SN T 3767.28-2014 出口食品中转基因成分环介导等温扩增(LAMP)检测方法 第28部分 小麦B73-6-1品系.pdf
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1、E攘飞g SN/3767.28-2014 晶中转等温扩增(LAM第28部分:1 ;现43忐叩1飞Loop-mediaed isoher血alamplification detection method for genetically 应lodifiedco服ponentsin food for export-一2014-01-13发布Par 28:明heatB73-6-1 2014-08-01实施华人民共和国发布家庭竞量监督拉拉检痊总局SN/T 3767.28-2014 目。SN/T 3767(出口食品中转基因成分环介导等温扩增CLAMP)检测方法共分为30部分:第1部分:通用要求和定义;第2
2、部分:筛选方法;第3部分:玉米面-11品系;第4部分:玉米Bt176品系;第5部分:玉米GA21品系;第6部分:玉米MIR162品系;第7部分:玉米MIR604品系;第8部分:玉米MON810品系;第9部分:玉米MON863品系;第10部分:玉米M()N88017品系;第11部分:玉米MON89034品系;第四部分:玉米T-25品系;第13部分:玉米3272品系;第14部分:玉米59122品系;第15部分:大豆A2704-12品系;第16部分:大豆A5547-127品系;第17部分:大豆DP356043品系;第18部分:大豆GTS40-3-2品系;第19部分:大豆MON89788品系;第20部
3、分:水平吕Bt-63品系;第21部分:水稻KF6品系;第22部分:水稻KF8品系;第23部分:水稻KMD品系;第24部分:水稻LLRICE62品系;第25部分:水稻M12品系;第26部分:水稻T1C-19品系;第27部分:水稻iT2A一1品系;第28部分:小麦B73-6-1品系;第29部分:甜菜H7-1品系;第30部分:油菜RT-73品系。本部分为SN/T3767的第28部分。本部分按照GB/T1.12009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位:中华人民共和国黑龙江出入境检验检
4、疫局、东北农业大学、中华人民共和国广东出入境检验检疫局。本部分主要起草人:荣凤侠、程阳、徐义刚、李铁柱、胡坤、张明辉、孙方达、李志勇、高东微。I SN/3767.28-2014 出口食品中转基因成分环介导等温扩增CLAMP)检测方法第28部分:小麦B73-6-1品系1 范围SN/T 3767的本部分规定了扩增CLAMP)初筛检测方法。本部分适用于小麦及其初环介导等温扩增检测过程的品系特异性的环介导等温的定性检测。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的件。凡是不注日期的引用文件,GB/T 6682 分析实验室用A哇nu qL 门/巧,ahu 句,aq气UT , 创法方选3 防污染措施4 抽样与制
5、样按照GB/T19495.7的规定执行。5 核酸提取纯化按照GB/T19495.3的规定执行。6 LAMP检测方法6.1 原理6.1.1 一般原理根据转基因小麦B73-6-1品系外源基因和小麦边界序列设计特异性内引物和外引物各一对,特异SN/T 3767.28 2014 性目标序列和引物碱基序列参见附录A。引物特导性识别目标序列上的六个独立区域,利用st酶启动循环链置换反应,在小麦B73-6-1品系特异目标序列启动互补链合成,在同一链上互补序列周而复始形成有很多环的花椰菜结构的茎环DNA混合物;从dNTP析出的焦磷酸根离子与反应溶液中的Mg2十结合,产生副产物(焦磷酸镜)形成乳白色沉淀,加入显
6、色液,即可通过颜色变化观察判定结果。6.1.2 显色液显色原理SYBR Green 1是一种高灵敏的DNA荧光染料,可以嵌入方式结合到双链DNA的小沟内。当它与双链DNA结合时,荧光信号是游离状态的8001000倍。在不发生扩增反应时,SYBR染料分子的荧光信号不发生改变,颜色显现为橙色;当发生扩增反应时,随着双链DNA的增加,SYBR染料的荧光信号也随之大幅度增强,其信号强度可代表双链DNA分子的数量,同时颜色由橙色变为绿色。6.2 仪器和设备6.2.1 超纯水发生器。6.2.2 水浴锅或加热模板:63.0oC:!:0.5 oC和80.0oC土0.5oC。6.2.3 离心管:0.1mL、1.
7、5mLo 6.2.4 移液器:量程0.5L10f-lL;量程10L100L;量程100Ll000L。6.2.5 计时器。6.3 试剂和材料除另有规定外,所有试剂均为分析纯或生化试剂。6.3.1 实验用水:应符合GB/T6682中一级水的规格。6.3.2 dNTPs溶液:每种核背酸放度10mmol/Lo 6.3.3 st DNA聚合酶(如NEB公司或具有同等效果的DNA聚合酶):酶浓度8Uif1.L。6.3.4 10 ThermolPol缓冲液:含200mmol/L Tris-丑Cl(pH值为8.8)、100mmol/L硫酸镜、100 mmol/L氧化饵、20mmol/L硫酸镇、1% Trito
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