GB T 7628-1987 谷物维生素B1测定方法.pdf

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1、GB 762887 1 适用范围 本标准适用于测定谷物中维生素B1的含量。2 测定原理 维生素B1（即硫胺素C12H17ON4SClHCl）在碱性条件下被铁氰化钾氧化成荧光色素硫色素，硫色素在正丁醇中的荧光强度与样品中维生素B1的含量成正比，依此进行维生素B1的定量测定。 3 仪器、设备 常用试验室仪器，特别是： 3.1 容量瓶：100mL，25mL； 3.2 吸附分离柱（见图1）； 3.3 反应瓶（见图2）； 3.4 注射器，20mL； 3.5 电热恒温水浴； 3.6 电热恒温箱； 3.7 荧光分光光度计。 4 试剂 全部试剂除有说明外，均为分析纯。所用的水应是蒸馏水。 图 1 图 2页码，

2、1/4GB 7628872006-3-29file:/C:InetpubwwwrootdatagbrR762800A.htm 4.1 盐酸（GB 62277），0.1mol/L溶液，将8.5mL盐酸用水稀释至1000mL。 4.2 硫酸（GB 62577），0.05mol/L溶液。将2.8mL浓硫酸加入水中，稀释至1000mL。 4.3 乙酸钠，2.5mol/L水溶液。205g无水乙酸钠（GB 69481）或345g结晶乙酸钠（GB 69377）溶于水，稀释至1000mL。 4.4 淀粉酶（可选用Takadiastase，或接近其活性的其他磷酸酯酶），60g/L悬浮液：用2.5mol/L乙酸钠

3、溶液（4.3）悬浮6g淀粉酶制剂，稀释至100mL。 4.5 氯化钾（GB 64677），250g/L水溶液。 4.6 酸性氯化钾溶液：将8.5mL浓盐酸加入250g/L氯化钾溶液（4.5）中，并稀释至1000mL。 4.7 氢氧化钠（GB 62981），150g/L水溶液。 4.8 铁氰化钾（GB 64477），10g/L水溶液。 4.9 碱性铁氰化钾溶液：10g/L铁氰化钾溶液（4.8）与150g/L氢氧化钠溶液（4.7）按114容积比配制。现用现配。 4.10 冰乙酸（GB 67678），30mL/L水溶液。 4.11 人造沸石（Q/HG 1244563，6080目）：使用前必需活化，方

4、法如下： 将适量人造沸石置于大烧杯中，加入十倍其容积的3热乙酸溶液（4.10），用玻棒均匀搅动10min，使沸石在乙酸溶液中悬浮，待沸石沉降后，弃去上层乙酸液。重复上述操作一次。换用五倍其容积的热氯化钾溶液（4.5）搅动清洗两次，每次15min 。再用热乙酸溶液（4.10）洗10min。最后用热蒸馏水清沸浮石至无氯离子（用10g/L 硝 酸银水溶液检验）。用布氏漏斗抽滤，烘干，贮于磨口瓶中备用。 使用前，检查沸石对硫胺素标准溶液的回收率，如达不到92，需重新活化沸石。 4.12 硫胺素标准溶液 4.12.1 硫胺素贮备液：盐酸硫胺素（Q/HG 22152774），于五氧化二磷干燥器中干燥24h

5、，称 取0.0500g，溶解于25（ V/V）乙醇水溶液中并定容至500mL，盛于棕色瓶中低温保存。 该溶液每毫升含0.1mg硫胺素。 4.12.2 硫胺素贮备液：取硫胺素贮备液（4.12.1）10mL用25 乙醇液定容至100mL，盛于棕色瓶中低温保存。 该溶液每毫升中含10 g硫胺素。 4.12.3 硫胺素标准工作液：取贮备液（4.12.2）2mL，与75mL盐酸溶液（4.1）和5mL乙酸钠溶液（4.3）混合，用水定容至100mL。现用现配。 该溶液每毫升中含0.2 g硫胺素。 页码，2/4GB 7628872006-3-29file:/C:InetpubwwwrootdatagbrR76

