GB T 21757-2008 化学品.急性经口毒性试验.急性毒性分类法.pdf

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1、ICS 13.300; 11. 100 A 80 中华人民共和国国家标准GB/T 21757-2008 化学晶急性经口毒性试验急性毒性分类法Chemicals-Test method of acute oral toxicity for chemicals-Acute toxic class roethod 2008-05-12发布2008-09-01实施狠毒草防伪中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会发布GB/T 21757-2008 前言本标准等同采用经济合作与发展组织(OECD)化学品测试指南No.423(2001年)(英文版)。本标准作了下列编辑性修改z一一增加

2、了前言部分z一一增加了OECD引言部分，把OECD原文中初始试验须知的内容纳入OECD引言部分z一一删除了OECD的参考文献部分。本标准附录A和附录B为规范性附录。本标准由全国危险化学品管理标准化技术委员会(SAC/TC251)提出并归口。本标准负责起草单位z广东出入境检验检疫局。本标准参加起草单位z上海出入境检验检疫局。本标准主要起草人z许崇辉、程树军、焦红、潘芳、温巧玲、陈谷峰、邱璐、刘俊平、黎庆翔。I GB/T 21757-2008 OECD引言1. OECD化学测试指南定期地根据学科发展或实际评估的需要而作出相应的修改。最初的423方法文本批准于1996年3月，是作为急性毒性测试的第二

3、种常规方法，而描述于当时的401方法文本。由于在1)可用粗略的LD50值对化学物质进行分类F和2)用单一性别通常雌性)来测试是足够的，这二方面达成共识，因此几次专家会议都建议对原文本进行修改。2.急性毒性分类法，每一个步骤使用3只单性别动物的测试方法，根据动物的死亡率和/或频死状态，经过24个步骤就能评定物质的急性毒性，该方法具有可重复性，使用很少的动物就得到其他急性毒性方法(测试法420和425)的分类法。急性毒性分类法对使用固定剂量和较大的剂量间距和生物学评价，达到物质的毒性分类和危害评估的目的。1996年采用的文本由于有国外体内外实验文献而获得广泛支持。3.根据实验目的，可以在经口毒性测

4、试指南中找到最适当的检测方法，而且在该指南文本中，还可以找到有关423方法的其他信息。4.本方法文本的术语见于附录。5.在一定剂量下有腐蚀性或严重原发损伤作用，能引起动物强烈痛苦或损伤的受试物不宜经口给予。频死动物或有严重持续痛苦症状的动物应人道处死，并在实验死亡结果中加以注释。对于如何决定频死动物和如何预测动物即将死去，可参阅指南文件中的相关内容。6.本方法可依据本受试物在化学品分类及标记全球协调制度(GHS)急性毒性的分类，对受试物进行剂量和结果的预测。7.原则上，本方法并不能计算出精确的LD50，但可以象其他以死亡作为终点的试验一样，给出一个致死的剂量范围。本方法在至少有二组剂量死亡率大

5、于0%或小于100%时，可以算出LD50值，受试验的剂量设计，决定着实验结果中不同中毒反应的动物数，也决定实验室和试验报告的准确性和重复性。8.相对试验操作，试验之前应尽可能收集研究受试物的相关资料。这些资料包括物质特性、化学结构、理化性质、受试物体内外毒性检验的结果及与结构相似物质的毒理学资料及受试物的用途，这些资料有利于实验人类的防护和选择合适的起始剂量。E GB/T 21757-2008 1 范围化学晶急性经口毒性试验急性毒性分类法本标准规定了急性经口毒性试验急性毒性分类法试验的试验目的、术语和定义、试验基本原则、试验方法、试验数据和报告。本标准适用于检测化学品急性经口毒性分类试验。2

6、试验目的用较少的动物(不超过12只)，逐步试验，以确定受试物的急性经口毒性及其分类。3 术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3. 1 急性经口毒性acute oral toxicity 受试物一次或24h内多次经口给予受试动物某一剂量所引起的有害效应。3.2 延迟死亡delayed death 动物死亡或濒死不是发生在染毒后48h内，而是死于随后的14d观察期内。3.3 剂量de 所给受试物的量，常以质量蚀，mg)或以受试动物单位体重的受试物的质量(mg/kg)来表示。3.4 行将死亡impending death 预计在下一个观察期之前将出现濒死或死亡。在啃齿动物这一状态的表现指征包括惊厥

