GB T 25220-2010 粮油检验 粮食中赭曲霉毒素A的测定 高效液相色谱法和荧光光度法.pdf

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1、ICS 67.040 X 04 中华人民主K-、和国gB 国家标准GB/T 25220-2010 粮油检验粮食中茄曲霉毒素A的测定高效液相色谱法和荧光光度法Inspection of grain and oils-Determination of ochratoxin A in grains by high performance liquid chromatography and fluorometer 2010-09-26发布数码防伪中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会2011-03-01实施发布目。吕本标准的附录A和附录B为资料性附录。本标准由国家粮食局提出。本

2、标准由全国粮油标准化技术委员会归口。本标准负责起草单位:国家粮食局科学研究院。GB/T 25220-2010 本标准参加起草单位z上海国家粮食质量监测中心、北京中检维康技术有限公司、吉林省粮油卫生检验监测站。本标准主要起草人:王松雪、王雄、何志军、刘熔、薛斌、张艳、孙长坡、马小妮、王岩、高晓春。I 1 范围粮油检验粮食中插曲霉毒素A的测定高效液相色谱法和荧光光度法G/T 25220-2010 本标准规定了采用高效液相色谱法和荧光光度法测定粮食中插曲霉毒素A的原理、试剂和材料、仪器和设备、操作步骤及结果表示。本标准适用于小麦、玉米、稻谷中插曲霉毒素A的测定。免疫亲和柱净化高效液相色谱法和免疫亲和

3、柱净化荧光光度法的检测限均为1g/峙，离子交换固相萃取柱净化高效液相色谱法检测限为0.8g/kg。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法3 免疫亲和柱净化高效液相色谱法3. 1 原理试样中的插曲霉毒素A用乙睛+水提取后，利用抗体与其相应抗原之间的专一性免疫亲和反应，以含有插曲霉毒素A特异性抗体的免疫亲和层析柱净化提取

4、液，用配有荧光检测器的高效液相色谱仪测定，外标法定量。3.2 试剂和材料除另有规定外，所用试剂均为分析纯，实验用水应符合GB/T6682中二级用水要求。3.2.1 乙睛:色谱纯。3.2.2 甲醇:色谱纯。3.2.3 氧化铀。3.2.4 冰醋酸。3.2.5 吐温-20(Tween-20)。3.2.6 碳酸氢铀。3.2.7 磷酸氢二锅。3.2.8 磷酸二氢饵。3.2.9 氯化饵。3.2.10 浓盐酸。3.2. 11 插曲霉毒素A(OchratoxinA，OTA)标准品:纯度二三99%。3.2. 12 提取液z乙腊(3.2.1)+水=60+40。3.2.13 磷酸盐缓冲溶液(PBS):8.0 g氯化

5、纳(3.2.3)、1.2g磷酸氢二铀(3.2. 7)、0.2g磷酸二氢饵(3.2.8)和0.2g氯化饵(3.2. 9)溶解于约990mL水中，用浓盐酸(3.2.10)调节pH至7.0，用水稀释至lL。3.2.14 淋洗缓冲液:25g氯化铀(3.2.3)、5g碳酸氢铀(3.2. 6)溶于水中，加人0.1mL吐温-20(3.2.5), 用水稀释至1L。1 G/T 25220一20103.2.15 流动相:96mL乙睛(3.2.1)、102mL水和2mL冰醋酸(3.2.4)混合，用0.2m滤膜(3.3.5)过滤并脱气。3.2.16 插曲霉毒素A标准储备溶液:准确称取适量的插曲霉毒素A标准品(3.2.

