YY T 0639-2008 体外诊断医疗器械.制造商为生物学染色用体外诊断试剂提供的信息.pdf

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1、ICS 11.040.55 C 30 中华人民共和国医药行业标准YY/ T 0639-2008/ 180 19001 :2002 ， 体外诊断医疗器械制造商为生物学染色用体外诊断试剂提供的信息In vitro diagnostic medical devices-Information supplied by the manufacturer with in vitro diagnostic reagents for staining in biology CISO 19001 : 2002 , IDT) 2008-04-25发布2009-06-01实施国家食品药品监督管理局发布r、-中华人民

2、共和国医药行业标准体外诊断医疗器械制造商为生物学染色用体外诊断试剂提供的信息YY/ T 0639-2008/150 19001 :2002 * 中国标准出版社出版发行北京复兴门外三星河北街16号邮政编码:100045网址电话:6852394668517548 中国标准出版社察垒岛印刷厂印刷各地新华书店经销* 开本880X1230 1/16 印张1字数25千字2008年8月第一般2008年8月第一3:;司电k书号:155066 2-18978定价旺元如有印装差错由本社发行出心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533马. YV/T 0639-2008/ ISO 19001 :200

3、2 目U昌本标准等同采用ISO19001: 2002(体外诊断医疗器械制造商为生物学染色用体外诊断试剂提供的信息)(英文版).本标准等同翻译ISO19001 :2002. 为便于使用，本标准做了下列编辑性修改:一一本国际标准一词改为本标准;一一用小数点n代替作为小数点的逗号，;一一将U大写字母或粗体字改为黑体字;一一删除国际标准的前言.本标准的附录A为资料性附录.本标准由国家食品药品监督管理局提出.本标准自全国医用临床检验实验室和体外诊断系统标准化技术委员会归口.本标准起草单位:北京市医疗器械检验所.本标准主要起草人:杜海鸥、张宏、刘毅.: 1 I ，、.VY/T 0639-2008/ ISO

4、 19001 :2002 引_._ -E司本标准与EN375和EN376相关，应该与EN375和EN376联合使用.生物染色所需要使用的试剂以及附录A中制造商所提供的四种染色过程具体实例是以欧洲一致通过的意见为依据的;欧洲方面对于第4章所列出的要求给出了科学、合理的解释.此信息可帮助染色剂、染液、发光试剂和用于生物学染色的其他试剂的制造商、供应商以及零售商遵从所要求的特定的产品信息. H 主:1YY/T 0639-2008/ 150 19001 :2002 体外诊断医疗器械制造商为生物学染色用体外诊断试剂提供的信息1 范围本标准规定了制造商为生物学染色用试剂所提供信息的要求.本标准适用于染料、

5、染色剂、发光试剂和用于生物学染色的其他试剂的生产商、供应商和零售商.在生物染色所有领域中，本标准所规定的制造商提供信息的要求，是获得可参照和可复现结果的先决条件.2 规范性引用文件下列文件中的条款通过在本标准中引用而构成为本标准的条款.凡是注目期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容或修订版不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注目期的引用文件，其最新版本适用于本标准.GB 3102. 8- 1993 物理化学和分子物理学的量和单位(eqvIS0 31-8 :1992) GB 3100- 1993 国际单位制及其应用(eqvIS0

6、1000: 1992) EN 375 制造商提供的关于专业使用的体外诊断试剂的信息EN 376 制造商提供的关于自测使用的体外诊断试剂的信息3 术语和定义下列术语和定义适用于本标准.3. 1 制造商提供的信息information sopplied by tbe manofactorer 体外诊断试剂附加或随货同行的所有打印、书写、图解或其他的信息.3.2 标签label 标贴在容器上的任何打印、书写或图解的信息.EN 375J 3.3 体外诊断试剂in virto djagnostic reagent 可以单放使用或与其他体外诊断医疗器械联合使用的试剂，制造商计划用于人源性、动物源性、植物源