7、、侧卧、躺卧不动、寒颤等。3.5 经口半鼓致死剂量median lethal oral dose; LDso 一次性经口给予受试物预期会引起50%动物死亡的统计学剂量，LDso值以动物单位体重接受受试物的质量Cmg/kg)来表示。3.6 限量limit dose 试验的上限剂量(2000mg/kg或5000 mg/kg) 0 3. 7 濒死状态moribund stat田实验动物正在死亡或即使救治也不能存活状态。3.8 预期死亡predictable death 临床指征显示在实验期内的某一时间将出现死亡，如不能进食和饮水。1 GB/T 21757-2008 4 试验基本原则本方法的原则是每一

8、步骤使用最小的实验动物数量，逐步进行试验，以获得受试物分类所需的足够急性毒性的结果资料。受试物经口给予所设剂量的一组实验动物，逐步进行，每一步骤使用3只单性别(常为雌性动物。一个步骤的死亡率决定下一步骤的试验，即无需进一步实验;一一一同一剂量水平再做3只动物;一一在高一级或低一级的剂量水平另做3只动物。5 试验方法5. 1 实验动物5. 1. 1 动物种属选择首选的啃齿动物为大鼠，但也可使用其他啃齿动物，通常用雌性动物。这是因为对常规LDso试验的文献调查显示，虽然动物不同性别间的敏感性存在一定的差异，但所见的差异表明雌性动物稍微敏感。假如已知结构类似物质的毒理学或毒物代谢动力学已显示雄性动物

9、可能更受敏感，那么就应选用雄性动物。故在用雄性动物实验时，应提供充足的理由。5. 1. 2 通常实验使用的动物品系应是初成年健康的动物.雌性动物应是未产、未孕育的动物。开始给动物受试物的年龄应为8至12周龄，其体重应在同组动物平均体重的土20%内。5. 1.3 实验动物饲养条件实验动物房的温度应为22C士3C，相对湿度至少30%，而不超过70%，最好为50%60%。应采用人工照明，每12h光暗交替。用常规实验室饲料喂养，饮水不限。动物可按剂量组笼养，但每笼的动物数不应影响对每一实验动物清晰地观察。5. 1.4 实验动物的准备随机选择实验动物，逐个标上识别标记，在给受试物前，至少笼养5d以适应实

10、验室条件。5.2 剂量准备一般而言，整个试验的各剂量组给予动物的受试物应是一个恒定的体积，其方法可通过改变受试物的推度来达到所要求的体积。但是，在检验液体或混合液体受试物时，使用浓度恒定的不稀释受试物，可能更有利于随后对该受试物的危险度评价，但这样做需要有关负责人同意。另一方面，给予实验动物的量不能过大，液体样本的一次最大给予量决定于受试动物的大小。对于啃齿动物，通常一次给予的体积不能超过1mL/100 g，但如果是水榕样本，也可给予2mL/100 g。关于剂型，建议尽可能使水溶液/水悬浮液/水乳液，其次为用玉米油配制的溶液/悬浮液/乳液，再次为其他赋形剂配制的溶液。除水外，应知道赋形剂的毒理

11、学性质。除非确定榕液样本在整个实验期间有足够的稳定性，一般样本都在染毒前不久配制。5.3 试验过程5.3. 1 染毒受试物通过胃管或合适插管用管饲法一次给予。有时不可能一次给足剂量，则可在24h内分数次给予来到达所需剂量。灌胃前，实验动物应先禁食(如大鼠，禁食而不禁饮水过夜z如小鼠，禁食不禁水3h4 h)。禁食期过后，称动物体重，给予受试物。染毒完成后，大鼠仍应禁食3h4 h，小鼠应禁食1h2h。如剂量是24 h内多次染毒的，则可根据间隔时间长短，适当给予动物饲料和饮水。5.3.2 动物数量和剂量水平每一步骤使用3只动物，所用的初始剂量可以从4个固定剂量5mg/kg、50mg/kg、300mg