6、 11) ，用甲醇(3.2.2)配制成0.100mg/mL的插曲霉毒素A标准储备液，避光保存于40C冰箱备用。3.2.17 插曲霉毒素A标准工作溶液:准确移取适量的插曲霉毒素A标准储备液(3.2.16)，用甲醇(3. 2. 2)稀释成质量浓度分别为1g/L、2.5g/L、5g/L、10g/L、50g/L的系列标准工作溶液。3.3 仪器和设备3.3.1 天平:感量0.1mg。3.3.2 高速均质器z约22000r/mio，或相当的设备。3.3.3 槽纹折叠滤纸。3.3.4 玻璃纤维滤纸。3.3.5 滤膜:0.2m孔径，25mm直径的聚枫膜或相当者。3.3.6 插曲霉毒素A免疫亲和柱:对插曲霉毒素

7、A的最大吸附容量可达100吨，对于甲醇(3.2.2)+ PBS(3. 2. 13) = 1十10溶液中含有5ng插曲霉毒素A的回收率不小于85%3.3.7 玻璃注射器dOmL。3.3.8 空气压力泵。3.3.9 高效液相色谱仪:带荧光检测器。3.3.10 微量进样器:20Lo3.3. 11 氮吹仪。3.4 操作步骤3.4.1 提取称取试样50g(m，精确到1mg)于均质器(3.3. 2)搅拌杯中，加入5.0g氯化铀(3.2.3)和100.0mL 提取液(3.2.12)。将搅拌杯装于均质器上，于22000r/min高速搅拌提取3mino提取液经槽纹折叠滤纸(3.3.3)过滤于干净的烧杯中。准确移

8、取10.0mL滤液于50mL容量瓶中，加磷酸盐缓冲溶液(3.2.13)稀释至刻度，混合均匀，经玻璃纤维滤纸(3.3.4)过滤，备用。3.4.2 净化将免疫亲和柱(3.:). 6)连接于10mL玻璃注射器(3.3.7)下端。准确移取10.0mL样品提取液(3.4. 1)于玻璃注射器中，将空气压力泵(3.3.8)与玻璃注射器上端连接，调节压力使溶液以约1滴/s2滴/s流速缓慢通过免疫亲和柱，至有空气通过免疫亲和柱时停止加压。用上述方法，以10mL淋洗缓冲液(3.2.14)、10mL水先后淋洗免疫亲和柱，弃去全部流出液，再用1.5mL甲醇(3.2.2)以上述方式洗脱OTA，收集全部洗脱液于玻璃试管中

9、，在450C下以氮吹仪(3.3. 11)用氮气吹干。用液相流动相(3.2.15)溶解残渣并定容到200L(V)，即为试样提取净化液，供高效液相色谱测定时使用。注:对于插曲霉毒素A含茧较高的样品，可将提取滤液进行适当稀释，以保证插曲每毒素A的含量不超过免疫亲和柱的吸附容量。由于不同厂商提供的亲和柱操作程序可能有所区别，实际操作时，请参照免疫亲和柱厂商提供的操作说明和程序操作。3.4.3 色谱参考条件2 色谱柱:C18柱(柱长150mm，内径4.6mm，填料直径5m)或性能相当者。流动相:(3.2.1日。流速:1. 0 mL/mino 荧光检测器:激发波长333nm，发射波长460nm。柱温z室温

10、。进样量:20L。G/T 25220-2010 3.4.4 测定参考上述色谱条件，调节高效液相色谱仪工作参数，使OTA与杂质完全分离。用微量进样器(3. 3. 10)分别吸取等体积的插曲霉毒素A标准工作溶液(3.2.17)和试样提取净化液(3.4.2)分别进样分析，测定响应值(峰高或峰面积)，以标准工作液的浓度与相应的峰面积绘制标准曲线，以试样提取净化液OTA的峰面积在标准曲线上求得相应的OTA的浓度(c)。3.4.5 空白试验除不加试样外，按3.4. 13. 4. 4步骤进行提取、净化、测定，求得空白试液中插曲霉毒素A的浓度(co)。3.5 结果计算与表示3.5.1 试样中插曲霉毒素A的含量

11、按式(1)计算=式中zX，一(c-co) XVX f -m X 1 000 X1一试样中插曲霉毒素A的含量，单位为微克每千克(g/kg);C一一最终定容试样提取净化液中插曲霉毒素A的浓度，单位为微克每升(g/L); Co一一空白试验中最终定容溶液中插曲莓毒素A的浓度，单位为微克每升(g/L); V 试样测定液最终定容体积，单位为毫升(mL);m 试样质量，单位为克(g);f一一样品稀释倍数。. ( 1 ) 3.5.2 每个试样进行两次平行试验，两次测定重复性符合3.6. 2要求，取两次测定的算术平均值作为测定结果。3.6 精密度3.6. 1 实验室间测试附录B中表B.1统计了本方法精密度的实验