7、性的物质进行体外检测，用来提供与生理状态、健康或疾病状态或先天畸形相关的检测、诊断、监控或治疗的信息.3.4 3.5 染色sta皿ing通过与染色或化学发光试剂反应的方式给某物质着色.染色剂dye 有色的有机化合组.当其落于适当的溶剂时，能使某物质着色.注:显色的物理学基已是a电磁波光谱在400nm-800 nm的可见区内有选择俭吸收和/或发射).袋色剂是带有大量商绒电子共军:r;电子系统的分子.来色111光吸收特性以吸收光谱表示，周光波长吸收幽线显示结果.光谱的形状和最大银钱崔长法定于集色剂的化学结构、割草剂以及测量光谱的条件.YY/ T 0639- 2008/ ISO 19001 :200

8、2 3.6 染渣stain 在规定溶剂中，规定浓度条件下用于染色的一种或多种染色剂的溶液.注:液可以直接把色剂溶解到熔剂中而获得s或者可以适当稀稀储存液而获得.3.6. 1 3. 7 3. 9 染液储存遭st但ksolution of stain 高于应用液浓度的一种或多种染色剂的稳定潜液.抗体anti 由免疫原性注:兔疫原位3.9. 1 多克隆抗体能够与某类3. 9. 2 单克隆抗体能够与某种免3. 10 核踵探针nucleic 有特定长度的，可以3. 11 凝集囊lectin 具有两个或更多的能识别并增4 制造商提供倍息的要求4. 1 通用要求4. 1. 1 制造商为生物学染色用体外诊断试

9、剂提供的倍息制造商提供的关于生物学染色中使用的试剂的信息应与GB3102.8、GB3100、EN375和EN376 相符.应特别注意EN375中给出警示.此外，对于在生物学接色中使用的各种试剂，相关的地方应满足4.1.2、4.1.3、4.1.4中规定的要求.4. 1. 2 产品名称适用时，产品名称应包括CAS注册号和颜色索引名称和编号! 注1:CA$ 注册号是化学摘要服务注册号.是用来在化学摘要中检索化学物威特异性的唯一的徽字编码.注2:颜色索引包含5位数，对于大多数的第色知j来说，有一个C.I编码和一个符殊结构的名称.2 币VY/T 0639-2008/150 19001 :2002 4.1

10、.3 试剂的说明试剂的说明应包含适当的物理化学的数据.并随附每批的相关数据单表.数据至少应包含下列信息:a) 包括平衡离子的分子式;b) 摩尔质量(g/mol)，明确阐述是否含有平衡离子;c) 干扰物质的可允许限;对于有色的有机化合物，数据还应包含:d) 摩尔吸收度(此可以用纯染色剂分子浓度而非总染色剂替代he) 处于最大吸收峰的波长或波数;f) 薄层色谱，高效液相色谱或高效薄层色谱数据o 4. 1. 4 预期用途应提供生物学染色指南和定性与定量的步骤如适用)，应包括如下信息:a) 生物原料的类型和染色前的操作和处理等;1) 细胞样品还是组织样品或两者都可用;2) 冰冻物质还是化学固定物质或两

11、者都可用53) 组织样品处理方法s的可以使用包埋介质.b) 制造商使用的适当的反应程序详细说明，该程序是用于检测生物学染色过程中使用的染色剂、染液、化学发光试剂、荧光染料、抗体、核酸探针或凝集素的反应性;c) 按照制造商推荐的材料、反应程序，所预期的结果;d) 合适的阳性和阴性质控组织的注解以及结果的解释;e) 使用制造商推荐的产品，获得公开成果的参考文献.4.2 对特殊试剂的附加要求4.2.1 荧光染料无论应用类型如何，用于生物学染色过程中的荧光染料应附有下列信息:a) 选择性，也就是对在规定条件下论证对象的描述5b) 激发光与发射光的波长;c) 对于结合抗体的荧光染料，荧光染料/蛋白质(F

12、/凹的比率。4.2. 2 金属盐生物学染色中，金属吸收过程中所使用的金属复合物，应包含下面的附加信息:a) 学名;b) 纯度.4.2.3 抗体用于生物学染色中的抗体，应包含以下信息:a) 抗体所针对抗原免疫原性物质的描述，如果抗原是由抗原决定簇系统一个CD代码来定义的话，此描述应包含:检测大分子的类型、这些分子中被检出的部分、细胞定位、其所在的缅胞霄或组织，和与其他表位的交叉反应性;b) 对于单克隆抗体，克隆产生组织培养上层液或腹水方法，免疫球蛋白亚型和轻链的特性;c) 对于多克辈抗体来说，动物宿主以及是否使用了整个血清或丙种球蛋白片段sd) 形态溶液或冻干精末以及总蛋白和特异抗体的量的描述，

