GB T 25881-2010 牛胚胎.pdf

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1、ICS 65.020.30 B 43 道B中华人民共和国国家标准GB/T 25881-2010 牛胚胎Bovine embryo 2011-01-10发布主t伺防伪中华人民共和国国家质量监督检验检菇总局中国国家标准化管理委员会2011-06-01实施发布目U吕本标准的附录A为规范性附录，附录B为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国畜牧业标准化技术委员会归口。GB/T 25881-2010 本标准起草单位:北京锦绣大地农业股份有限公司、农业部种畜品质监督检验测试中心、北京科润维德生物技术有限责任公司。本标准主要起草人:张红霞、郭丽丽、刘艳军、吴亦芳、刘丑生、孙秀柱、张向利、

2、肖静、安晶、孟昭霞、郭敏、王月、刘佳新、徐敬趁、李继成、王刚、李海洋、沈录智、曹克富、刘颖。I GB/T 25881-2010 牛1 范围胚Hft 曰本标准规定了牛胚胎的生产要求、抽样、检测与判定以及包装、标识、贮存和运输等相关内容的技术要求。本标准适用于奶牛、兼用牛、肉牛的胚胎产品。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 2828. 1-2003 计数抽

3、样检验程序第1部分z按接收质量限CAQL)检索的逐批检验抽样计划GB/T 2828.2一2008计数抽样检验程序第2部分:按极限质量CLQ)检索的孤立批检验抽样方案GB/T 2828. 11-2008 计数抽样检验程序第11部分:小总体声称质量水平的评定程序GB 4143-2008 牛冷冻精液GB/T 5458 液氮生物容器3 术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3. 1 超低温保存cryopreservation 经特殊方法处理的胚胎放置于一196oc C液氮)的超低温度中，使其新陈代谢暂时停止，从而将胚胎进行长期保存。3.2 胚胎解冻embryo thawing 将冷冻保存的胚胎按一定的

4、程序和方法在空气和水浴中融化，并脱除或不脱除冷冻保护剂(如乙二醇)，使胚胎恢复正常的形态和新陈代谢的过程。3.3 胚胎体外培养in vitro embryo culture 在模拟体内的环境和条件下，胚胎在体外继续发育的过程。3.4 胚胎移植embryo transfer 将体内或体外生产的胚胎移植到受体母畜生殖道内，使其继续发育成正常个体的一种繁殖技术。4 生产要求4. 1 种母牛应具有种用价值，体质健康，元遗传病，无传染病。1 GB/T 25881-2010 4.2 种公牛和精液种公牛应具有种用价值，体质健康，元遗传病，元传染病，其冷冻精液应符合GB4143-2008的规定。4.3 系谱资

5、料胚胎应具有完整的系谱资料。4.4 牛胚胎发育阶段划分及编码标准4.4. 1 牛胚胎发育阶段划分见表10表1牛胚胎发育阶段划分发育阶段形态描述早期桑括主胚(5d6 d) 在16细胞32细胞之间，形似桑搭，体积占透明带内腔50%60%致密桑括王胚(6d7 d) 在32细胞f54细胞之间，细胞团变小，界限不明显，体积占透明带内腔60%70%早期坚胚(7d8 d) 64细胞及以上，内细胞团的一部分出现发亮的提胚腔，体积占透明带内腔70%80%，难以分清内细胞团和滋养层一一-棠胚(7d8 d) 内细胞团和滋养层界限清晰，囊胚腔明显，细胞团体积充满透明带内腔扩张裴胚(8d9 d) 装胚腔明显扩大，体积增

6、大到原来的1.2倍1.5倍，与透明带之间无空隙，透明带变薄，相当于正常厚度的1/3孵化摆胚(9dll d) 由于去胚腔继续扩大，致使透明带破裂，细胞团脱出4.4.2 胚胎发育阶段编码标准见附录A。4.5 牛胚胎分级评定牛胚胎分级评定标准见表2，胚胎分级图片参见附录Bo表2牛胚胎分级评定标准质量分级评定标准胚胎形态完葱，轮廓清晰，垒球形，卵裂球大小均匀，结构紧凑，色调和透明度适中，胚胎A级细胞团呈均匀对称的球形，-i(i个卵裂球(或细胞)的大小、颜色、密度一致，胚胎的发育阶段与预期的发育阶段，致。透明带光滑，不规则的细胞栩对较少，变性细胞不高于10%轮廓清晰，色调及细胞密度良好，胚胎细胞团的大小

7、和形状以及细胞的颜色和密度存在B级一定的不规则，有小部分游离细胞，胚胎的发育阶段与预期的发育阶段基本一致，变性细胞的比例为10%20%C级胚胎细胞团的大小和形状以及细胞的颜色和密度存在严重的不规则。轮廓不清晰，色调发暗，结构较松散，游离的细胞或泡液较多，变性细胞的比例为30%40%D级死亡或退化的胚胎，有碎片、轮廓不清晰、结构松散，变性细胞比例高于50%4.6 胚胎质量要求胚胎产品冷冻前后的质量均应达到UB级(含B级)以上为合格。4. 7 冷冻胚胎细管外观细管元变形，元裂痕，两端封口严密，标识完整。5 抽样5. 1 生产方抽样栓验生产方和使用方为质量保证概率把关，按照GB/T2828. 2-2

