GB 15699-1995 烟草种子霜霉病检疫规程.pdf

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1、GB 156991995 1 主题内容与适用范围 本标准规定了烟草种子检疫对象、程序和方法。 本标准适用于各种入境烟草种子的检疫。 2 术语 2.1 检疫：为预防危险性烟草病虫害传播蔓延采取的一种措施。 2.2 烟草霜霉病 tobacco blue mold Peronospora tabacina Adam 和 Peronospora nicotianae Speg， 异名 Peronospora hyosymi f.sptabacina.又称蓝霉病，是烟草上一种毁灭性病害。现已蔓延至欧洲、美洲、澳洲，目前我国尚无该病发生，因此做为对外检疫对象。 3 检疫程序 3.1 取样 对一批种子总件数

2、按比例抽查取样。在取样时，按对角线五点、棋盘式或分层取样，每点取样1020g（对旅客携带和国际邮包邮寄的少量烟草种子，取样多少视具体情况而定）。取样要尽量做到有代表性，将取的各点样品均匀抽取平均样品。 3.2 孢子囊和孢子梗检疫 3.2.1 检验方法 洗涤检验法。 3.2.2 原理 利用振荡的方法，使粘附在种子上的分生孢子和分生孢子梗分散到水中。 3.2.3 仪器设备 离心机、显微镜、载玻片、振荡器、三角瓶。 3.2.4 试剂 蒸馏水。 3.2.5 步骤 取烟种5g，放入三角瓶中，加一定量蒸馏水浸泡0.5h后，再加蒸馏水剧烈振荡5min（也可放在振荡 器上振荡）。将洗液注入离心管，以1000r

3、/min的速度离心5min，倾去大部分上清液，每个离心管再加入 少量蒸馏水，使沉淀重新悬浮，取悬浮液制片，用400500倍显微镜检查，每个载玻片查10个视野（见 页码，1/10GB 1569919952006-3-29file:/C:InetpubwwwrootdatagbcC156990R.htm图1），每个样品检查510个载玻片，检查有无树枝状孢子囊梗和对生的孢子囊，孢子囊大约（1318） m16 m 29 m。 图 1 10个视野在载玻片上的分布 烟草霜霉病菌的分生孢子梗和分生孢子切片，见图2。 图 2 烟草霜霉病菌的分生孢子梗和分生孢子切片 3.3 卵孢子检验 3.3.1 检验方法 乳

4、酚油透明法。 3.3.2 原理 乳酚油加苯胺蓝是真菌标准的浮载剂。苯胺蓝是碱性染料，可染真菌的原生质，而不染页码，2/10GB 1569919952006-3-29file:/C:InetpubwwwrootdatagbcC156990R.htm细胞壁，因此可以分辨清楚很难看清的真菌孢子。 3.3.3 仪器设备 显微镜、烧杯、电炉、水浴锅。 3.3.4 试剂 苯胺蓝、苯酚、甘油、乳酚油、蒸馏水。 3.3.5 步骤 取混合样品烟草种子5g，置于烧杯中用乳酚油煮沸1530min，煮至烟草种子透明，但尚不至于消解为止。加苯胺蓝（棉蓝）染色后用乳酚油作浮载剂，然后镜检。每个样品查20个载玻片乳酚油的配

5、方：苯酚结晶（水浴加热溶化）20mL，乳酸20mL，甘油40mL，蒸馏水20mL。 3.3.6 检验结果的统计 统计孢子数量时，用血球计数器，观察80个小格，用其平均数4000000，就是每毫升悬浮液孢子的数量。 3.4 种子检验 3.4.1 检验方法 萌芽检验。 3.4.2 仪器设备及试剂 灭菌锅、温箱、培养皿、滤纸、次氯酸钠、无菌水。 3.4.3 步骤 取混合样品种子100粒，重复4次。取直径10cm的无菌柏氏培养皿或塑料培养皿4个，每个培养皿放 入三层吸足无菌水的吸水纸，将100粒种子均匀排列在吸足水的纸上，盖上培养皿，保持湿度。然后放 入1520温箱内培养，经47d观察幼苗上是否有烟草