12、室间测试数据，这些结果适用于本分析浓度范围和基体之内的样品。3.6.2 重复性在同一实验室，由同一操作者使用相同设备，按相同的测试方法，并在短时间内对同一被测试对象相互独立进行测试获得的两次独立测试结果的绝对差值大于表且1所示重复性限值(r)的情况不超过5%。3.6.3 再现性在不同的实验室，由不同的操作者使用不同的设备，按相同的测试方法，对同一被测对象相互独立进行测试获得的两次独立测试结果的绝对差值大于表B.1所示再现性限值(R)的情况不超过5%。4 免疫亲和柱层析净化荧光光度法4.1 原理试样中的插曲霉毒素A用乙睛十水提取，利用抗体与其相应抗原之间的专一性免疫亲和反应，以含有插曲霉毒素A特

13、异性抗体的免疫亲和层析柱净化提取液，用荧光光度计进行测定。4.2 试剂和材料除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为重蒸水。4.2.1 乙睛:色谱纯。4.2.2 甲醇=色谱纯。4.2.3 氯化铀。4.2.4 吐温-20(Tween-20)。3 GB/T 25220-2010 4.2.5 碳酸氢铀。4.2.6 硫酸奎宁。4.2.7 浓硫酸。4.2.8 氢氧化铀。4.2.9 提取液:乙腊(4.2.1)+水=60十40。4.2. 10 淋洗缓冲液:称取25g氧化铀(4.2.3)、5g碳酸氢铀(4.2.5)溶于适量水中，加入0.1mL吐温-20(4.2.的，加水稀释至1L。4. 2. 11 0.05 m

14、ol/L硫酸溶液:量取2.8mL浓硫酸性.2.7).缓慢加入适量水中，冷却后定容至1000mL。4.2.12 0.1 mol/L氢氧化铀溶液:称取0.40g氢氧化铀(4.2.肘，缓慢加入适量水中，冷却后定容至100 mL。4.2.13 甲醇-氢氧化铀溶液z甲醇(4.2.2)+氢氧化铀(4.2.12)=50+50。4.2. 14 插曲霉毒素A标准溶擅z准确称量适量的插曲每毒素A标准品(3.2.11)，用甲醇-氢氧化铀溶液(4.2.13)溶解并定容，配制成5g/L和10g/L插曲霉毒素A标准溶液。4.2. 15 荧光光度计标定溶液:准确称取一定量的硫酸奎宁(4.2.时，用硫酸溶液(4.2.11)溶

15、解并稀释至100mL，分别用5g/L和10同/L插曲霉毒素A溶液(4.2.14)确定相当于该浓度荧光强度的硫酸奎宁溶液浓度，并用该浓度的硫酸奎宁溶液标定荧光光度计(配制时可参考:1. 625同/L硫酸奎宁的荧光强度约相当于1g/L插曲每毒素A，具体根据实际情况定)。此标定溶液浓度一经确定，可在该荧光计上反复使用。4.3 仪器设备4.3.1 荧光光度计z激发波长360nm、发射波长440nm Q 4.3.2 高速均质器t约22000r/min，或性能相当的设备。4.3.3 槽纹折叠滤纸t元荧光特性。4.3.4 玻璃纤维惊纸:直径11cm.fL径1.5m，元荧光特d性。4.3.5 玻璃试管:直径1

16、2mm，长75mm，无荧光特性。4.3.6 插曲霉毒素A免疫亲和柱:对插曲霉毒素A的最大吸附容量可达100ng以上，对于甲醇(4.2.2)+PBS(3.2.13)=1+10榕液中含有5ng插曲霉毒素八的回收率不小于85%。4.3.7 玻璃注射器:10mL 4.3.8 空气压力泵。4.4 操作步骤4.4.1 提取同3.4.1。4.4.2 净化同3.4.2操作至淋洗步骤结束。准确吸取1mL甲醇(4.2.2)以1滴/s2滴/s的流速洗脱OTA，收集全部洗脱液于玻璃试管(4.3.5)中。4.4.3 荧光光度计标定在激发波长360nm、发射波长440nm条件下，以0.05mol/L硫酸溶液为空白，调节荧

