GB T 21812-2008 化学品.蜜蜂急性经口毒性试验.pdf

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1、I臼13.300;13.020.40A 80 道雪中华人民共和国国家标准GB/T 21812-2008 化学品蜜蜂急性经口毒性试验Chemicals-Honeybees, acute oral toxicity test 2008-05-12发布2008-09-01实施fJ 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会发布GB/T 21812-2008 前言本标准等同采用经济合作与发展组织(OECD)化学品测试导则No.213 (1998年)(蜜蜂急性经口毒性试验)(英文版。本标准做了下列编辑性修改z一一-增加了范围部分;一一将计量单位改为我国法定计量单位;一一将附录中的术语

2、和定义内容放入正文的术语和定义部分。本标准由全国危险化学品管理标准化技术委员会(SAC/TC251)提出并归口。本标准负责起草单位z中国检验检疫科学研究院。本标准参加起草单位z宁波出入境检验检疫局。本标准主要起草人:周新、陈会明、王军兵、于文莲、林振兴、马中春、郝楠、王立峰、孙鑫、王睁。I G/T 21812-2008 引本标准是被制定用来测定农药及其他化学品对成年工蜂的急性经口毒性的实验室试验方法。本标准主要根据欧洲和地中海植被保护组织CEPPO)的为评估植被保护产品对蜜蜂CApismellifera)产生副作用的指南文件旧。本标准考虑到了1993年在WageningenC荷兰)举行的植物与

3、蜜蜂关系的国际研讨会的第五次关于农药对蜜蜂危害的讨论会上提出的改进EPPO测试方法的建议田。其他现有的指南也被考虑到，见参考文献3J、4J和5J。在物质的毒性特征的评估中，当化学品暴露于蜜蜂时，必须包含对蜜蜂的急性经口毒性试验。急性经口毒性测试提供了确定农药和其他化学品对蜜蜂固有毒性的判断依据。这个试验结果可以作为进一步评估的必要性依据。特别是，本标准可用于评估农药对蜜蜂危害的逐步回归程序中，用以确定实验室毒性测试和野外试验的必要性，见参考文献6J。农药可以是一种活性成分Ca.i. )也可以是制剂产品。参比物用以核实蜜蜂的敏感性和试验的准确性。E G/T 21812-2008 化学品蜜蜂急性经

4、口毒性试验1 范围本标准规定了化学品蜜蜂急性经口毒性试验的范围、术语和定义、试验原理、试验的有效性、试验准备、试验程序、数据与报告。本标准适用于测定农药及其他化学品对成年工蜂的急性经口毒性。2 术语和定义下列术语和定义适用于本标准。2. 1 急性经口毒性acute oral toxicity 在最长到96h的试验期间内，经口单一剂量的受试物产生的有害影响。2.2 剂量dose 受试物消耗的总量。剂量以受试物质量(g)或单个试验动物所用受试物的质量也/只蜜蜂)来表达。当蜜蜂被集体喂养时，实际的剂量元法计算，但是可以用平均剂量进行估计(在一个笼中受试物被消耗的总量/受试蜜蜂的数量)。2.3 经口半

5、数致死量LDso (median lethal dose) oral 受试物以口服方式导致动物死亡达50%，经统计获得的唯一药量。LDso值以g/只蜜蜂来表达。对于农药，受试物可以是一种活性成分(a.i. ) ，也可以是含有一种或多种活性成分的制剂产品。2.4 死亡率mortality 死亡动物占供试动物的比率。3 试验原理成年工蜂通过取食煎糖溶液从而食人受试物。而后，用不含有受试物的同样食物饲喂蜜蜂。在至少48h内记录死亡率并与对照组进行比较。如果在24h-48 h之间死亡率持续增加，而对照组死亡率保持在不大于10%的可以接受水平，应考虑将试验期延长，最长至96ho计算24h和48h的LDs

