SN T 3767.27-2014 出口食品中转基因成分环介导等温扩增(LAMP)检测方法 第27部分 水稻T2A-1品系.pdf
《SN T 3767.27-2014 出口食品中转基因成分环介导等温扩增(LAMP)检测方法 第27部分 水稻T2A-1品系.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《SN T 3767.27-2014 出口食品中转基因成分环介导等温扩增(LAMP)检测方法 第27部分 水稻T2A-1品系.pdf(8页珍藏版)》请在麦多课文档分享上搜索。
1、共和境飞5 SN/3767.27-2014 晶中转温扩增(7部分:71去喝,V.-恙。-,-f噩于同主主肌Nlcnfl剧5com也i.Z4:x;,82315在是2一音AE家庭竞量监发布SNj3767.27-2014 目。唰品嗣嗣严习SNjT 3767(出口食品中转基因成分环介导等温扩增CLAMP)检测方法共分为30部分:第1部分:通用要求和定义;第2部分:筛选方法;第3部分:玉米Bt-ll品系;第4部分:玉米面176品系;第5部分:玉米GA21品系;第6部分:玉米MIR162品系;第7部分:玉米MIR604品系;第8部分:玉米MON810品系;第9部分:玉米MON863品系;第10部分:玉米M
2、ON88017品系;第11部分:玉米MON89034品系;第12部分:玉米T-25品系;第13部分:玉米3272品系;第14部分:玉米59122品系;第15部分:大豆A2704-12品系;第16部分:大豆A5547-127品系;第17部分:大豆DP356043品系;第18部分:大豆GTS40-3-2品系;第四部分:大豆MON89788品系;第20部分:水稻Bt-63品系;第21部分:水稻lKF6品系;第22部分:水稻iKF8品系;第23部分:水稻KMD品系;第24部分:水稻LLRICE62品系;第25部分:水稻M12品系;第26部分:水稻T1C-19品系;第27部分:水稻T2A-1品系;第28
3、部分:小麦B73-6一l品系;第29部分:甜菜H7l品系;第30部分:油菜RT-73品系。本部分为SNjT3767的第27部分。本部分按照GBjT1.1-2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位:中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国厦门出入境检验检疫局、中华人民共和国广东出入境检验检疫局。本部分主要起草人:黄文胜、邓婷婷、吴亚君、陈颖、李新实、韩建勋、傅凯、赵贵明、王斌、陈双雅、李志勇。I 1 范围出口食品中转基因成分环介导等温扩增CLAMP)检测方法第27部分:水稻2A
4、-l品系SN/T 3767本部分规定了初筛检测方法。2 规范性引用文件GB/T 6682 GB/T 19495.2 GB/T 19495.3 GB/T 19495.7 转基因产品SN/T 3767.2-2014 出口选方法3 防污染措胞环介导等温扩增检测过程的4 抽样与制样按照GB/T19495.7的规定执行。5 核酸提取纯化按照GB/T19495.3的规定执行。6 LAMP检船方法6.1 原理6. 1. 1 一般原理SN/3767.272014 的环介导等温扩增CLAMP)根据转基因水稻T2A-1品系外源基因和水稻边界序列设计特异性内、外引物各x;j(特异性目标SN/3767.27-2014
5、 序列和寻|物碱基序列参见附录A),特异性识别目标序列上的六个独立区域,并设计一对环引物提高反应效率。在反应缓冲液中脱氧核糖核酸兰磷酸、寡核背酸引物在Bst聚合酶的作用下启动循环链置换反应,在特异目标序列启动互补链合戚,在同一链上互补序列周而复始形成有很多环的花椰菜结构的茎环DNAt昆合物;从dNTP析出的焦磷酸根离子与反应溶液中的Mg2+结合,产生副产物(焦磷酸镇)形成乳白色沉淀,加入显色液,即可通过颜色变化观察判定结果。6. 1.2 显色液显色原理在LAMP反应体系中加入预先混合的钙黄绿素和锚离子,未发生反应时锯离子与钙黄绿素结合,钙黄绿素的荧光被碎灭,呈现橙色。当扩增反应发生时,扩增过程
6、中产生的焦磷酸根离子可与锚离子结合,形成不可逆的沉淀物,将锚离子从钙黄绿素七释放下来,从而使钙黄绿素恢复荧光,同时体系中的镇离子与钙黄绿素结合,进一步加强钙黄绿素的荧光,可在365nm紫外光激发下散发出约510nm的荧光,颜色也由橙色转为绿色。6.2 仪器和设备6.2.1 )国纯水发生器。6.2.2 水浴锅或加热模板:65.0 oC =1: 0.5 oC和80.00C土0.5oC。6.2.3 离心管:0.1mL、1.5mL。6.2.4 移液器:革命程0.5L10fJ.L;量程10L100L;量程100/-lL 1 000L。6.2.5 计时器。6.3 试剂和材料除另有规定外,所有试剂均为分析纯
7、或生化试剂。6.3.1 实验用水:应符合GB/T6682中一级水的规格。6.3.2 dNTPs 溶液:每种核背酸浓度10mmol/L。6.3.3 Bst DNA聚合酶(如:NEB公司或具有同等效果的DNA聚合酶):酶浓度8U/-lL。6.3.4 10 ThcrmolPol缓冲液:含200mmol/L Tris-HCl(pH值为8.8)、100mmol/L硫酸镜、100mmol/L 氧化何、20mmol/L硫酸镜、1%Triton X-100。6.3.5 硫酸镜溶液:50mmol/L。6.3.6 甜菜碱:5mol/L 6.3.7 显色液:钙黄绿素(Calcein)。6.3.8 引物:根据转基因水
- 1.请仔细阅读文档,确保文档完整性,对于不预览、不比对内容而直接下载带来的问题本站不予受理。
- 2.下载的文档,不会出现我们的网址水印。
- 3、该文档所得收入(下载+内容+预览)归上传者、原创作者;如果您是本文档原作者,请点此认领!既往收益都归您。
下载文档到电脑,查找使用更方便
5000 积分 0人已下载
下载 | 加入VIP,交流精品资源 |
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- SN 3767.27 2014 出口 食品 中转 基因 成分 环介导 等温 扩增 LAMP 检测 方法 27 部分 水稻 T2A 品系
![提示](http://www.mydoc123.com/images/bang_tan.gif)
链接地址:http://www.mydoc123.com/p-238977.html