17、光光度计的读数值为零，再分别以不同浓度硫酸奎宁标定溶液(4.2.15)调节荧光光度计的读数值分别为5和10。4.4.4 测定在甲薛洗脱液(4.4.2)中加入1mL O. 1 mol/L NaOH溶液(4.2.12)，总体积为V(2mL)，混匀后立即置于荧光光度计中，读取溶液的荧光强度，此读数即为试样测定液中插曲霉毒素A的浓度(c)。4.4.5 空白试验除不加试样外，按4.4. 14. 4. 4步骤进行提取、净化、测定，求得空白试液中插曲霉毒素A的浓度(co)。4.5 结果计算与表示4.5. 1 试样中插曲霉毒素A的含量按式(2)计算:式中:X2 = (c - co) x y x f -m X2

18、-二-试样中插曲霉毒素A的含量，单位为微克每千克(g/kg);C一一试样提取净化液中插曲霉毒素A浓度，单位为微克每升(g/L); co一一空白试液中插曲霉毒素A浓度，单位为微克每升(g/L); y 甲醇洗脱液与NaOH溶液总体积(2mL)，单位为毫升(mL);m一一试样质量，单位为克(g);f一一试样溶液稀释倍数。GB/T 25220-2010 ( 2 ) 4.5.2 每个试样进行两次平行试验，两次测定重复性符合4.6.2要求，取两次测定的算术平均值作为测定结果。4.6 精密度4.6.1 实验室间测试附录B中表B.2统计了本方法精密度的实验室间测试数据，这些结果适用于本分析浓度范围和基体之内的

19、样品。4.6.2 重复性在同一实验室，由同一操作者使用相同设备，按相同的测试方法，并在短时间内对同一被测试对象相互独立进行测试获得的两次独立测试结果的绝对差值大于表B.2所示重复性限值(r)的情况不超过5%。4.6.3 再现性在不同的实验室，由不同的操作者使用不同的设备，按相同的测试方法，对同一被测对象相互独立进行测试获得的两次独立测试结果的绝对差值大于表且2所示再现性限值(R)的情况不超过5%。5 离子交换回相革取柱净化高效液相色谱法5. 1 原理试样中的插曲霉毒素A用碱性甲醇+水提取，提取液经离子交换固相萃取柱净化、洗脱后，用配有荧光检测器的液相色谱仪进行测定，标准曲线法定量。5.2 试剂

20、和材料除另有规定外，所用试剂均为分析纯，实验用水应符合GB/T6682中二级水要求。5.2.1 乙睛:色谱纯。5.2.2 甲醇:色谱纯。5.2.3 冰醋酸:色谱纯。5.2.4 石油醒:沸程60.C90 .C。5.2.5 甲酸。5.2.6 三镇甲:皖。5.2.7 插曲每毒素A(OchratoxinA)标准品z纯度注99%。5. 2. 8 o. 1 mol/L氢氧化伺溶液。5. 2. 9 O. 1 mol/L磷酸溶液。5.2.10 提取液:氢氧化饵溶液(5.2.8)十甲醇(5.2.2)十水=2+60十38.5.2. 11 淋洗液:氢氧化饵溶液(5.2.8)+乙睛(5.2.1)十水=3+50+47。

21、5.2. 12 洗脱液:甲醇(5.2.2)+乙腊(5.2.1)十甲酸(5.2.5)+水=40十50+5+5.5 G/T 25220-2010 5.2.13 流动相z取45mL乙腊(5.2.1)加54mL水和1mL冰醋酸(5.2.3)混合，过o.45m的滤膜(5. 3. 13)并脱气。5.2.14 插曲霉毒素A标准储备溶液:准确称取1mg插曲霉毒素A标准品(5.2.7)，用甲醇溶解并定容至25mL，配制成40g/mL的标准储备液，避光保存于4.C冰箱备用。5.2.15 插曲霉毒素A标准工作溶液:准确移取适量插曲霉毒素A标准储备液(5.2.14) ，用甲醇(5.2.2)稀释配制成0.4g/mL的工

