GB T 25224.2-2010 动植物油脂 植物油中豆甾二烯的测定 第2部分：高效液相色谱法.pdf

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1、ICS 67.200.10 X 14 道国中华人民ft ./、不日国国家标准GB/T 25224.2-2010/ISO 15788-2 :2003 植物油中豆筒二烯的测定部分:高效液相色谱法动植物油脂第2Animal and vegetable fats and oils一Determination of stigmastadienes in vegetable oils一Part 2: Method using high-performance liquid chromatography (HPLC) CISO 15788-2: 2003 , IDT) 2010-09-26发布b，句:Mt苦

2、中华人民共和国国家质量监督检验检茂总局中国国家标准化管理委员会2011-03-01实施发布中华人民共和国国家标准动植物油脂植物油中豆笛二烯的测定第2部分:高效施相色谱法GB/T 25224. 2-2010/ISO 15788-2: 2003 晤中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销4峰开本880X 1230 1/16 印张0.75字数15千字2010年11月第一版2010年11月第一次印刷晤书号:155066 1-40682 定价16.00元如有印装差错由本社发行中心调换

3、版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533GB/T 25224.2-2010/ISO 15788-2 :2003 目lJ 本标准等同采用ISO15788-2 :2003 (动植物油脂植物油中豆笛二烯的测定第2部分:高效液相色谱法)(英文版)。为了便于使用，本标准对ISO15788-2:2003进行了下列编辑性修改z一一将本国际标准改为本标准气一一删除了国际标准的前言;一一用小数点代替国际标准中作为小数点的逗号，;一一规范性引用文件中用现行国家标准GB/T6682代替ISO3696: 1987 , GB/T 25223代替ISO 12228: 1999; 一一对公式进行了编号;对第5章

4、中试剂的排列次序进行了调整。本标准的附录A、附录B为资料性附录。本标准由国家粮食局提出。本标准由全国粮油标准化技术委员会归口。本标准负责起草单位:南京财经大学。本标准参与起草单位:国家粮食局科学研究院。本标准主要起草人:袁建、汪海峰、王立峰、鞠兴荣、薛雅琳。I GB/T 25224.2-201 O/ISO 15788-2: 2003 1 范围动植物油脂植物油中豆笛二烯的测定第2部分:高效液相色谱法本标准规定了高效液相色谱法测定植物油中笛醇二烯，尤其是豆筒二烯的术语、原理、试剂、仪器设备、试样制备、操作步骤、结果表示和精密度的要求。笛醇二烯是油脂漂白处理和水蒸气洗涤、脱臭过程中由笛醇类物质脱水形

5、成的。本方法也适用于测定未精炼油如初榨橄榄油中是否存在精炼植物油的筛选方法。注:ISO 15788-1是植物泊中豆笛二烯测定的基准方法，而本方法可作为一种快速筛选方法。其精密度(参见附录A)可用ISO15788-1规定的气液色谱法进行校验。对于初榨橄榄泊样品，接近于国际组织。OOC，EC)规定的限定值。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 6682 分析

6、实验室用水规格和试验方法(GB/T6682-2008 , ISO 3696:1987 , MOD) GB/T 25223动植物油脂简醇组成和简醇总量的测定气相色谱法(GB/T25223-2010 , ISO 12228: 1999 , IDT) 3 术语与定义下列术语和定义适用于本标准。3.1 豆笛二烯含量stigmastadienes content 本标准规定条件下，通过液相色谱测定的豆笛二烯的含量。以毫克每千克(mg/kg)表示。3.2 筒醇二烯含量steradienes content 本标准规定条件下，通过液相色谱测定的所有面醇二烯的含量。以毫克每千克(mg/kg)表示。4 原理在硅

7、胶柱中用石油酷将笛醇二烯作为非极性脂类组分从脂类物质中分离出来，石油醒洗脱液经浓缩后，用反相高效液相色谱仪紫外检测器在235nm处检测。按样品类别可采用内标法定量或外标法定量。5 试剂警告:应注意危险品操作规则，并遵循技术、组织和个人的安全操作规范。除非另有说明外，均使用分析纯试剂。1 GB/T 25224.2-2010/180 15788-2 :2003 5. 1 水:符合GB/T6682一级水要求。5.2 柱层析用硅胶60:粒径0.063mm 0.200 mm，或o.063 mm O. 100 mm1) ，硅胶含水量2 g/100 g。硅胶置于瓷盘内，在烘箱中1600C烘干12h，然后在干