6、o，以及当试验延长后的72h和96h的LDso值。4 试验的有效性试验应符合以下条件才是有效的z一一-在试验结束时对照组的平均死亡率不超过10%;一一参比物的LDso值满足特定的范围。5 试验准备5. 1 蜜蜂的选择供试蜜蜂要求营养状况良好，健康、抗病毒能力强，年龄相同。供试蜜蜂可以不是来自同一群蜂，但其家族背景应清晰已知。在使用当天早晨或试验的前一天晚上采集，并在实验条件下饲养一直到试验GB/T 21812-2008 开始。尽量避免在早春或晚秋采集蜜蜂。如果在此期间进行试验，则应经孵化器使蜜蜂羽化，并用花粉和蔚糖溶液饲养1周。如果使用经抗生素、抗蜻剂等化学物质处理过的蜜蜂，自最后一次处理后的

7、4周内不能用于毒性试验。5.2 试验笼使用易于清洁，通风性良好的笼子。可采用任何合适的材料，如不锈钢、金属丝、塑料、一次性木笼等。试验笼的大小要与蜜蜂的数量相适应，以提供足够的空间。5.3 操作和喂养条件白天(光照下进行的处理和观察:以最终浓度为500g/L的蔚糖水溶液作为食物。在给予试验剂量后，可不受限制提供食物，并对每宠的食物摄入量进行记录。喂食采用长50mm，宽10mm，底端开口处直径为2mm的玻璃管。5.4 蜜蜂的准备将采集的蜜蜂随机分配到实验室里随机放置的试验笼中。试验开始前使蜜蜂饥饿2h，以保证在试验开始时蜜蜂腹内食物含量相同。试验前用健康的蜜蜂替换出垂死的蜜蜂。5.5 受试物剂量

8、的准备如果受试物是易于与水混溶的化学品，则可以直接分散到500g/L的蔚糖水溶液中。对于有技术要求的产品和一些水溶解性较低物质，可以使用毒性较低的有机溶剂、分散剂或乳化剂(如丙酣、二甲亚矶、二甲基甲眈胶)作为助溶剂。助溶剂的浓度可根据受试物的溶解性来决定，并且各个浓度组的助溶剂浓度应一致。但助溶剂的浓度一般不应超过1%。应准备适当的溶剂对照，即当使用了助溶剂和分散剂时，应分别准备两组溶液对照，一组为水溶液对照，一组为含溶剂的蘸糖溶液对照，溶剂浓度与受试组中的浓度相同。6 试验程序6. 1 试验组和对照组试验浓度以及平行试验数量的设置应满足在95%置信限下确定LDso的统计需要。通常在进行试验时

9、，要求在含有LDso的浓度范围内，至少设置5个按几何级数排列的浓度，浓度组距比值不应超过第4章中规定范围。另外，稀释因子和受试物浓度数量的设置，还应考虑以浓度对死亡率表示的毒性曲线斜率的相关性，以及进行结果分析所选用的统计分析方法。应先进行预试验，以确定正式试验的浓度范围。最低要求z每个浓度组设三个平行，每一试验容器各放10只蜜蜂。对照组最少设3个平行，各10只蜜蜂，与处理组同时进行。对照组还应该包括助溶剂或载体对照。6.2 参比物参比物应该包括在测试系列里。参比物浓度至少应选择覆盖预期LDso值的3个剂量。每个剂量3个平行，各10只蜜蜂。首选的参比物是乐果，其报道的24h急性经口毒性LDso

10、值的范围为:0.10g(a. i. )/只蜜蜂o.35 g(a. i. )/只蜜蜂，见参考文献7J。若有充分的数据来证明预期的剂量反映，也可以接受其他的参比物。6.3 暴露6.3. 1 剂量处理在每个蜜蜂试验组中，加入100L200L含有一定浓度受试物500g/L的蔚糖水溶液。对于低溶解度的物质则要求加大体积，如果受试物为低溶解性、低毒或在制剂中浓度较低，则要求使用较高比例的震糖水溶液。对每组经处理食物消耗量进行监测。食物通常在3h4h内消耗完。一旦食物消耗完，将食物容器从笼中取出，换上只含有蔚糖的食物，不限量。对于一些受试物，在较高试验剂量下，蜜蜂拒绝进食，从而导致食物消耗很少或几乎没有消耗