13、若是溶液，则应包括稀释液或介质的性质和法庭的结述ze) 适用时，应有任何运草药抗体上的分子连接体或分子延伸体的描述5。关于纯度的描述.应包括对于杂质的提纯技术和检测方法例如，免疫印迹、免疫组织化学) 3 YY/T 0639-2008/ISO 19001 :2002 g) 已出版的关于抗体应用的适用参考文献.4.2.4 核碰摞针4 在生物学染色中使用的核酸探针应符合下列信息:a) 碱基序列以及探针是单链还是双链;b) 探针的摩尔质量或碱基数，如适用，提供鸟瞟岭，跑嘈陡碱基对的百分数;c) 使用的标记物放射性同位素或非放射性分子);对于非放射性标记物来说，应注明探针标记端点(3端和/或5端和标记率

14、;d) 被检测的目标基因(DNA或RNAe) 形态溶液或冻干粉末和pmol)或浓度(pmol/mL)的描述，以及溶液中稀释液和介质的种类和f) 对纯度的声明，包g) 关于DNA序列现状.兀J然(,)7 亿。J.a YY/ T 0639-2008/ISO 19001 :2002 附录A资料性附录制造商常用的生物染色试剂所提供的信息举例A.1 概要A. 2. 1 甲基绿关于甲基绿染a) 产品一致b) 4) 5) c) 染液最大d) 薄层色谱:-ote) 处理及储存:室A.2.2 乙基绿关于乙基绿染色的信息如a) 产品一致性1) 乙基绿同义词:甲基绿); 2) CAS注册号:(7114-03-6);

15、 3) 颜色索引名称和编号:无颜色索引名称，42590.b) 组成1) 分子式包括负离子:7 H3S N3 H 2BF. - ; 2) 有和无平衡离子摩尔质量:575.19g/mol. (401. 58 g/mol) i 3) 乙基绿阳离子的质量分数浓度):85%，由吸收光谱决定;。以下给出所有的干扰物质的可允限的质量分数:一一水=少于1%;一一元机盐z少于0.1%; 5 VY/T 0639-2008/ISO 19001 :2002 一一清洁剂t不存在;一一有颜色的杂质包括结晶紫2用薄层色谱撞测不到;一一中性复合物:14%可溶性的淀粉.c) 染液最大吸收峰波长:633nm. d) 薄层色谱:仅

16、有一个与乙基绿成分一致的主要成分.e) 处理及储存:室温(18C.28C)密闭避光于褐色玻璃瓶中稳定保存A.2.3毗红Y关于毗膀红Y染色的信息如下:a) 产品一致性:1) 口比膀红Y(同义词:pyronine y，唯哆红y，pyronin G，毗唠红G，pyronine G.:P比罗红G，派若/罗/洛宁，焦宁); 2) CAS注册号:92-32-0 ; 3) 颜色索引名称和编号:无颜色索引名称，45005.b) 组成:1) 分子式包括负离子:C17日，N20+ClI 2) 有(和无平衡离子摩尔质量:302.75g/ mol , (267.30 g/ moD; 3) 毗红Y阳离子的质量分数:85

17、%，由吸收光谱决定;的以下给出所有的干扰物质的可允限的质量分数:一一水:少于1%;一一无机盐:少于0.1%;一一清洁剂:不存在2一一有颜色的杂质z用薄层色谱栓测不到;一一中性复合物:19%可溶性的淀粉.c) 染液最大吸收峰波长:550nm. d) 薄层色谱t现仅有一个与毗唠红Y成分相符的主要成分.e) 处理及储存:室温08C.28C)密闭避光子褐色玻璃瓶中稳定保存A. 2. 4 甲葛缘毗红Y染色方法的预期用途A. 2. 4.1 物质类型甲基绿-毗唠红Y染色用于不同组织新鲜的低温冰冻切片、石蜡切片或塑料切片.A.2.4.2 染色前的处理建议的回定液包括:一一C盯noys液(体现分数为99%的乙蹲

