SN T 1899-2007 大豆茎溃疡病菌检疫鉴定方法.pdf

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1、版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1899-2007 大豆茎溃殇病菌检疫鉴定方法Identification of Dia porthe phaseolorum (Cooke et Ell. ) Sacc. var. culivorAthow et Caldwell and Diporthe phseolorum (Cooke et Ell. ) Sacc. var. meridionalis F. A. Fernandez 2007-05-23发布2007-12-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检度总局版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售

2、目IJ1=1 本标准的附录A、附录B和附录C为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。SN/T 1899-2007 本标准起草单位:中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国宁波出入境检验检疫局。本标准起草人:严进、吴品珊、顾建锋。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售SN/T 1899-2007 大豆茎溃殇病菌检疫鉴定方法1 范围本标准确立了进境大豆Glycinemax CL. ) MerrillJ种子及其夹带的植物残体的大豆茎愤痛病菌检疫和鉴定方法。本标准适用于对来自大豆茎渍癌病发生国家和地区的所有用于加工和繁殖的大豆的进境检疫。2 原理

3、2.1 分类地位英文名:Soybea口StemCanker 学名:北方大豆茎愤痛病菌:Di呼rthe抖seulrum(Cool王ee1 Ell. ) Sacc. var. caulivura A1how e1 Caldwell 南方大豆茎愤痛病菌:Dia户rthe抖eulrumCCooke e1 Ell. ) Sacc. var. meridiunalis F. A. Femandez 元性态:北方大豆茎愤痛病菌:Phum山川seli南方大豆茎渍痛病菌:Phomo.山sp.大豆茎愤痛病菌属真菌界CFu口gi)，子囊菌门CAscomyco1川，子囊菌纲(Ascomyce1es)，间座壳目(Dia

4、por1hales) ，黑腐皮壳科CValsaceae)，间座壳属CDiartheNits. )。2.2 鉴定原理北方茎愤痛病菌的种传几率比较高，平均12.5%，最高可达22%。南方茎愤痛病菌的种传几率较低，通常不会高于5%。病原菌以菌丝的形态存活于种子内。此外，病菌还可以菌丝和子囊壳的形态在大豆病残体上越冬，并随病残体作远距离传播。此真菌为兼性寄生菌。因此，本标准采用的原理是从带菌种子和病残体上分离病原菌，并根据病原菌的形态进行鉴定。3 仪器和用具3.1 仪器体视显微镜、普通光学显微镜(具油镜和测微尺)、普通天平(感量o.1 g)、洁净工作台、光照培养箱或光照培养架、紫外光灯管(根据培养箱或

5、培养架尺寸)、高压灭菌器。3.2 用具滤纸、手持放大镜、培养皿、烧杯、慑子、剪刀、载玻片、盖玻片、量筒、吸管、酒精灯。4 试剂和培养基4.1 试剂马铃薯、葡萄糖、琼脂、25%乳酸、1.25%次氯酸铀(NaCIO)、元菌水、75%酒精。4.2 培养基马铃薯葡萄糖培养基CPDA)。5 鉴定方法5.1 症状检查茎愤痛病菌在植株各个生长阶段都能侵染。受侵染的茎组织在渍癌部位易碎，表皮剥落，形成环形版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售SN/T 1899-2007 带。受侵染的种子皱缩、变轻，外表白主状。观察收集的大豆种子及夹杂的植物残体有无上面所描述的症状。疑似的病残体和病子粒要带回实验室进行显微镜检验和

6、病原菌分离。5.2 保湿培养5.2.1 种子保湿培养每份样品取400粒种子，用1.25%的次氯酸铀表面灭菌3min4 min后，放在垫三层灭菌温滤纸的培养皿中，每皿10粒，在室温200C220C下放置24h后，在200C下冷冻24h，然后转至250C光照培养箱或光照培养架上培养，黑暗和近紫外光照各12h交替，10d后观察种子上是否出现白色菌丝。5.2.2 植物残体保湿培养植物残体在75%的酒精溶液中浸泡1min，经灭菌水洗涤后放置在垫三层湿润滤纸的培养皿中，转至250C光照培养箱或光照培养架上培养，黑暗和近紫外光照各12h交替，10d后观察植物残体表面是杏出现白色菌丝。5.3 分离挑取少量白色

7、菌丝转到酸性马铃薯葡萄糖培养基(APDA)(PDA培养基在灭菌后倒平皿前，用25%乳酸将pH调至4.5)上，近紫外光照和黑暗各12h交替，250C下培养40d。观察菌落特征，如菌落中有黑色子座，则用针挑取子座，用水作浮载剂制成玻片，在显微镜下观察有性繁殖器官，如子囊壳、子囊、子囊于包子等。5.4 生物学鉴定观察菌落特征，如菌落中有黑色子座，则用针挑取子座，用水作浮载剂制成玻片，在显微镜下观察有性繁殖器官，如子囊壳、子囊、子囊子包子等。6 鉴定特征北方茎渍癌病菌的菌落白色，致密，菌丝丛生，从培养基背面观察，菌落元色。北方茎渍癌病菌具黑色、圆形的子座，直径小于2mm，彼此不融合。子囊壳黑色，球形，