6、霜霉病菌浸染的迹象。若检查种子内部是否有 病菌时，则将种子浸入1次氯酸钠溶液10min，然后置于无菌滤纸上，培养检查。 3.4.4 检查结果的统计 单皿发病率和平均发病率按式（1）、（2）计算： 3.5 分离培养检验 3.5.1 检验方法 单皿发病率（）=发病种子数/100（1）平均发病率（）=供试发病种子总和/（4100）（2）页码，3/10GB 1569919952006-3-29file:/C:InetpubwwwrootdatagbcC156990R.htm 琼脂培养检验。 3.5.2 步骤 用适于植物水培的营养盐类2.5g，琼脂14g，蒸馏水1000mL。用300mL的大口三角瓶，每

7、瓶盛培养基80mL，用棉塞塞好，消毒后将培养基做成斜面。培养基凝固后，用表面消毒过的种子，在培养基斜面上每瓶加0.01g置于1520下，种子发芽后，观察幼苗是否有烟草霜霉病菌侵染的迹象。 3.5.3 结果统计 统计感染霜霉病的百分比，统计方法同3.4.4。 3.6 隔离试种 3.6.1 报检 引种入境之前，引种人应持引种审批单，出口国的检疫证书，贸易合同，向入境的口岸植检机关报检（包括非正规渠道来的种子）。 3.6.2 供检材料登记 供检材料由引种人（单位）送到隔离检疫圃，交检疫收件人登记。 3.6.3 初检 由检疫人员在初检室对送检材料进行初步检查。 3.6.4 检疫圃试种 初检合格，可以进

8、入检疫圃的供检材料，在检疫温室用消毒过的土和盆进行育苗盆栽。 3.6.5 隔离试种结果评定 在温室内对供检材料在生长期进行检查，对检查和检测情况进行详细登记，根据检测情况作出评定。 4 检疫检验后的评定及处理 4.1 入境的烟草种子经检疫未发现被检对象则认为合格。 4.1.1 发放检疫放行通知单附录A（补充件） 经检疫后认为合格的签发检疫放行通知单，或在货运单上加盖检疫放行章。经严格包装，由专人送中国烟草总公司青州烟草研究所隔离试种检疫。 4.1.2 国内试种 经隔离试种后未检出被检对象的，交送检人（单位）在国内试种。 4.2 检疫不合格 页码，4/10GB 1569919952006-3-2

9、9file:/C:InetpubwwwrootdatagbcC156990R.htm 经检疫发现有检疫对象者认为不合格。 4.2.1 签发检疫处理通知单附录B（补充件） 检疫不合格，发现被检对象应作以下处理并签发检疫处理通知单。 4.2.2 销毁 被检烟种若发现有检疫对象，而且在抽检烟种中1的比例内有检疫对象，则应在检疫地原地销毁。 4.2.3 退回原地 被检烟种中有检疫对象，有以下情况可退回原地，材料较有研究应用价值，抽查烟种检疫对象不超 过1。 4.2.4 处理后隔离试种 对少量引进有价值材料可用热处理，处理后在检疫温室试种。 干热处理方法：干热消毒，事先将种子进行60，23h的通风，使种

10、子充分干燥；种子薄摊成2cm以内厚度，用干热消毒器70干热处理2d以上。 处理后的种子在检疫温室用无菌土、盆试种，检验有无检疫对象。将繁殖后的种子（应是无菌的）交送检人（单位），可在国内试种。 5 发放检疫证书 入境烟草种子没有发现检疫对象时，签发植物检疫证书附录C（补充件）；经检疫不符合贸易合同规定时，签发检验证书附录D（补充件），说明情况作为对外索赔证件，并制备保存该被检烟种和检疫对象的标本，作为索赔的依据。 6 检疫报告 包括受检日期、货批号、数量及重量。 检疫结果： 处理意见： 检疫员： 检疫单位： 附 录 A 检疫放行通知单 （补充件） 页码，5/10GB 1569919952006