8、燥器内冷却至室温。调整硅胶含水量为2g/100 g，称取98g(精确至1g)干燥后的硅胶置于具塞磨口锥形瓶中，加入2g7.(精确至0.01g) , 用力振摇1min，在密闭容器中过夜。5.3 石油醒:沸程40oC60 oC。5.4 乙睛:色谱纯。5.5 叔丁基甲基醒:色谱纯。5.6 异辛烧。5.7 .3，5-胆笛二烯2):纯度二三95%。以5-胆简烧作为内标物测定胆筒二烯的纯度，按GB/T25223气相色谱法测定笛醇气相色谱条件操作，氢火焰离子化检测器的响应困子为1.0，应考虑到测定面醇二烯时所用的浓度。5.8 胆笛皖:纯度注95%。5.9 .3，5-胆笛二烯标准储备溶液和标准应用溶液15.9

9、. 1 剖，5-胆笛二烯储备液:浓度1mg/mL。称取剖，5-胆笛二烯(5.7)50.0mg(精确至0.1mg)于50mL容量瓶中，用叔丁基甲基酷(5.5)溶解和稀释，并定容至刻度。5.9.2 .3，5-胆笛二烯标准应用溶被(用于液相色谱): 5.9.2.1 外标应用溶液:浓度10g/mLo吸取100L.3，5时胆笛二烯溶液(5.9. 1)于10mL容量瓶中，用乙腊叔丁基甲基醋(5.9.4)定容至刻度。每20L溶液中含有0.20闻，作为高效液相色谱外标标准溶液。标准溶液的浓度取决于被分析油的种类。当初榨油中豆面二烯含量小于0.5mg/峙，外标溶液浓度应为0.2g/mL。5.9.2.2 内标应用

10、溶液:浓度2g/mLo吸取100L.3，阻笛二烯溶液(5.9.1)于50mL容量瓶中，用石油酷(5.3)稀释至刻度。标准溶液的浓度取决于被分析袖的种类。当初榨油中豆笛工烯含量小于O.5 mg/峙，内标溶液浓度为O. 2g/mL。5.9.3 5-胆笛烧标准溶液(用于气相色谱h浓度1mg/mL。称取5-胆笛皖3)(5.的50.0mg(精确至0.1mg)于50mL容量瓶中，用异辛;皖(5.的稀释至刻度。用该溶液标定剖，5-胆面二烯(5.9.2)纯度时，操作如下:分别移取1mL 5-胆笛皖标准溶液和1mL .3，5-胆笛二烯储备溶液(5.9、1)于lOmL容量瓶中(分流进样)或于50mL容量瓶中(柱头

11、进样)，并用异辛炕稀释至刻度。5.9.4 乙腊-叔丁基甲基醒:V(乙腊十V(叔丁基甲基酷)=1+1.5.9.5 色谱流动相:V(乙腊)+V(叔了基甲基酿)=70+30，脱气。6 仪器设备2 实验室常规仪器，以及下列的设备。1) 如:No7734 or 15101 , E. Merck公司，64271 Darmstadt, Germany。给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的指定认可。2) 如:NoC6012，Sigma化学股份有限公司，GrnwalderWeg 30 , 82041 Deisenhofen，Germany。给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产

12、品的指定认可。3) 如:No C8003 , Sigma化学股份有限公司，GrnwalderWeg 30 , 82041 Deisenhofen , Germany。给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的指定认可。G/T 25224.2-201 O/ISO 15788-2: 2003 6. 1 棉花或玻璃棉:棉花需用石油酷提取脱脂8h。6.2 玻璃层析柱:内径10mm，长150mm，配有25mL储液器。6.3 锥形瓶:容量25mL。6.4 容量瓶:容量5mL、10mL、50mL。6.5 烧杯:多种规格。6.6 高效液相色谱系统(HPLC):包含高压泵、进样器(20L和100L