18、)+三氯甲烧+乙酸质量分数为99%)混合比例(60+30+10)mL;或一一(pH=7.0的甲陪(质量分数3.6%)瞬酸缓冲溶液;常规脱水，清洗，石蜡番透和包埋z常规显微镜用薄片切片机切成的切片的制备.A.2.4.3 工作液用相当于质量0.15g纯染色剂溶解于乙基绿或甲基绿的溶液中，作为染色用的阳离子上文中的例子每样各用0.176g)置于90mL温(50C)蒸馆水中.用相当于质量0.03g毗红Y溶液，作为染色用的阳离子上文中的例子每样各用0.038g)置于10 mL,O. 1 mol/L的邻苯二币醺盐缓冲液中(pH=4.0).该溶液与乙基绿或甲基绿溶液混合.A.2.4.4 稳定性工作液在室温(

19、18C.28C)下密闭褐色玻璃瓶中至少稳定一周.6 VY/T 0639-2008/ISO 19001 :2002 A.2. 4. 5 染色程序A.2.4.5.1 石蜡切片脱蜡.A. 2. 4. 5. 2 切片水化.A. 2. 4. 5. 3 在工作液中室温大约22C)条件下染色5min. A. 2. 4. 5. 4 用蒸馆水冲洗两次，每次2s-3 s. A.2.4.5.5 甩掉多余的水.A. 2. 4. 5. 6 用1-丁醇搅动三次.A.2.4.5.7 从1-丁醇中取出放到不亲A.2.4.6 预期结果列于A.2. 4.1的不同种a) 核染色质:绿色(5rb) 核仁与核糖c) 软骨基质和d) 肌

20、肉、胶周关于副品a) 产品1) 2) 3) b) 1) 2) 3) 4) 一无机盐:少代1%;一一渭清剂:不存在E 一一有颜色的杂质:副品红的副院体可微量存在，此量可被薄层色谱检测出来，但是町庭不存在;一一无关紧要的复合物:14%可溶性的淀粉.c) 染液最大吸收峰波长:542nm. d) 薄层色谱:与副品红相似的主要成分:微量甲基化物同族体.e) 处理及储存:室温08C-28C)密闭避光于褐色玻璃瓶中稳定保存A.3.2 福尔根席夫反应的预期用途A. 3. 2.1 物质类型福尔根席夫反应用于不同组织或细胞物质涂片、组织胚胎、细胞培养、单层细胞)的有蜡切片或塑料切片.7 唱-YY/T 0639-2

21、008/ISO 19001 :2002 A.3.2.2 染色前的处理A. 3. 2. 2.1 建议的固定渣建议的固定液包括:a) 组织学:用(pH=7.0的甲醒质量分数3.6%)磷酸缓冲溶液;b) 细胞学:1) 液体固定物质:乙醇(体积分数96%); 2) 挥干物质:一一用甲醒(质量分数3.6%)磷酸缓冲溶液z一一甲醇+甲醒质量分数37%)+乙酸质量分数100%)混合(体积比为85+10+5)mL. 吨，在Bouin固定法中的回定物质不适用与此反应.制造商检测化学发光试剂的反应性所采用的详细步骤来如下:A.3.2.2.2 副晶红席夫试剂把0.5g的副品红溶解到15mL 1 mol/L的盐酸中，

22、再加到85mL的Kzsz 05 (质量分数0.5%)的水溶液中，静宜24h.加0.3g的炭粉到100mL的此溶液中振摇2min后过滤.在不低于5C的温度下保存此无色溶液.此溶披在密闭的容器中至少可以稳定12个月。A.3.2.2.3 清洗湛液黯解0.5g的几SzOs到85mL的蒸馆水中，再加入15mL, l mol/L的盐酸中，该溶液可立即使用，直到12h后.A. 3.2. 3 染色程序A. 3. 2. 3. 1 在二甲苯中脱蜡石蜡切片5min，然后在体积分数99%乙醇中放置1min，再在体积分数为50%乙醇中放置1min. A. 3.2.3.2 将塑料切片脱水，将石蜡切片和细胞物质放蒸馆水中脱