22、作液。5.3 仪器和设备5.3.1 旋风式谷物粉碎机。5.3.2 振荡器。5.3.3 高效液相色谱仪z带荧光检测器。5.3.4 快速定性滤纸。5.3.5 针头式过滤器:0.45m孔径，13mm直径的醋酸纤维素膜或性能相当者。5.3.6 固相萃取柱:PAX阴离子交换混合反相固相萃取柱，120mg/3 mL。5.3.7 色谱柱:长250mm，内径4.6mm，填料直径5mC18柱或性能相当者。5.3.8 保护柱:长20mm，内径4.6mm，填料直径5mC18柱或性能相当者。5.3.9 一次性塑料注射器:5mL。5.3. 10 氮吹仪。5.3. 11 旋转蒸发仪z带水浴。5.3.12 20目筛。5.3

23、.13 滤膜:0.45m孔径，25mm直径的醋酸纤维素膜或性能相当者。5.4 操作步骤5.4. 1 试样制备玉米、稻谷(糙米)、小麦、小麦粉、大豆等粮食均用旋风式谷物粉碎机(5.3.1)将样品粉碎，用20目筛筛理，筛下物装瓶备用。5.4.2 提取5.4.2. 1 玉米称取试样10g(精确至0.01g) ，加入三氯甲皖50mL (V3) (5.2.的和5mL O. 1 mol/L的磷酸溶液(5.2.9)，于振荡器(5.3.2)上振荡提取3min斗min，提取液用滤纸(5.3.4)过滤，取下层滤液10mL放入100mL平底烧瓶中，于水浴中40.C用旋转蒸发仪(5.3.11)旋转蒸发至接近干捆，用2

24、0mL石油酷(5.2.4)溶解残渣，加入10mL提取液(5.2.10)，再用振荡器振荡提取3min5 min，静置分层后取下层溶液，用滤纸过滤，取滤液5mL(V4)进行固相萃取。5.4.2.2 稻谷(糙米)、小麦、小麦粉、大豆称取试样10g(精确至0.01g)，加入提取液50mL(V3) (5. 2. 10) ，于振荡器(5.3.2)振荡提取3min5 min，用滤纸(5.3.4)过滤，取滤液10mL放入100mL平底烧瓶中，加入20mL石油酷(5.2.4)，振荡器振荡提取3min5 min，静置分层后取下层溶液，用滤纸过滤，取滤液5mL(V4)进行固相萃取净化。5.4.3 固相萃取净化用5m

25、L甲醇(5.2.2)冲洗PAX固相萃取柱(5.3.的，再用3mL提取液(5.2.10)润洗。然后将5 mL样品提取液(5.4.2)加入柱子中，调节流速以1滴/s2滴/s的速度通过柱子，再以同样的流速用3 mL淋洗液(5.2. 11)洗柱，然后用1.2 mL蒸锚水快速冲洗柱子，用空气或氮气吹尽柱子中的液体。最后用4mL5 mL洗脱液(5.2.12)快速洗脱插曲霉毒素A并收集洗脱液于玻璃试管中，于45.C下在氮吹仪(5.3.10)上用氮气吹干溶剂。用流动相溶解残渣并定容到1.0 mL(V2) (或者洗脱液收集于一个50mL的平底烧瓶中，于40.C以下水浴中，10min内旋转蒸发至干，用1.0 mL

26、流动相溶解残留物), 经针头式过滤器(5.3.5)过滤后备用。5.4.4 高效施相色谱参考条件色谱柱:见5.3.70保护柱z见5.3.8。流动相:见5.2.13。注:如色谱仪本身带有在线脱气系统，可不进行脱气。流速:1.0 mL/min。荧光检测器:激发波长333旧n，发射波长460nm。柱温:30.C。进样体积:25L。5.4.5 测定G/T 25220-2010 参考上述色谱条件，调节高效液相色谱仪工作参数，使OTA与杂质完全分离。用流动相将插曲霉毒素A标准工作溶液配制法度分别为0.4ng/mL、0.8ng/mL、1.6 ng/mL、3.2ng/mL、8ng/mL、16 ng/mL、32n