13、定量环)、紫外检测器(测定波长235nr时及积分系统。6. 7 高效液相色谱柱:长250mm，内径4.0mm或4.mm，装有RP18型反相固定相，粒径5m4)。6.8 自动进样小瓶:合适的容量。6.9 旋转蒸发器:具水浴装置e7 抨样实验室收到的样品应具有真实的代表性，运输和储存过程中不得受损和变质。抨样不是本标准规定的内容，推荐采用GBjT5524的方法。8 试样制备8. 1 实验准备测试前需去除油脂样品中的水分。如果需要，将约5g样品快速加热到100oc ，然后离心去水。层析柱(6.2)底端放置小团棉花或玻璃棉(6.1)，然后加入5g硅胶(5.刀，并在木板上轻轻敲实。8.2 外标法称取试样

14、约500mg(精确至1mg)于小烧杯中，用2mL石油酷(5.3)溶解眉，倒人打开活塞的层析柱(8.1)中。每次用2mL石油酷冲洗烧杯两次，也倒入层析柱。当溶剂液面到达填料的顶部时，立即用20mL石油酿洗脱非极性物质，并收集于锥形瓶(6.3)中。在旋转蒸发器(6.9)上蒸干溶剂，用500L乙睛-叔丁基甲基酶(5.9.4)溶解残留物。8.3 内标法使用本方法时，应确保样品中不含63，5胆简二烯(例如:精炼油)。称取样品约500mg(精确至1 mg)于小烧杯中，加入1.0 mL 63，5胆笛二烯内标应用液(5.9.2.2)。用2mL石油醒(5.3)溶解后倒人打开活塞的层析柱(8.1)中。每次用2mL

15、石油醒冲洗烧杯两次，也倒入层析柱。当溶剂液面到达填料的顶部时，立即用20mL石油酷洗脱非极性物质，并收集于锥形瓶(6.3)中。在旋转蒸发器(6.9)上蒸干溶剂，用500L乙睛-叔丁基甲基酿(5.9.4)溶解残留物。9 操作步骤9. 1 高效液相色谱(HPLC)推荐采用下列色谱条件:固定相:RP-18，5m;色谱柱:长250mm，内径4.6mm; 流动相:乙腊-叔丁基甲基膛(5.9.5);流速:1mL/min; 进样量:20L100L(进样量取决于被测浓度的估计值); 检测器:紫外检测器，235nm。如，Supersphere 100 ,RP 18 end-capped , No. 1. 168

16、58 ,E. Merck , 64 271 Darmstadt，Germany。给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的指定认可。3 GB/T 25224.2-2010/ISO 15788-2:2003 9.2 笛醇二烯的鉴定用表1所示的相对保留时间进行色谱峰的鉴别(色谱图参见附录助。胆筒二烯作为参比物，其保留时间大约在20min至25min。表1笛醇衍生物的相对保留时间t经蹲衍生物相对保留时间(RRT)胆笛二烯1. 00 豆笛三烯1. 05 菜笛二烯1. 07 豆笛二烯1. 15 注:根据被测脂肪或油脂种类，有时希望进一步分析筒醇二烯和简醇三烯的组分。可注入精炼油脂样品或自制

17、豆m二烯标准品进行峰的鉴定。在给定的色谱条件下，初榨泊(未漂白的的色谱图上，简醇二烯出峰位置上不会出现任何峰。10 结果表示10. 1 外标法按式(1)通过外标物胆笛二烯的量计算出豆简二烯或自醇二烯的含量:fJ M-m 一A-A C 1 ) 式中:一十一样品中豆笛二烯或自醇二烯的含量，单位为毫克每千克Cmg/kg); As一-3，5-豆笛二烯的峰面积或简醇二烯的峰面积;M-3，5-胆国二烯(外标物)进样质量，单位为微克(g)(5. 9. 2. 1) ; Ac一-3，5-胆笛二烯的峰面积(外标物;若它的峰分裂，则以面积总和计算，如附录B所示hm一一油脂试样的质量，单位为克(g)(8. 2) ;

18、f一一一稀释因子(对于样品体积500L和进样体积20L，j=25)。所用的胆笛二烯的纯度需检测(见5.9.3)，纯度不低于95%时，不需要进行校正。否则，必须校正。胆筒二烯和胆笛皖采用相同的响应系数。测试结果保留两位小数。10.2 内标法按式(2)通过内标物含量计算豆笛二烯或简醇二烯的含量:, A乌XMw =AX石7 ( 2 ) 式中:wf一一一豆笛二烯或简醇二烯的含量，单位为毫克每千克(mg/kg); A-3，5-豆面二烯的峰面积或笛醇二烯的峰面积;M一一-3，5-胆笛二烯(内标物)进样质量，单位微克(g)(5.9.2.2) ; A七一一一3，5-胆面二烯的峰面积(内标物;若它的峰分裂，则以