12、/kg和2000 mg/kg中选取。初始剂量最好能引起受试动物有一定的死亡率。附录1的流程图描述了每一初GB/T 21757-2008 始剂量应遵循的实验操作程序。当现有的资料提示，最高的初始剂量(2000 mg/kg)不可能引起实验动物死亡，则应做限量试验，假如无受试物的相关资料，出于对动物福利考虑，建议初始剂量从300mg/kg开始，各剂量组实验的间隔期长短，取决于毒作用快慢，持续时间和严重程度。当确信前一步骤的受试动物能存活时，才进行下一步实验。特殊情况下或确实因为需要，才考虑另一上限为5000 mg/kg剂量水平的实验(见附录盼。出于对动物福利的考虑，在GHS分类中属5类的化学品(20

13、00mg/kg-5 000 mg/kg)，只有充分相信这一试验结果直接与保护人类、动物或环境有关时，才进行这一剂量的动物实验。5.3.3 限量实验限量实验主要用于当实验者有资料显示受试物可能无毒性的情况下，即受试物只有大于常规限定剂量才有毒性时。有关受试物质的毒性资料，可来源于以前检测相类似的受试化合物、混合物或产品，并考虑有毒理学意义的组分的性质和舍的百分比。在某些情况下，可能受试物的毒性资料很少或没有，或者预期受试物有一定的毒性，则不应做限量试验。完成2000mg/陆的限量实验，需要用6只动物(每步骤3只)。有时5000 mg/kg剂量的限量实验，可以只用3只动物进行(见附录白，但假如受试

14、物引起动物死亡，则应进一步做下面一个较低剂量水平的检验。5.4 观察5.4. 1 在染毒后的30min内至少对每一动物观察一次和第一个24h内要定期逐一观察，特别要观察头4h的情况。随后每天定期观察，直至第14天。当然，观察期并不严格固定的，它取决于毒性反应，发作时间和恢复期长短。必要时还可延长观察期。毒性症状出现和消失的时间很重要，尤其是存在迟发毒性症状时。所有的观察应系统地逐个记录和保存，如动物继续出现毒性症状还需要进行观察。观察应包括皮肤、毛发、眼、粘膜和呼吸系统、循环系统、自主和中枢神经系统、身态和行为的改变。应注意观察有无震颤、惊厥、流涎、腹泻、嗜睡、睡眠和昏迷等。发现频死动物和重病

15、动物应予人道地处死。当动物被人道处死或发现死亡时，应尽可能准确记录死亡时间。5.4.2体重在给予受试物前一刻，应称量每只动物的体重，在随后实验中，至少每周一次称量体重。要计算和记录动物体重的变化，在实验结束时，要记录存活动物的体重并作人道处死。5.4.3 病理学检查所有受试动物(包括那些实验期间死亡或以动物福利为由人道处死的动物)都应作大体解剖。每一动物的所有大体病理学改变都应作记录。存活24h或更长时间动物，若发现器官有大体病理学改变，应考虑作组织病理学检查，它或许能提供有用的信息，6 试验数据和试验报告6. 1 试验数据应提供每一实验动物的资料。并且所有资料应以表格形式列出，以显示每一剂量

16、组所用的动物数，出现毒性症状的动物数，实验期间死亡和以人道理由处死的动物数，各动物的死亡时间，毒作用的描述及其出现和消失的时间，以及毒作用的可逆性和死检所见。6.2 试验报告z试验报告应包括以下资料z6.2. 1 曼试物一物理性状、纯度及其相关的理化性质(包括其异构体); 一一识别资料，CAS码。6.2.2 溶剂一一溶剂选择依据(不包括水)。3 GB/T 21757-2008 6.2.3 实验动物一一一所用的种属/品系s一一实验动物所带的微生物情况(知道时); 一一动物的数量、年龄、性别(包括为何用雄性替代雌性); 一一来源，动物房的环境条件、饲料等。6.2.4 试验条件一一受试物组份的详细资

