SN T 3767.8-2014 出口食品中转基因成分环介导等温扩增(LAMP)检测方法 第8部分 玉米MON810品系.pdf
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1、华共和境号金行标准SN/3767.8-2014 出庭主白白转成分环介导)检测方法等温扩增(LAM第8部分:MON810晶系Loop-mediated isothermal amplification detection method for genetically modified components in food for export-Part 8: Maize MON81 0 2014-0卜13发布2014-08田01实施中华人民共和圈发布自家庭竞量监督栓验捡瓷总局SN/T 3767.8 2014 目。山湖验J检峰任境阵古川人-TLUU啤出幸生利-h曾呻蛇口乱341二国淑为仪和LTUM
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3、-U-V四照文国草手要om分分分分分分分才尤分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分为按本由起士/、王磊E部部部部部部部部部部部部部部部部部部部部部民彦T部部部部部部部立口部012345678901234567890分分意分分人分常123456789111111111122222222223部部注部部呈部。山第第第第第第第第第第第第第第第第第第第第第第第第第第第第第第本本请本本uqll本登J李局刘I SN/T 3767.8-2014 出口食品中转基因成分环介导等温扩增(LAMP)检测方法第8部分:玉米MON810晶系1 范围SN/T 3767的本部分规定了扩增CLAMP)初筛检测方法。本部分
4、适用于玉米及其加工本方法的定性检测低限为0.52 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用件。凡是不注日期的引用文件,其GB/T 6682 分析实验室用SN/T 2268 转基因植物品SN/T 3767.2-2014 出口选方法3 I功污染措施环介导等温扩增检测过程的4 抽样与制样按照GB/T19495.7的规定执行。5 核酸提取纯化按照GB/T19495.3的规定执行。6 LAMP检测方法6.1 原理6. 1. 1 一般原理N810品系特异性的环介导等温件,仅注日期的版本适用于本文本文件。)检测方法第2部分:筛根据转基因玉米MON810品系外源基因和玉米边界序列设计特异性内引物和外引物各一对并
5、添SN/T 3767.8-2014 加一对环引物,特异性目标序列和引物碱基序列参见附录A。引物特异性识别目标序列上的六个独立区域,在反应缓冲液中脱氧核糖核酸兰磷酸、寡核昔酸引物在Bst聚合酶的作用下启动循环链置换反应,在特异目标序列启动互补链合成,在同一链上互补序列周而复始形成有很多环的花椰菜结构的茎环DNAy昆合物;从dNTP析出的焦磷酸根离子与反应溶液中的Mg2+结合,产生副产物(焦磷酸镜)形成乳白色沉淀,加入显色液,即可通过颜色变化观察判定结果。在反应混合体系中不应存在DNA聚合酶的抑制剂。在设置合适对照和在检测下限的情况下,定性检测结果可清楚判断样品是否为转基因产品。6. 1.2 显色
6、液显色原理SYBR Gre巳n1是一种高灵敏的DNA荧光染料,可以嵌入方式结合到双链DNA的小沟内。当它与双链DNA结合时,荧光信号是游离状态的8001000倍。在不发生扩增反应时,SYBR染料分子的荧光信号不发生改变,颜色显现为橙色;当发生扩增反应时,随着双链DNA的增加,SYBR染料的荧光信号也随之大幅度增强,其信号强度可代表双链DNA分子的数量,同时颜色由橙色变为绿色。6.2 仪器和设备6.2.1 超纯水发生器。6.2.2 水浴锅或加热模板:63.0oC:!:0.5 oC和80.0oC士0.5oC。6.2.3 离心管:0.1mL、1.5mL。6.2.4 移液器:量程0.5L10L;量程1
7、0L100L;量程100Ll000L。6.2.5 计时器。6.3 试剂和材料除另有规定外,所有试剂均为分析纯或生化试剂。6.3.1 实验用水:应符合GB/T6682中一级水的规格。6.3.2 dNTPs溶液:每种核背酸浓度10mmol/L。6.3.3 Bst DNA聚合酶(如:NEB公司或具有同等效果的DNA聚合酶):酶浓度8U/p.L。6.3.4 10 ThermolPol缓冲液:含200mmol/L Tris-HCl ( pH值为8.8)、100mmol/L硫酸镜、100 mmol/L氯化抑、20mmol/L硫酸镜、1% Triton X-100。6.3.5 硫酸镜溶液:150 mmol/
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