液B：甘油与蒸饱水等量混合。3.6 固定液，Bouins液：2,4,6三硝基盼75份、甲醒20份、冰乙酸5份4仪器与设备4. 1 实验室常用设备。4- 2 生物显微镜及体视显微镜。4.3 游标卡尺（百分尺。5实验动

3、物常用试验动物为大鼠、小鼠和家兔。传统致畸应选健康性成熟（90100d）雌、雄大鼠，雌性成为来交配过的大鼠目。90只，雄鼠减半。在我j量分组至少设四个组，一个空白对照，3个试验缀。剂量原则上可采用1/4、1/16、l/64LD50，或以亚急性毒中华人民共和阔卫生部1994”。10批准1994-08斗。实施583 GB15193.14 94 性试验的最大无作用剂量为高剂量组，其1/30左右为低剂量组，在其间设一组。对某种新的动物，初次试验可设一阳性对照组。每组至少12只孕鼠。常用阳性对照物有敌枯双（0.5 1. 0 mg/kg体重）、五氯盼饷（30mg/kg体重）、阿斯匹林（250300 mg/

4、kg体重）及维生素A25ooo 40 ooo IU等。7 操作步骤7. 1 “受孕动物”的检查和给受试物时间性成熟雌、雄大鼠按1 1 （或2 1）同笼后，每日早晨观察阴栓（或阴道涂片），查出阴栓（或精子），认为该鼠己交配，当日作为“受孕”零天。如果5d内未交配，应更换雄鼠。检出的“孕鼠”随机分到各组，并称重和编号，在受孕的第716d，每天经口给予受试物（按o.5 1. o mL/100 g体重计）。受孕的0、7、12、16、20d称体重，并计算给受试物的量。动物交配期室温在2025为宜，环境安静，必要时给予增加麦芽和蛋糕等营养物质。7. 2 孕鼠处死和检查大鼠于娃振第20d，小鼠第18d，兔第

5、29d处死。大鼠用2g/100 mL硫喷妥纳11.5 mL只腹腔注射，麻醉或直接断头。剖腹取出子宫称重、记录并检查胚胎、着床数、早期吸收胎，迟死胎及活胎数。7.3 活胎鼠检查逐一记录胎仔体重、体长、检查胎鼠外观有元异常，如头部有元脑膨出、露脑、小头、小耳、小眼、元眼和睁眼、兔唇、下饭裂，躯干部有无腹壁裂、脐痛、脊柱弯曲，四肢有无小肢、短肢、并趾、多趾、无趾等畸形，尾部有无短尾、卷尾、无尾，脏门有无闭锁。7. 4 胎鼠骨标本的制作与检查将每窝1/2的活胎（奇数或偶数）放入95%(V /V）乙醇中固定23周，取出胎仔（或可去皮、去内脏及脂肪）流水冲洗数分钟后放入12g/100 mL的氢氧化饵溶液内

6、（至少5倍于胎仔体积）872h 透明后放入茜素红S应用液中染色648h，并轻摇12次d，至头骨染红为宜。再放入透明液A中l2d，放入透明液B中23d，待骨恪染红而软组织基本褪色，将标本放入小平皿中，用透射光源，在体视显微镜下作整体观察，然后逐步检查骨路。测量囱门大小、矢状缝的宽度、头顶间骨及后头骨缺损情况，然后检查胸骨的数目，缺失或融合（胸骨为6个，骨化不全时首先缺第5胸骨、次为缺第2胸骨）。肋骨通常1213对，常见畸形有融合肋、分叉肋、波状肋、短肋、多肋、缺肋、肋骨中断。脊柱发育和椎体数目（颈椎7个，胸椎1213个，腰椎56个，底椎4个，尾椎35个有无融合、纵裂等。最后检查四肢骨。7. 5

7、胎鼠内脏检查每窝的1/2胎鼠放入Bouins液中，固定两周后作内脏检查。先用自来水冲去固定液，将鼠仰放在石蜡板上，剪去四肢和尾，用刀片从头部到尾部逐段横切或纵切。按不同部位的断面观察器官的大小、形状和相对位置。正常切面见图。2 3 4 ,-! - 5 一正常切面图a. 经口从舌与两口角向枕部横切（切面1），可观察大脑、间脑、正脑、舌及顿裂。584 GB15193-14-94 b. 在眼前面作垂直纵切（切西2）、可见鼻部。 从头部垂直通过眼球中央作纵切切面3）。d. 沿头部最大横位处穿过脑作切西（切面4）。以上切面的目的可观察舌裂、领裂、眼球畸形、脑和脑室异常。e. 沿下顿水平通过颈部中部作横切

8、商5，可观察气管、食管和延脑或脊髓以后自腹中线剪开胸、腹腔，依次检查心、肺、横踊膜、肝、胃、肠等脏器的大小、位置，查毕将其摘除，再检查肾脏、输尿管、膀脱、子宫或辜丸位置及发育情况。然后将肾脏切开，观察有无肾孟积水与扩大。8统计方法及结果评定各种率的检查用X检验，孕鼠增重用方差分析或非参数统计，胎鼠身长、体重、窝平均活胎数用T检验。结果应能得出受试物是否有母体毒性和胚胎毒性、致晴性，最好能得出量小致畸剂量。为比较不同有害物质的致畸强度，可计算致畸指数，暂以致畸指数10以下为不致畸，10100为致畸，100以上为强致畸。为表示有害物质在食品中存在时人体受害几率，可计算致畸危害指数，如指数大于300说明该物对人危害小，100300为中等，小于100为大。附加说明s雌鼠LD,致畸指数蔓不蛮南到董最大不致畸剂量致畸危害指数最大可能摄入量本标准由卫生部卫生监督司提出。本标准由浙江医科大学、卫生部食品卫生监督检验所负责起草。本标准主要起草人黄幸纤、李悠慧、耿桂英。本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释。( 1 ) . ( 2 ) SBS