17、料，包括受试物物质形态的详细资料;一一受试物给予的详细资料，包括给予体积和时间;-一一水和饲料质量的详细资料(包括饲料的类型/来源和水来源); 一一初始剂量选择理由。6.2.5 实验结果一一每一实验动物的资料和剂量水平以表格列出(即包括死亡在内的动物毒性症状，毒效应的性质、严重性和持续时间); 一一体重和体重改变的表格z一一染毒每天若动物在规定处死的日期之前死亡，则应记录死亡日期和时间，各动物染的体重，随后每周的体重和死亡时或实验结束处死时的体重的记录表格z一一一每一动物症状出现的时间进程，以及症状是否可逆;每一动物尸检和组织病理学所见。6.3 实验结果的讨论和解释6.4 结论4 附录A(规范

18、性附景)各初始剂量应遵循的操作程序A.1 下列图中的各试验流程图的初始剂量，按实验操作程序概要如下z图A.l:5mg/kg初始剂量z图A.2: 50 mg/kg初始剂量F图A.3 : 300 mg/kg初始剂量z图A.4: 2 000 mg/kg初始剂量。A.2 依据死亡或人道处死的动物数，用箭头表示实验操作程序。GB/T 21757-2008 5 SKM-凶叫|MOO2000 mg/kg 3只动物300 mg/kg 3只动物50mg/kg 3只动物一一每步用3只单性别动物(常为雌性);一-0，1，2，3:在每一步骤频死或死亡动物数;一-GHS化学品分类及标记全球协调制度(mg/kg);LD6

19、0分界mg/kg GHS q、初始剂量5mg/岖的试验程序圄A.1GHS LD60分界mgjkg 。因时M司SiMOO初始剂量50mg/岖的试验程序图A.2_, 。因时M-JuaulIMOO一一每一步用3只单位身j动物(常为雌性);一-0，1，2，3:在每一步骤频死或死亡动物数;一-GHs:(mgJkg); GHS LD60分界mkg 。初始剂量300mg/岖的试验程序圄A.3GHS LD60分界mg/kg 。国叶M司也|MOO初始剂量2000mg/岖的试验程序图A.4D GB/T 21757-2008 附录B(规范性附录)预计曼试物LDso值超过2000mg/kg的方法B. 1 危害5类标准

20、是用于检测急性毒性相对较低，但在某些情况下对易感人群有危险的受试物的方法。这类受试物预计经口、经皮或经其他途径的LDso值在2000 mg/kg-5 000 mg/kg之间，在下列情况下，其风险分类界定于:2 000 mg/kgLDso 5 000 mg/kg(在GHS属分类曰:a) 在附录A图A.l-图A.4的检测中元死亡发生。b) 已有LDs。在5类范围内，或其他动物研究和人体急性毒性的可靠资料。c) 通过外推法，可预测受试物不属于风险更大的分类，和一一已有人体毒作用的可靠资料，或一一在分类4中检测到经口死亡，或一一检测到分类4步骤，专家又判定除了腹泻等外元明显的中毒症状z一一根据其他动物

21、急性毒性研究的资料所作出的专家判定F一一-剂量大于2000mg/kg的检测。B.2 出于对动物福利保护需要，分类5(5000 mg/kg)的试验只有在确实有保护人类健康和动物健康的需要时才进行，高于该剂量水平的测试就不应进行。B.3 当进行5000mg/kg剂量测试时，只需要一个步骤(即3只动物)。如第1只动物死亡，则按附录A进行2000mg/陆的试验程序。如第1只动物存活，则做后2个动物。假如3只动物只死亡1只，则LDso大于5000 mg/kg.如2只动物都死亡，则做2000 mg/kg剂量水平的实验。10 CON-hmhFNH固。华人民共和国家标准化学晶急性经口毒性试验急性毒性分类法GB/T 21757-2008 国中* 中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销* 印张1字数21千字2008年7月第一次印刷开本880X12301/16 2008年7月第一版* 书号:155066 1-32213 如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533G8/T 21757-2008