23、蜡2min. A. 3. 2. 3. 3 将物质在5mol/L的盐酸22C条件下放置30min-60 min水解(确切时间由物质类型决定) A. 3.2.3.4 在蒸馆水中清洗2min. A.3.2.3.5 在副品红，席夫试剂中染色1h. A.3.2.3.6 在清洗溶液中连续洗3次，每次5min. A. 3. 2. 3. 7 在蒸馆水中连续洗2吹，每次5min. A.3.2.3.8 在体积分数50%的乙醇中脱水3roin.然后在70%，99%乙酶中脱水3min. A. 3. 2. 3.9 在二职苯中洗2次，每次5mio. A. 3. 2. 3. 10 在合成不亲水树脂上制作标本.A.3.2.4

24、 预期结果列在A.3. 2.1表中的物质类型预期结果如下:细胞核(DNA):红色.A. 4 雕敢素受体的免疫组化示范注意:此试剂包含叠氮铀(15mmol/L) ，叠氮销会和铅或铜反应生成高爆炸性的叠氮金属.在操作过程中应用大量水冲.A.4.1 单克酶鼠抗人雌激素受体关于单克隆鼠抗人雌激素受体信息如下:a) 产品一致性:单克隆鼠抗人雌激素受体，lD5;b) 克隆:lD5;8 YV/T 0639-2008/150 1900 1 :2002 c) 免疫原:重组人雌激素受体蛋白质sd) 抗体来源:单克隆鼠抗体由组织培养液的上层液来提供se) 特异性:抗体与受体的N-端结构域(A/B区域)反应，在免疫印

25、迹过程中，抗体与67KD多肤链反应，此多肤链由表达雌激素受体的质粒载体上与大肠杆菌转化和与COS细胞转染而得.此外，抗体与黄体的子宫内膜的细胞提取物和人乳腺癌细胞MCF-7反应;o 交叉反应:抗体与大鼠的雄激素受体结合;g) 组成:用0.05mmol/L , pH= 7. 2，含有15mmol/L叠氮铀的TRIS/HCl分离的组织培养液的上层液(含有胎牛血清的细胞培养液1640介质); 一一免疫球蛋白浓度:245mg/L; 一一免疫球蛋白亚型:IgG1;一一轻链一致性:K(kappa)链;一一总蛋白浓度:14.9g/ L. h) 处理与储存:在2C-8C下稳定保存3年.A.4.2预期用途A.

26、4. 2.1 概述此抗体用来定性或半定量检测雌激素受体表达如乳腺癌).A.4. 2. 2 物质类型-w 此抗体可用于福尔马林固定，石蜡包埋的组织切片，丙翻固定的低温切片和细胞涂片.此外，抗体可用作为ELISA(酶联免疫吸附试验的检测抗体.A.4. 2. 3 免疫组化的染色过程A. 4. 2.3.1 概述对于福尔马林固定，石蜡包埋的组织切片来说，一系列敏感染色技术是可行的，包括免疫过氧化物酶方法，APPAP(碱磷酶抗碱磷酶技术和亲和索生物素技术例如LSAB(酶标链霉亲和素-生物素方法。抗原修复，例如在pH6.0 , 10 mmol/L的拧撞酸缓冲液中加热是强制执行的.此切片在处置过程和以下的免疫

27、组化染色过程中不应干透.对于细胞涂片染色，APPAP方法是建议方法.制造商采用的关于福尔马林固定，石蜡包埋的组织切片检测免疫组化抗体的反应性的详细步骤在A. 4. 2. 3. 2和A.4.2.3.4中给出.A. 4. 2. 3. 2 试剂A. 4. 2. 3. 2. 1 过氧化氢蒸筒中3%质量分数).A. 4.2. 3. 2. 2 TRIS缓冲液(TBS)，包含O.05 mol/L TRIS/HCI和pH7.6, O. 15 mol/L氯化铀.A.4.2.3.2.3 原级抗体:最理想状况下被TBS稀释后的单克隆鼠抗人雄激素受体见A.4. 2. 3. 4). A. 4. 2. 3. 2. 4 标

