GB T 5511-1985 粮食、油料检验 粗蛋白质测定法.pdf

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1、GB 551185 本标准适用于商品粮食、油料中粗蛋白质含量的测定。 1 仪器和用具 1.1 凯氏烧瓶：50ml； 1.2 圆底烧瓶：1000ml； 1.3 万用电炉； 1.4 锥形烧瓶：100ml； 1.5 微量滴定管：5ml、刻度0.01ml； 1.6 容量瓶：50ml； 1.7 移液管：5ml； 1.8 量筒：10ml； 1.9 洗耳球； 1.10 凯氏微量蒸馏装置（见下图）、胶管等。 凯氏微量蒸馏装置图 1蒸馏瓶；2冷凝管；3承接瓶；4回流管；5漏斗； 6活塞；7簧夹；8烧瓶 2 试剂 2.1 浓硫酸-过氧化氢-水混合液（213）：在100ml水中缓慢加入浓硫酸200ml，冷却后再加入

2、30过氧化氢300ml，混匀备用。此液存放阴凉处可保存一个月。 页码，1/4GB 5511852006-3-29file:/C:InetpubwwwrootdatagbrR551100K.htm 2.2 混合催化剂：硫酸铜（CuSO45H2O）10g， 硫酸钾（A.R）100g，硒粉0.2g在研钵中研细使通过40目筛，混匀后备用； 2.3 40氢氧化钠溶液； 2.4 2硼酸溶液； 2.5 0.01N盐酸溶液； 2.6 甲基红乙醇溶液：0.1g甲基红溶于75ml 95乙醇中（先在研钵中加乙醇研磨）； 2.7 次甲基蓝乙醇溶液：0.1g次甲基蓝溶于80ml 95乙醇中。临用时将以上两液按21比例混

3、合即成。在酸域呈紫红色，在pH5.5时溶液无色，在碱域呈绿色。 3 操作方法 3.1 消化 按照含有1030mg粗蛋白质计算试样用量，一般可称取试样0.20.3g（ W，精确到0.0001g），用蜡光纸卷着倒入50ml凯氏烧瓶中，加混合指示剂1g，同时加入硫酸-过氧化氢-水混合液35ml，稍加振摇，斜置于电炉上，在通风橱内加热进行消化。开始时用低温加热，勿使瓶中泡沫超过瓶肚的三分之二，待泡沫减少和烟雾变白后再增加温度保持微沸。消化到溶液呈浅蓝绿色的透明状时，再继续加热沸腾10min，取出待消化液冷却至室温后，加水1020ml，再待溶液温度降到室温后，干净地转入50ml容量瓶中，加水稀释至刻度，

4、混匀备用。 3.2 蒸馏 按照凯氏微量蒸馏装置图的安装进行蒸馏和吸收。 在烧瓶8内加水400ml和少量碎玻璃片，加5滴混合指示剂，加几滴酸液使水呈紫红色，连接4，1，2，并检查有无漏气处。 量取30ml1硼酸溶液注入锥形瓶3内，加混合指示剂2滴，使冷凝管下端插入液面下1cm处。量取稀释的消化液5ml，由漏斗5注入瓶1内，再加水10ml，冲洗漏斗5。量取40氢氧化钠溶液1ml，提起活塞注入瓶1内，立即用水25ml冲洗漏斗5，旋紧活塞。这时瓶1内溶液总体积不要超过其容量的一半。 打开簧夹7，关闭活塞6，加热烧瓶8，待瓶1内溶液开始沸腾时开始计时，经2min降低瓶3，使冷凝管下端露出液面，再蒸馏1m

5、in后，用水冲洗管下端。 蒸馏结束后，掐紧簧夹7，断绝蒸气，使瓶1内溶液全部吸入管4中，放松簧夹7，从漏斗5加入蒸馏水4050ml，再通蒸气加热和回流，将瓶1洗涤一次备用。 3.3 滴定 用0.01N盐酸溶液滴定瓶3中的吸收液，滴至溶液出现浅紫红色为止。 为消除试剂误差，除不加试样外，按照上述操作方法，做一次空白试验。 4 结果计算 页码，2/4GB 5511852006-3-29file:/C:InetpubwwwrootdatagbrR551100K.htm 粗蛋白质的干基含量按下列公式计算： 双试验结果允许差：粗蛋白质含量在15.0以下时，不超过0.2；粗蛋白质含量在15.1以上时，不超