8、008中的第4章，采用极限质量(LQ=31. 5)，模式A抽样方案检索一次抽样方案确定抽检牛胚胎的样本量。GB/T 25881-2010 5.2 质量监督抽样检验质量监督抽样检验按照GB/T2828. 11-2008中的第6章，该群体母牛胚胎为一核查总体，声称质量水平采用DQL=4，用第0检验水平抽样方案确定抽检母牛(胚胎)的样本量。5.3 复检和仲裁检验复检根据原抽样方案确定，仲裁需抽样按照5.2规定的方案和6.6的判定规则。6 捡测与判定6. 1 细管外观用目测法，其结果应符合4.7中的规定。6.2 新鲜胚胎胚胎形态、质量分级评定结果应符合4.5中的规定。6.3 冷冻胚胎6.3. 1 冷冻

9、胚胎解冻方法6. 3. 1. 1 器材恒温水浴锅、实体显微镜。6.3. 1. 2 胚胎解冻液含6%甘油，0.1mol/L庶糖PBS胚胎解冻液;含3%甘油，0.1mol/L蔚糖PBS胚胎解冻液;不含甘袖，0.1mol/L荒糖PBS胚胎解冻液;PBS保存液。6.3. 1. 3 方法6. 3. 1. 3. 1 甘油冷冻胚胎解冻将胚胎细管空气浴10s后置于35C37 c水浴中，浸浴至胚胎冷冻细管彻底溶化。将胚胎依次移入含6%甘油、O.1 mol!L m;糖PBS胚胎解冻液，含3%甘油、0.1mol/L庶糖胚胎PBS解冻液，不含甘油、0.1mol/L 在糖PBS胚胎解冻被中，各停留5min，最后用PBS

10、保存液洗3次，即可进行镜检。6.3. 1.3.2 乙二醇冷冻胚胎解冻将胚胎细管空气浴10s后置于35C37 C水浴中，浸浴至胚胎冷冻细管彻底榕化，用PBS保存液洗3次，即可进行镜捡B6.3.2 冷冻胚胎质量评定胚胎形态、质量分级评定结果应符合4.4及4.5中的规定。6.4 型式检验检验项目及标准见4.14. 7，是在生产方抽样检验、质量监督抽样检验和复检、仲裁检验时所选定的检验。样品所检验项目中任何一项检验未达到本标准中技术要求的规定，则判为不合格。6.5 检验项目及检验周期每生产批入库、出站检验。6.6 抽样检验对群体质量水平的判定6.6.1 生产抽样检验的判定引用GB/T2828. 1-2

11、003第3章中Ac为接收数，Re为拒收数，d为不合格品数。对抽取样本检验，按GB/T2828. 2-2008中5.2的规定，当dAc，则判可接收，当d注Re，则判不可接收。6.6.2 质量监督抽样的判定对抽取样本检验，按GB/T2828. 11-2008中6.10的规定，当dL(不合格品限定数)，则抽检样GB/T 25881-2010 本符合要求，判定核查通过，当d注L，则抽检样本不符合要求，判核查总体不合格。7 包装、标识、贮存和运输7. 1 包装与标识7. 1. 1 细管材料应无毒、耐低温，细管规格以0.25mL为宜。细管外观应符合4.7的规定。7. 1. 2 细管应有明确的标记，注明品种

12、、数量、发育阶段、质量级别、父母品种及注册号、生产日期、生产单位等，标志上的字迹清晰、完整、准确，并做好存放记录。胚胎发育阶段以编码表示，见附录A的规定。7.2 贮存与运输7.2. 1 贮存凉胚和液氮的生物容器，均不可叠放。用液氮生物容器贮存时，细管应完全浸没到液氮中。液氮容器应符合GB/T5458中的规定。7.2.2 移动液氮生物容器时，应轻拿轻放，防止冲撞、震动和倾倒。7.2.3 冻胚运输时，应有专人负责，途中应及时检查和补充冷源(液氮)。运输过程中注意防挤压、防冻、防雨淋、防晒、通风散热。4 附录A(规范性附录)胚胎发育阶段编码标准A.1 导言本附录给出了不同发育阶段的数字编码。A.2

13、原则和方法对不同发育阶段的胚胎，以阿拉伯数字编码。示例:胚胎发育在1细胞(1d)时，编码为1.A.3 编码不同发育阶段的胚胎编码见表A.l。表A.1不同发育阶段的胚胎编码发育阶段1细胞(1d) 2细胞(2d);4细胞(3d); 8细胞(4d); 16细胞(5d) 早期桑搭胚(5d-6 d) 致密桑榕胚(6d-7 d) 早期褒胚(7d-8 d) 袋胚(7d-8 d) 扩张囊胚(8d-9 d) 孵化装胚(9d-ll d) GB/T 25881-2010 数字编码1 2 3 4 5 6 7 8 5 GB/T 25881-2010 B.1 导言附录B(资料性附录胚胎图片本附录给出了通用的胚胎形态参考图

14、片。B.2 胚胎形态图片B. 2.1 致密桑植胚不同质量等级的致密桑湛胚见图B.l图B.3o三量盟国瞌恤白血-牛牛a圄B.1胚胎质量:A图B.2胚胎质量:BB.2.2 囊胚不同质量等级的裴胚见图B.4图B.6。图B.4胚胎质量占圄B.5胚胎质量:B6 图B.3胚胎质量:C图B.6胚胎质量:COFONlFNH白。国和华人民共国家标准牛胚胎GB/T 25881-2010 中导中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销* 印张O.75 字数12千字2011年2月第一次印刷开本880X12301/16 2011年2月第一版晤书号:155066 1-41604定价16.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533GB/T 25881-2010 打印日期:2011年3月20B F002A