28、记的羊抗鼠/兔免疫球蛋白，工作液准备此工作液至少30min，但用以前不得超过12h: 一一-5mL TBS, pH = 7. 6; 一一在0.01mol/L ,15 mol/L叠氮铀磷酸盐缓冲液中加入50L标记的羊抗鼠/兔免疫球蛋白，终浓度要达到10mg/mL-20 mg/mLo A. 4. 2. 3. 2. 5 链霉ABC复合物/辣根过氧化物酶(-生物萦复合体/辣根过氧化物酶)，工作液.按如下方法制备溶液:一一一5mL TBS,pH=7. 6; 一一含有50L链霉亲和素(1mg/L)的0.01mol/L磷酸盐缓冲液，15mmol/L NaN3; 一一含有50L标记的辣根过氧化物酶(0.25m

29、g/L)的0.01mol/L磷酸盐缓冲液，15mmol/L NaN3 A.4.2.3.2.6 DAB液在0.05mol/L, pH= 7. 6的10mLTBS中加入6mg的3，3-二氨基联苯胶，然后再在蒸馆水中加YV/T 0639-2008/150 19001 :2002 人0.1mL的过氧化氢.若实验仓促则需要过滤A.4.2.3.2.7 苏木素溶解1g苏木素，50g硫酸饵铝，0.1g碗酸销和1g拧橄酸到750mL的蒸馆水中，用蒸馆水补足1 000 mL. A.4.2.3.3 染色过程A. 4. 2. 3. 3. 1 使组织切片脱蜡和再水化;使抗原修复见上面染色过程).A. 4. 2. 3.

30、3. 2 用质量分数3%过银化氢水溶液孵育5min. A. 4. 2. 3. 3. 3 用蒸馆水清洗然后放在TBS中5min. A. 4. 2. 3. 3. 4 最好用TBS(见A.4. 2. 3)稀释的单克隆鼠抗人雌激素受体孵育20min-30 min. A.4.2.3.3.5 用TBS冲洗，并放在TBS中泡5min. . A.4.2.3.3.6 用标记羊抗鼠/兔免疫球蛋白工作液孵育20min-30 min. A.4.2.3.3.7 用TBS冲洗，并放在TBS中泡5min. A. 4. 2. 3. 3. 8 用链霉ABC复合物/辣根过氧化物酶链霉亲和素-生物素复合体/辣根过氧化物酶工作液孵育

31、20m.in-30 min. A.4.2.3.3.9 用TBS冲洗，并放在TBS中泡5min. A. 4. 2. 3. 3. 10 用DAB溶液孵育5min-15 min(当接触DAB时要戴手套).A. 4. 2. 3. 3. 11 用蒸馆水洗净.A. 4. 2.3.3. 12 用苏木索溶液复染30S. A. 4.2.3.3. 13 自来水冲洗3min. A. 4. 2.3.3. 14 用蒸馆水洗5min. A. 4.2.3.3.15 体积分数50%乙醇中脱水3min，然后70%脱水3m.in，最后99%脱水3min. A. 4. 2.3.3. 16 用二甲苯洗2次，每次5min. A.4.2

32、.3.3.17 在合成不透水树脂上制作标本.A.4.2.3.4 建议稀释法当检测人乳腺癌细胞时用桶尔马林固定，石蜡包埋切片，最好用pH=7.6的TBS稀释抗体，混成(1 + 50)L-0+ 75)L.当检测乳腺癌的丙醋固定低温切片时，可用TBS稀释抗体，混成(1 +50),L-(l + 100)L，此法适用于APPAP法和亲和索生物索法.A.4.2.3.5预期结果抗体标记细胞核的能力很强，众所周知细胞核包含大量的雌激素的受体，如子宫的上皮细胞和平滑肌细胞，和在哺乳细胞腺体的正常和增生的上皮细胞染色绝大部分定位于细胞核，细胞质则没有.但在低温切片的雌激素受体用性染色中，细胞核和细胞质均染色.众所