19、面积总和计算，如附录B所示hmF一一油脂试样的质量，单位为克(g)(8.3)。所用的胆简二烯的纯度需检测(见5.9.3)，纯度不低于95%时，不需要进行校正，否则应校正。胆笛二烯和胆笛:皖采用相同的响应系数。4 G/T 25224.2-201 O/ISO 15788-2: 2003 测试结果保留两位小数。11 精密度11. 1 重复试验附录A汇总了本标准方法实验室间测试精密度的结果，对于其他浓度范围和测试物质来说，本实验测试数据也许并不适用。11. 2 重复性在同一实验室，由同一操作者使用相同设备，按相同的测试方法，并在短时间内对同一被测对象获得的两次独立测定结果的绝对差值大于表A.l中给出的

20、重复性限r值的情况不超过5%。11. 3 再现性在不同实验室，由不同的操作者使用不同的设备，按相同的测试方法，对同一被测对象两次独立测定结果的绝对差值大于表A.l中给出的再现性限R值的情况不超过5%。12 测试报告测试报告应详细说明:一一标识样品的全部必需信息;采样方法(如果已知); 一本标准所涉及的测试方法;本标准未详细说明的、任选的、偶尔的可能影响测定结果的操作细节;-一测试结果;一-如进行了重复性检验，则报告最终结果。5 G/T 25224.2-2010/ISO 15788-2:2003 附录A(资料性附录)实验室间比对试验结果1998年由德国组织了15个实验室对5种不同样品进行国际实验

21、室间比对试验，建立了本方法的精密度。结果按IS05725-1和IS05725-2统计分析，结果如表A.1所示。表A.1实验室间比对试验结果初榨橄榄汹在初榨橄榄泊中加入不同量精炼橄榄汹项目A B C D E 参加试验的实验室数15 15 15 15 15 剔除离群值后的实验室数12 15 14 15 15 平均值/(mg/kg)0.01 0.11 0.18 0.32 0.15 重复性标准偏差，S，/ (mg/kg) 0.000 0.015 0.012 0.021 0.011 重复性变异系数/%。13 7 9 7 重复性限，(=S，X2.的/(mg/kg)0.000 0.042 0.034 o.

22、059 0.031 再现性标准偏差，SR/(mg/kg)0.016 0.034 0.056 o. 100 0.034 再现性变异系数/%144 30 31 31 23 再现性限，R(R=SRX2.的/(mg/kg)0.044 0.096 o. 155 0.279 4 0.095 )一一6 色谱图示例见图B.l。25mV A 峰的鉴别峰la/l(17.5 min/20.3 min):胆笛二烯;附录B(资料性附录)色谱图示例3 B 峰2(21. 8 min) :芸苔筒二烯(主要为campestadiene); 峰3(23. 6 min):豆筒二烯。注:在有些色谱柱上峰la和峰1不分开。色谱图A:特

23、级初榨橄榄泊，未检出豆筒二烯。色谱图B:含0.25mg/kg豆筒二烯的橄榄泊。色谱图C:含0.25mg/kg豆筒二烯的部分精炼植物泊。图B.1色谱图示例GB/T 25224.2一2010/ISO15788-2:2003 25mV 3 2 C goNdE黑白户。自OFON|N.叮NNNH阁。G/T 25224.2一2010/ISO15788-2: 2003 献lJ GB/T 55242008动植物油脂轩样CISO5555:2001 ,IDT). 2J ISO 5725-1: 1994 Accuracy (trueness and precision) of measurement methods

24、 and results-Part 1 : General principles and definitions. 3J ISO 5725-2: 1994 Accuracy (trueness and precision) results-Part 2: Basic method for the determination of repeatability and reproducibility of a standard of measurement methods and 文考参measurement method. 4J Technol. ,96 ,1994,24-128. 5J LINBURG R. G. and COX R. H. Stigmasta-3 , 5 , 22-triene and di-stigmasteryl ether. Can. J. Chem. , 35 ,1957 ,1237-1238. SCHUL TE E. Determination of edible fat refining by HPLC of 3 , 5-steradienes. Fat Sci. 侵权必究书号:155066 1-40682 定价z16.00元导版权专有GB/T 25224.2-2010 打印日期:2010年12月9日F002A