6、过0.4。求其平均数，即为测定结果，测定结果取小数点后第一位。 附 录 A 大豆水溶性蛋白质测定法 （补充件） A.1 仪器和用具 1.1 粉碎机； 1.2 磨口带塞锥形瓶：500ml； 1.3 振荡器：国际型； 1.4 容量瓶：250ml； 1.5 离心机，附50ml离心管； 1.6 玻璃漏斗； 1.7 锥形瓶、移液管； 1.8 其他仪器和用具与本标准第1章同。 A.2 试剂 所用试剂与本标准第2章同。 粗蛋白质（干基）（ V1-V0） N14 P（50/ V）10000/ W（100- M） 式中： V 蒸馏时取用稀释的消化液体积，ml；V1实验用去的盐酸溶液体积，ml；V0空白试验用去的

7、盐酸溶液体积，ml；N 盐酸溶液的当量浓度，N；14 每毫克当量盐酸相当于氮的毫克数；P 蛋白质换算系数（小麦5.7，其他谷物及豆类6.25）；W 试样重量，mg；M 试样水分百分率，。注： 消化过程中，若硫酸损失过多时，可酌量补加硫酸，勿使瓶内干涸。 消化液加水稀释后，应及时进行蒸馏，否则应保存消化液，临用时加水稀释。 加入蒸馏瓶1内的碱液，必须过量。 也可使用由0.2甲基红乙醇溶液1份和0.2溴甲酚绿乙醇溶液5份配制的混合指示剂（临用时混合），终点为灰红色。页码，3/4GB 5511852006-3-29file:/C:InetpubwwwrootdatagbrR551100K.htmA.

8、3 操作方法 A.3.1 试样制备：将大豆粉碎使90以上通过60目筛。 A.3.2 提取：称取粉碎试样5g（ W，精确至0.01g）于磨口带塞锥形瓶中，加水200ml，摇混使均匀分散，然后在2530温度下振荡2h，取出后将混合液转移至250ml容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀后静置12min，将上层清液倒入离心管中，在每分钟转数1500转的离心机中离心10min，再将离心液用快速滤纸或玻璃纤维过滤，收集清晰滤液于锥形烧瓶中，即为样品水溶性蛋白质测定液。 A.3.3 定氮：吸取测定液10ml于50ml或100ml凯氏定氮瓶中，按本标准3.1、3.2 、3.3步骤进行消化、蒸馏、滴定。记下滴定样品液

9、及空白液消耗盐酸的数量。 A.4 结果计算 水溶性蛋白质含量按下列公式计算： 双试验结果允许差不超过0.4，求其平均数，即为测定结果。测定结果取小数点后第一位。 水溶性蛋白质（干基）（ V1-V0） N0.0146.25（10/250）（5/50）10000/ W（100- M） 式中： V1滴定5ml样品液消耗盐酸体积，ml；V0滴定5ml空白液消耗盐酸体积，ml；N 盐酸溶液的当量浓度，N；0.014 每毫克当量氮的克数；6.25 大豆含氮量换算成蛋白质系数；10 吸收提取液进行消化的体积，ml；250 总提取液的体积，ml；5 吸收消化液进行蒸馏的体积，ml；50 总消化液的体积，ml；W 试样重量，g；M 试样水分百分率，。注： 大豆氮可溶解指数（）的计算方法是：以所测得的大豆水溶性蛋白质（）除以大豆总蛋白质（），再乘以100即得。 本方法采用样品制备方法及提取方法使测定结果较为稳定，但如因粉碎样品细度达不到要求，则可采用称取试样5.00g于研钵中，加5ml水，用手研磨10min，将混合物用200ml水转移至250ml磨口瓶中，再在振荡器上振荡30min，然后同本标准3.2进行定容、离心、过滤、定氮。页码，4/4GB 5511852006-3-29file:/C:InetpubwwwrootdatagbrR551100K.htm