33、周知组织包含有少量的或栓测不出来的雌激素受体如克隆上皮细胞、心肌细胞、脑和结缔组织细胞)，但用抗体检测是阴性的.抗体标记乳服癌的上皮细胞，此细胞表达雌激素受体.组织染色依赖于组织的处理和加工而非染色本身，不正确的固定、冰冻、消化、洗涤、甩子、加热、切片或与其他组织和液体污挺可造成假象或假阴性结果.A.5 T淋巴细胞流式细胞术示范注意:此试剂包含叠氨铀(15mmol/L)，叠氮铀会和铅或铜反应生成高爆炸性的叠氮化金属.在操作过程中应大量水冲.A.5.1 单克隆鼠抗人T细胞抗体有关单克隆鼠抗人T细胞抗体的信息如下:a) 产品一致性:单克隆鼠抗人雌激素受体，CD3;b) 克隆:UCHTl10 ,:=

34、 YY/T 0639-2008/ISO 19001 :2002 c) 免疫原:sezary病人的幼稚的胸腺细胞和淋巴细胞;d) 抗体来源:纯化的单克隆鼠抗体;e) 特异性:抗体与胸膜、骨髓、外周血组织和血中的T淋巴细胞反应.大部分的T淋巴细胞肿瘤也表达CD3抗原，但是不是非T淋巴细胞惑性肿痛.与在正常胸腺中的抗原的合成模式相一致，在瘤细胞内最早可检测出的是细胞质;f) 组成:一一o.05 mmol/LTRIS/ HCl缓冲液，15mmol/L叠氮锅，pH7.2质量分数1%小牛血清白蛋白;一一免疫球蛋白亚型:IgG1;一一轻链一致性:K(kappa)链;一一总蛋白浓度:14.9g/ L ; 一一

35、免疫球蛋白纯化:琼脂糖凝胶柱蛋白A;一一纯度:质量分数大约95%;一一结合分子:异硫氨酸荧光素(FITC); 一-(F/P)比值:E495/278 = 1. 0士0.1，相应的FITC/蛋白的摩尔比值大约为5;g) 保存与搬运z在2C-8C下稳定保存3年.A.5.2 预期用途A. 5. 2.1 概述抗体预期用于流式细胞术，抗体用于定性和定量检测T淋巴细胞A.5.2.2 物质类型抗体用于新鲜的混匀的细胞悬攘，丙酣固定的低温切片和细胞涂片.A. 5. 2. 3 用流式细胞术检测抗体反应性的过程制造商使用的程序详细情况如下:a) 收集静脉血到含有抗凝剂的试管中;. b) 方法一，在分离介质中离心把单

36、个核细胞分离出来;方法二，在孵育阶段见d)J溶解红细胞;c) 用RPMI1640或磷酸盐缓冲液(PBS)(0. 1 mollL磷酸，0.15 mol/lmol/L氯化锅，pH7.4)洗单个核细胞，2次;d) 把10LFITC结合单克隆鼠抗人T细胞抗体，CD3试剂加到包含1X106细胞大约100L)和基质的细胞悬液.4C暗室孵育30min(对于双染，R-藻红蛋白结合抗体同时加到此悬液中)I e) 用加有2%小牛血清白蛋白的PBS冲洗2次，在适当的流体中重新使细胞悬浮，以供流式细胞分析之用50 用不相关FITC结合用亚型单克隆抗体，作为阴性质量控制;g) 用含有0.3mL质量分数1%的多聚甲醒的P

37、BSt.昆匀沉淀的细胞，若4C暗室放置，制备好的细胞可以保存2周EU 用流式细胞仪分析-A. 5.2.4 建议稀释在流式细胞仪中使用抗体浓度为10L/每个测试，对于用于低温切片和细胞涂片，抗体应用适当的稀释液稀释。+50)L.A.5.2.5 预期结果抗体检测T淋巴细胞表面的CD3分子，当评价低温切片和细胞涂片的染色时，反应产物应定位于胞膜。组织染色依赖于组织的处理和加工而非染色本身.不正确的固定、冰冻、消化、洗涤、甩干、加热、切片或与其他组织和液体污染可造成假象或假阴性结果.罕-F . -YY/ T 0639-2008/ISO 19001 :2002 NOONH 参考文献00-1J The c

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