8、大小(165m340m)X (282m 412m) ，具长而突出的睬，长度为24m518m，基部宽85m192m，顶部22m36mo子囊无柄，大小(30m40m)X (4m7m)，长棍棒形，具有一个薄的很快消失的壁。子囊子包子透明，长固至椭圆形，双细胞，分隔处稍维缩，每个细胞具双泡，大小(8m12m)X (3m4m)。南方茎愤痛病菌的菌落白色，平展，由于形成厚垣抱子而呈褐色。南方茎愤痛病菌的子座形状不规则，长度2m10m，偶尔融合形成大子座。子囊壳形态与北方茎渍痛病菌相似，但朦的基部宽度是北方茎愤痛病菌的二倍。子囊和子囊于包子也与北方茎愤痛病菌相似，但要更大些，子囊大小(35.8m37. 1m

9、)X(6.7m7.0m儿子囊于包子大小(9.5m9.8m)X(3.1m3.4m)。两种茎愤痛病菌的无性型均为拟茎点霉(Phum川)，一般很难产生。大豆上其他Phorno户SIS种的形态比较参见附录Bo7 结果判定如分离菌的各形态特征与第6章描述的北方茎愤痛病菌或南方茎愤痛病菌形态相吻合，即可判定为北方茎渍痛病菌Di呻orthehaseolorurnvar. caulivora或南方茎渍痛病菌Di呻orthehaseolorurnvar. rneridialis 0 2 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售SN/T 1899-2007 附录A(资料性附录)大豆茎溃痛病菌的分布和寄主A.1 分布A.

10、1.1 大豆北方茎溃痛病菌Diaporthephaseolorum (Cooke et Ell.) Sacc. var. caulivora Athow et Caldwell 亚洲:韩国。欧洲:保加利亚、克罗地亚、塞尔维亚、黑山、法国、意大利、俄罗斯、西班牙。北美洲:美国、加拿大。南美洲:阿根廷、厄瓜多尔。A. 1.2 大豆南方茎渍痛病菌Diaporthephaseolorum (Cooke et Ell. ) Sacc. var. meridionalis F. A. Fer nandez 亚洲:印度。欧洲:意大利。非洲:加纳、尼日利亚、坦桑尼亚。北美洲:美国。南美洲:阿根廷、巴西、玻利维

11、亚、巴拉圭。A.2 寄主大豆Gly正Zernx (L. ) Merrill。3 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售SN/T 1899-2007 附录B(资料性附录)大豆茎i最痛病菌与近似种的比较表B.1项目大豆北方茎溃殇病菌大豆南方茎溃殇病菌大豆茎英枯病菌大豆拟茎点种腐病菌有性型Di户orthe户holorumDiaothe 户holoumDiaothe haseoloum 未发现var. caulivoa var. meidionalis var. sOJae 元性型lfwmo扣sishaseoli lhomo户口Isp. lhomosis sojae lhomosis longicolla

12、 PDA上菌絮状菌落，老熟后变成深丛卷毛状，茂盛，老熟后转菌落白色，呈密集的丛毛状的白色菌落丛卷毛状，有时部分落形态褐色棕褐色。区域显黄绿色。分生袍子器一般不超过分生袍子器长度200mo产生2种抱子:100m250mo 型分生于包子(1.5m 型分生于包子透明，元性型形态在自然条件下很少见在自然条件下很少见3. 5m) X (5. 5m 单胞，梭形，含2个油10.5m)，透明，单胞，梭球，大小(1.4m 形，含2个脂滴J型分生3.5m) X (5 f1-m 袍子更常见，透明，单胞，9m)。卢型分生J包丝状，有弯钩。子极少见。子囊壳在不发达的小子座上形成，(165m 子囊、子囊抱子比北方茎子囊壳

13、近球形，基部略宽，340 f1- m) X (282m 溃殇病菌大。子囊壳着生(148m 282m)X 412mL子囊(30f1- m 于小而不发达的子座，形(185m346m) ，子囊40m) X (4m 态与北方茎溃殇病菌相(3. 3m 10m) X 有性型形态7m)，长棍棒状，壁似。子囊(35.8m (35m 51m) ，长棒未发现薄，易消解，顶部有清晰37. 1 f1- m) X (6. 7m 状，在子囊于包子释放前消的折光环。子囊抱子7.0m) ，子囊袍子解。子囊袍子形状似型(8m 12m) X (9. 5m 9.8m)X 分生于包子，稍大，双胞，每(3m4m)，透明，(3. 1 f

14、1-m3. 4m)。个细胞双油球。纺锤形，双胞，分隔处略受益缩，常含油球。4 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售A 茎溃殇病菌子座横切面;B 子囊;C 子囊抱子。附录C(资料性附录)大豆茎渍痛病菌形态特征专3? j 主主C 、鸟步支、4、乍固C.1瑜、?侈B SN/T 1899-2007 5 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售khCON-mm-问Z中华人民共和国出入境检验检疫行业标准大豆茎溃痛病菌检瘟鉴定方法SN/T 1899-2007 当咛中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷当咛印张O.75 字数10千字2007年9月第一次印刷开本880X12301/16 2007年9月第一版印数1-2000 定价8.00元当咛书号:155066.2-18043 SN/T 1899-2007