27、g/mL标准工作溶液系列，分别吸收25L不同浓度的标准工作液和试样提取净化液(V1 ) ，进样分析。以各标准溶液中OTA的质量与相应的峰面积(或峰高)作标准曲线。以试样OTA峰面积在标准曲线上求得试样提取净化液中OTA的质量(mx)。5.4.6 空白试验除不加试样外，按5.4.25.4.5步骤进行提取、净化、测定，求得空白试液中插曲霉毒素A的质量(7nQ)。5.5 结果计算与表示5.5. 1 试样中腊曲霉毒素A的含量按式(3)计算:x, =imx - mo) X V 2 X V 3 X 1 000 3二(3 ) V1 XmXV4 x3一一试样中插曲霉毒素A的含量，单位为微克每千克(g/kg);

28、mx一一从标准曲线上获得的插曲霉毒素A的质量，单位为纳克(ng);mo一一空白溶液中插曲每毒素八的质量，单位为纳克(ng);V1一一试样提取净化液的进样体积，单位为微升(L);V2 试样提取净化液最终定容体积，单位为毫升(mL); 只试样总提取液体积，单位为毫升(mL); V4一一用于圄相萃取的样品提取液体积，单位为毫升(mL);m一一试样质量，单位为克(g)。5.5.2 每个试样进行两次平行试验，两次测定重复性符合5.6.2要求，取两次测定的算术平均值作为测定结果。5.6 精密度5.6.1 实验室间测试附录B中表B.3统计了本方法精密度的实验室阀割试数据，这些结果适用于本分析浓度范围和基体之

29、内的样品。5.6.2 重复性在同一实验室，由同一操作者使用相同设备，按相同的测试方法，并在短时间内对同一被测试对象相互独立进行测试获得的两次独立测试结果的绝对差值大于表B.3所示重复性限值(r)的情况不超过5%。5.6.3 再现性在不同的实验室，由不同的操作者使用不同的设备，按相同的测试方法，对同一被测对象相互独立进行测试获得的两次独立测试结果的绝对差值大于表B.3所示再现性限值(R)的情况不超过5%。7 GB/T 25220-2010 附录(资料性附录)插曲霉毒素A标准晶的色谱图A 插曲霉毒素A标准品的色谱图如图A.l和图A.2所示。1. 4 国同.由1. 2 0.8 DJ E 免疲亲和柱净

30、化高效液相色谱法色谱条件下插曲霉毒素A标准品的色谱图10 日4 图.l自动标尺色谱图14.00 阳响附始每稳12.00 10.00 nnu nunu 。OPO口同2.00 4.00 0.00 12.00 13.00 离子交换固相革取柱净化高效液相法色谱条件下插曲霉毒素A标准品的色谱图11. 00 10.00 9.00 8.00 6.00 7.00 mm 5.00 4.00 3.00 2.00 1. 00 0.00 固.28 GB/T 25220-2010 附录B(资料性附录实验室间测试结果表B.l为2008年组织的有5个实验室参与的免疫亲和层析净化高效液相色谱法实验室间测试统计结果，样品为添加

31、了插曲霉毒素A标准品的小麦、稻谷和玉米。表B.1免瘟亲和层析净化高效液相色谱法测试结果的统计分析项目玉米小麦稻谷参加实验室的数量5 5 5 5 5 5 5 5 5 样品的数量1 1 1 1 1 1 1 1 1 去除离群值后的测试实验室5 数量5 5 5 5 5 5 5 5 所有可接受结果的数量15 15 15 15 15 15 15 15 15 平均值/(g/kg)0.850 4.408 8. 843 o. 773 3.995 8. 108 0.813 4.353 8.885 重复性的标准偏差，5，/(闻/kg)0.046 0.444 o. 952 0.055 0.355 0.623 0.04

32、6 0.378 1. 179 重复性的变异系数/%5.4 10.1 10.8 7.2 8.9 7.7 5.6 8. 7 13.3 重复性限值，r/(g/kg)0.130 1. 257 2.693 0.157 1. 006 1. 763 o. 129 1. 070 3.338 再现性标准偏差，5R/(g/kg)o. 135 o. 636 1. 307 0.072 0.361 0.702 o. 109 O. 518 1. 440 再现性的变异系数/%15.9 14.4 14.8 9.3 9.0 8. 7 13.4 11. 9 16.2 再现性限值，R/(g/kg)0.383 1. 799 3. 6