6、2800A.htm 4.13 硫酸奎宁（Q/HG 2279768） 4.13.1 硫酸奎宁贮备液：称取硫酸奎宁0.1000g，用0.05mol/L硫酸（4.2）溶解并定容至1000mL，贮于棕色瓶中低温保存。若溶液混浊则需重新配制。 该溶液每毫升中含0.1mg硫酸奎宁。 4.13.2 硫酸奎宁工作液：取贮备液（4.13.1）3mL，用0.05mol/L 硫酸定容至 1000mL，盛于棕色瓶中，低温保存。 该溶液每毫升中含0.3 g硫酸奎宁。 4.14 正丁醇（HG 376），其荧光强度不超过硫酸奎宁工作液的4，否则需用全玻璃蒸馏器重新蒸馏，取114118馏份。 4.15 无水硫酸钠（HG 31

7、2376） 5 试样的选取和制备 5.1 选取有代表性的谷物样品（带壳籽粒需脱壳），拣净杂质，按四分法缩减取样。 5.2 将谷物样品在6065烘干后粉碎，过60目筛，装入磨口瓶中备用。 6 测定步骤 6.1 称样：称取试样2.500g（约含硫胺素420 g），置于100mL容量瓶中。 同时称样，按GB 352383谷类、 油料作物种子水分测定法测定试样水分含量。 6.2 提取 6.2.1 水解：将0.1mol/L盐酸（4.1）75mL加入试样瓶（6.1）中，经沸水浴加热30min，开始加热的510min内不时摇动容量瓶，以防结块。 6.2.2 酶解：冷却容量瓶至50以下，加5mL淀粉酶悬浮液（

8、4.4），摇匀。该试液的pH约4.24.5。将容量瓶于4550恒温箱中保温3h，取出冷却，用水定容。 6.2.3 过滤：将试液通过滤纸过滤弃去最初的5mL滤液，再收集滤液于100mL锥形瓶中。 6.3 提纯 6.3.1 制备吸附柱：取1g活化人造沸石（4.11）置于50mL小烧杯中，加3乙酸溶液浸泡。将脱脂棉置于吸附柱底部，用玻棒轻压。 然后将乙酸浸泡的沸石全部洗入柱中（避免吸附柱脱水）。再用约10mL近沸的水洗柱，重复两次。 6.3.2 吸25mL提取液（6.2.3），慢慢加入制备好的吸附柱中（样液通过沸石的速度以1mL/min为宜），弃去滤液。用近沸的水洗吸附柱三次，每次约10mL，弃去洗

9、液。 6.3.3 用25mL热酸性氯化钾（4.6）分三次连续加入吸附柱，收集洗脱液于25mL容量瓶中，冷却后定容，混匀。 6.3.4 同时用25mL硫胺素标准工作液（4.12.3），重复6.3.1至6.3.3操作，作为外标。 页码，3/4GB 7628872006-3-29file:/C:InetpubwwwrootdatagbrR762800A.htm 6.4 氧化与萃取（以下操作避免紫外光照射） 6.4.1 于两只反应管中各吸入5mL洗脱液（6.3.3），记作A、B。 6.4.2 向A管加3mL碱性铁氰化钾溶液（4.9），向B管加3mL氢氧化钠溶液（4.7），略摇，各加入15mL正丁醇，用

10、力摇90s静置分层。 6.4.3 用注射器吸去下层水相。往各反应管加入约2g无水硫酸钠（4.15），旋摇，待测。 6.4.4 同时将作为外标的洗脱液（6.3.4）按6.4.1至6.4.3操作，两只反应管相应地记作C、D。 6.5 测定 6.5.1 用硫酸奎宁工作液（4.13.2）调整荧光仪，使其稳定于一定数值，作为仪器工作的固定条件。 6.5.2 于激发波长365nm，发射波长435nm处测定各反应管中萃取液（6.4.3） 和（6.4.4）的荧光强度。 7 测定结果的计算 7.1 计算公式 7.2 平行测定的结果用算术平均值表示，保留小数后二位，第三位按GB 1.181标准化工作导则 编写标准的一般规定中附录C数字修约规则取舍。 7.3 平行测定的相对差不得超过5。 硫胺素（ g/g，干基）（ T-TB）/（ S-SB） C V/ W（1- X） 式中： T A管试液的荧光强度；TBB管试液空白的荧光强度；S C管标准溶液的荧光强度；SBD管标准溶液空白的荧光强度；C 硫胺素标准工作液浓度， g/mL；V 提取液总容积，mL；W 试样质量，g；X 试样的水分百分率，。页码，4/4GB 7628872006-3-29file:/C:InetpubwwwrootdatagbrR762800A.htm