11、。最长到6h后，用m;糖溶液将剩余的经处理的食物换掉。对经处理食物的消耗数量进行估算(即检测经处理的食物残存的体积或质量)。GB/T 21812-2008 6.3.2 试验条件蜜蜂应该放在黑暗的实验室内，室温25.C士2.C。试验过程中还应记录相对湿度，通常为50%70%。6.3.3 持续时间在投给含有受试物500g/L的原糖水溶液后开始记时，试验持续48h。如果在第一个24h后死亡率持续增加了10%以上，则需要延长试验，最长至96h，同时对照组死亡率不得超过10%。6.4 观察在试验开始后(即在加入剂量后)4h、24h、48h记录死亡率。如果需要延长观察时间，则以24h为时间间隔进行进一步的

12、评估，最长至96h.对照组死亡率不得超过10%。估计每一组的食物消耗量。在给定的6h内，对处理组和未处理组的食物消耗率进行比较，可以得出关于经处理的食物适口性的信息。在整个试验过程中，记录观察到的所有异常行为。6.5 限度试验在预计一种受试物为低毒等情况下，应进行限度试验，以确定LDs。是否大于限度值，即100g(ai.)/只蜜蜂。试验要求同如上所述的程序。限度试验中若有死亡发生，须进行完整试验。如果观察到亚致死效应，则应进行记录。7 数据与报告7. 1 数据数据应该以表格形式表达，给出每一个处理组、对照组，以及参比物组的数据，所使用的蜜蜂数，每一观察时间的死亡率以及行为异常蜜蜂的数量，见参考

13、文献8J和9J。采用适当的统计分析方法分析蜜蜂的死亡数据，画出每一观察时间(即24h、48h、72h、96h)的剂量-效应曲线图，计算曲线的斜率以及在95%置信限下的平均致死剂量(LDso)，见参考文献9J和口OJ。如果经处理的食物没有完全被消耗光，则应该确定每组中受试物的消耗量。LDso以每只蜜蜂消耗受试物量来表达，单位g/只蜜蜂。7.2 试验报告试验报告必须包括以下信息z7.2. 1 受试物z一一物理性质和相应的理化特性(如z水搭解度、蒸汽压); 一-化学鉴定数据，包括分子式、结构式、纯度(如对于农药而言，活性成分的特征和浓度。7.2.2 供试生物:-一学名，周龄，采集方法，采集日期z-一

14、采集的供试蜜蜂蜂群的信息，包括健康状况、预处理等。7.2.3 试验条件:一一实验室的温度及相对湿度;一一试验容器的条件，包括类型、大小以及材料;-一试验溶液以及贮备液的准备方法(如果使用助溶剂，给出浓度); 一一试验设计，例如，所使用试验浓度和数量，对照组的数量。对于每一个试验z包括浓度以及对照，平行数以及每笼中蜜蜂的数量。7.2.4 结果:一一如果进行了预试验，其浓度范围;-一每一观察时间死亡率的原始数据;一一试验结束时的剂量-效应曲线图z一-在每一观察时间，受试物以及参比物在95%置信限下的LDso值;3 GB/T 21812-2008 4 一-确定LDso的统计分析方法;一-对照组死亡率

15、;一-观察或检测到的其他生物效应，例如蜜蜂的异常行为(包括受试物达到一定剂量时，蜜蜂拒食的情况)，处理组和对照组食物的消耗率;一有关偏离操作方法及其他相关信息。G/T 21812-2008 参考文献lJ EPPO (1992). Guideline on Test Methods for Evaluation the Side-Effects of Plant Protec tion Products on Honeybees (No. 170). Bulletin OEPP/EPPO Bulletin, 22 , 203-215. 2J Harrison, E. G. (1993). Pro

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21、omputing the effectiveness of an insecticide. Jour. Econ. Entomol. ,18 ,265-267. 5 DON-NF-NH阁。华人民共和国家标准化学晶蜜蜂急性经口毒性试验GB/T 21812一2008国白* 中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045 网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销* 印张o.75 字数11千字2008年7月第一次印刷开本880X 1230 1/16 2008年7月第一版 书号:155066 1-32219定价14.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533GB/T 21812-2008