GB T 17999.2-2008 SPF鸡.微生物学监测.第2部分 SPF鸡.红细胞凝集抑制试验.pdf
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1、ICS 11220B 41 雷亘中华人民共和国国家标准GBT 1 799922008代替GBT 179991 1999SPF鸡 微生物学监测第2部分:SPF鸡 红细胞凝集抑制试验SPF chicken-Microbiological surveillance-Part 2:Hemagglutination inhibition test for SPF chicken2008-12-31发布 2009-050 1实施丰瞀徽鬻瓣訾矬瞥鐾发布中国国家标准化管理委员会仅111刖 昌GBT 1 799922008GBT i7999SPF鸡微生物学监测分为10个部分:第1部分:SPF鸡微生物学监测总则;
2、第2部分:SPF鸡红细胞凝集抑制试验;第3部分:SPF鸡血清中和试验;第4部分:SPF鸡血清平板凝集试验;一一第5部分:SPF鸡琼脂扩散试验;一一第6部分:SPF鸡酶联免疫吸附试验;一第7部分:SPF鸡胚敏感试验;第8部分:SPF鸡鸡白痢沙门氏菌检验;第9部分:SPF鸡试管凝集试验;第lo部分:SPF鸡间接免疫荧光试验。本部分为GBT I 7999的第2部分。本部分修订参照了GBT 18936 2003高致病性禽流感诊断技术、SNT 1109 2002新城疫微量红细胞凝集抑制 试验操作规程、SNT 11822 2004禽流感微量红细胞凝集抑制试验、NYT 551 2002产蛋下降综合征诊断技术
3、、OIE陆生动物(哺乳动物、禽鸟和蜜蜂)诊断试验和疫苗手册(第五版)中的有关规定。本部分代替GBT 179991 1999SPF鸡红细胞凝集抑制试验。本部分与GBT i79991 1 999相比主要变化如下:一一增加了规范性附录A“试剂的配制”和资料性附录B“1鸡血红细胞悬液的制备”;增加了对v形孔微量血凝板进行试验的结果判定;对禽流感病毒、新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、禽腺病毒群(EDS)鸡毒支原体和滑液囊支原血凝抑制抗体的判定标准进行了修改。本部分的附录A为规范性附录,附录B为资料性附录。本部分由中华人民共和国农业部提出。本部分由全国动物防疫标准化技术委员会(SACTC 181)归口。本
4、部分起草单位:中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、中国动物卫生与流行病学中心、济南斯帕法斯家禽有限公司。本部分主要起草人:曲连东、刘家森、韩凌霞、邵卫星、朱果、单忠芳、姜骞、司昌德、于海波、盂庆文。本部分所代替标准的历次版本发布情况为:GBT 179991 1999。GBT 1799922008SPF鸡微生物学监测第2部分:SPF鸡红细胞凝集抑制试验1范围GBT 17999的本部分规定了红细胞凝集抑制试验的技术要求。本部分适用于对SPF鸡进行以下病原微生物的血凝抑制抗体检测:禽流感病毒(Avian InfluenzaVirus),传染性支气管炎病毒(Infectious Bronchitis Vi
5、rus),新城疫病毒(Newcastle Disease Virus),禽腺病毒群(减蛋综合征病毒)(Avian Adenovirus Group),鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum),滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae)。2原理许多病原微生物具有凝集动物红细胞的能力,这种凝集红细胞的能力能被特异性抗体所抑制,因此可用已知病原微生物检测相应的血凝抑制性抗体。3试剂和器材31试剂311血凝抗原。312阴性、阳性血清。313被检血清。314鸡红细胞。315 085氯化钠(NaCI)(见附录A)。316阿氏液(见附录A)。32器材321 96孔微量血凝板
6、(u形孔或V形孔)。322微量移液器(量程为25 pL、50 pL、100 pL)或可调微量移液器(量程涵盖25 pL、50 pL、100 PL)及吸头。323水浴锅。324离心机与刻度离心管。4操作程序41 红细胞悬液的制备和抗原血凝效价测定411 1鸡红细胞悬液的制备参见附录B。412抗原血凝效价测定4121于96孔微量血凝板的第1孔第12孔加入生理盐水25 pL,共作2排。每排的第1孔加入抗原25 pL,用微量移液器,从第1孔第11孔对抗原作系列倍比稀释:即将第1孔的抗原与生理盐水用移液器反复吹吸3次后,吸出25 pL移至第2孔,再反复吹吸3次后,吸出25 pL移至第3孔,依此类推,直至
7、第11孔。从第11孔中吸出25 pL弃去,此孔抗原的最终稀释度为1:2“(即11 l092)。第12孔作为对照孔。1GBT 179992200841224123412460rain。4125每孔中加入25 pL生理盐水,再加入1鸡红细胞悬液25 pL。将血凝板置振荡器上500 rrain振荡1 min2 rain。在室温1825下静置20 rain 40 rain,或37静置15 min 20 rain,或4静置抗原血凝效价判定:在反应时间内,对照孔的红细胞全部沉淀时,观察判读血凝结果。对于使用u形孔微量血凝板进行的试验,可根据表1中列举的标准进行判读。表1 血凝试验结果判读标准类 别 孔底所
8、见 结 果1 红细胞全部凝集,均匀铺于孔底,即100红细胞凝集 +2 红细胞凝集基本同类别1,但孔底有大圈 牟牟_3 红细胞于孔底形成中等大的固,四周有小凝块 +4 红细胞于孔底形成小圆点,四周有少许凝集块 +5 红细胞于孔底呈小圆点,边缘光滑整齐,即红细胞完全不凝集注:能使红细胞完全凝集(100凝集,+)的抗原最高稀释度为该抗原的血凝效价,此效价为1个血凝单位。注意对照孔应呈现完全不凝集(),否则此次试验无效。对于使用v形孔微量血凝板进行的试验,将血凝板倾斜70。,观察沉淀于孔底的红细胞是否沿倾斜面向下呈线状流动。以出现全部凝集(红细胞无流动)的抗原最大稀释度为该抗原的血凝效价,该效价为1个
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