33、99 0.204 1. 023 1. 985 0.309 1. 465 4.075 回收率/%85.0 88.2 88.4 77.3 79. 9 81. 1 81. 3 87.1 88. 9 L一一一一一一一一-表B.2为2008年组织的有6个实验室参与的免疫亲和柱层析净化荧光光度法实验室间测试统计结果，样品为添加了插曲霉毒素A标准品的小麦、稻谷和玉米。表B.2免症亲和柱层析净化荧光光度法测试结果的统计分析项目玉米小麦稻谷参加实验室的数量6 6 6 6 6 6 6 6 6 样品的数量1 1 1 1 1 1 1 1 1 去除离群值后的测试实验室数量6 6 6 6 6 6 6 6 6 所有可接受结

34、果的数量18 18 18 18 18 18 18 18 18 平均值/(g/kg)O. 763 4.022 7.733 O. 799 3.917 7. 694 O. 769 4. 194 8.111 重复性的标准偏差，5，/(g/kg)0.065 O. 614 O. 898 O. 183 0.608 O. 733 0.056 O. 651 1. 222 重复性的变异系数/%8. 5 15.3 11. 6 22.9 15.5 9.5 7.2 15.5 15.1 重复性限值，r/(g/kg)O. 184 1. 738 2. 542 0.518 1. 721 2.075 O. 158 1. 843

35、3.457 再现性标准偏差，5R/(g/kg)0.065 O. 614 O. 898 O. 183 0.608 O. 733 0.056 O. 651 1. 222 再现性的变异系数/%8. 5 15.3 11. 6 22.9 15.5 9.5 7.2 15.5 15.1 再现性限值，R/(g/kg)O. 184 1. 738 2. 542 0.518 1. 721 2.075 O. 158 1. 843 3.457 回收率/%76.3 80.4 77.3 79.9 78.3 76. 9 76.9 83.9 81. 1 9 GB/T 25220-2010 表B.3为2008年组织的有5个实验室

36、参与的离子交换固相萃取柱净化高效液相色谱法实验室间测试统计结果，样品为添加了插曲霉毒素A标准品的小麦、稻谷和玉米。表B.3离子交换固相萃取柱净化高效液相色谱法测试结果的统计分析项目玉米小麦稻谷参加实验室的数量5 5 5 5 5 5 5 5 5 样品的数量1 1 1 1 1 1 1 1 1 去除离群值后的测试实验室数量4 5 5 4 5 5 4 5 5 所有可接受结果的数量12 15 15 12 15 15 12 15 15 平均值/(g/kg)0.909 4. 206 8. 678 0.861 4.679 9.224 0.926 4. 680 9.177 重复性的标准偏差，5，/(g/kg)0

37、.034 o. 180 o. 183 0.031 0.120 0.256 0.048 o. 245 0.287 重复性的变异系数/%3. 8 4.3 2.1 3.6 2.6 2.8 5. 2 5.2 3. 1 重复性限值，r/(g/kg)0.097 o. 509 0.517 0.089 0.340 o. 725 o. 135 o. 693 0.813 再现性标准偏差，5R/(g/kg)o. 143 O. 693 0.873 O. 133 0.418 1. 021 0.095 0.400 1. 403 再现性的变异系数/%15.7 16.5 10. 1 15.4 8.9 11. 1 10. 3

38、8.6 15.3 再现性限值，R/(g/kg)0.403 1. 962 2.472 0.375 1. 184 2.890 0.270 1. 133 3.969 回收率/%90.9 84. 1 86.8 86. 1 93.6 92.2 92.6 93.6 91. 8 10 EON-ONNmNH阁。华人民共和国家标准粮油检验粮食中插曲霉毒素A的测定高效液相色谱法和荧光光度法GB/T 25220-2010 国中每中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销峰印张1字数20千字2010年11月第一次印刷开本880X 1230 1/16 2010年11月第一版晤定价18.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533书号:155066 1-40665 GB/T 25220-2010 打印日期:2010年12月9H F002A