11、-3-29file:/C:InetpubwwwrootdatagbcC156990R.htm中华人民共和国动植物检疫 放 行 通 知 单 编号：_中华人民共和国动植物检疫所 附 录 B 检疫处理通知单 （补充件） 中华人民共和国动植物检疫 年 月 日报检单位_ 品名及数量_ 提单/运单号_出口国家/地区_ 运输工具名称及号码_ 上述货物经检疫合格 标记唛码 页码，6/10GB 1569919952006-3-29file:/C:InetpubwwwrootdatagbcC156990R.htm处 行 通 知 单 编号：_中华人民共和国动植物检疫所 附 录 C 植物检疫证书 （补充件） 中华人民

12、共和国农业部 植 物 检 疫 证 书 PHYTOSANITARY CERTIFICATE MINISTRY OF AGRICULTURE OF P.R.CHINA 年 月 日报检单位_ 品名及数量_ 提单/运单号_出口国家/地区_ 运输工具名称及号码_ 检疫情况及处理要求 标记唛码 页码，7/10GB 1569919952006-3-29file:/C:InetpubwwwrootdatagbcC156990R.htm编号 No._发货人及地址Name & Address of Consignor_ 受货人及地址Name & Address of Consignee_ 品名及数量Name of

13、 produce & Quantity Declared_ 产地Place of Origin_发货口岸 标记唛码 Mark & Number Port of Despatch_到货日期Date of Arrival_运输工具Means of Conveyance_卸毕日期Date of Completion of Discharge_兹证明本批货物经本所于 年 月 日检疫，发现有下列病、虫、杂草籽：This is to certify that the consignment described above was examined on by this service and the fo

14、llowing diseases and/or insect pests and or weed seeds were found：这批货物不符合买卖双方签订的第 号贸易合同/合约的规定。The consignment does not comply with the requirements stipulated in the contract No.agreed between the consignor and the consignee.印章 签证日期 Date of lssue_Stamp 检疫官 Name of Authorized Officer_页码，8/10GB 156991

15、9952006-3-29file:/C:InetpubwwwrootdatagbcC156990R.htm 附 录 D 检 验 证 书 （补充件） 签 名 Signature_ _ 中华人民共和国动植物检疫机关及其官员或代表不承担颁发本证书的任何财经责任。No financial liability shall attach to the animal and plant quarantine service ofP.R.China or to any officer or representative of the service with respect to thiscertificat

16、e. 中华人民共和国 动植物检疫所检 验 证 书（ANIMAL AND PLANT QUARAN- TINE SERVICE THE PEOPLES RE PUBLIC OF CHINA） 地址：_（ADDRESS： ）电报挂号：_（CABLE：_）（INSPECTION CERTIFICATE） 第 号 （NO. ） 年 月 日 （DATE ）发货人（Consignor）_受货人（Consignee）_品 名 （Commodity）_标记及号码： （Mark & Number）_报检重量及（或）数量（Weight &/or Quantity Declared）_发货港或站 （Port or

17、Station of Despatch）_到货日期 （Date of Arrival）_装运船名或车号 （Means of Conveyance）_卸货日期 （Date of Completion of Discharge）_本批货物经本所于 年 月 日检验，发现有下列病、虫、杂草籽： （This lot of commodity was examinedon by this service and the f ollowing 页码，9/10GB 1569919952006-3-29file:/C:InetpubwwwrootdatagbcC156990R.htm 注意：本证书译文中如有何异

18、点，概以中文为主。 （N.B.In case of difference，the Chinese text shall be regarded a s authentic.） diseases and/orinsect pests and /or weed seeds were found：）这批货物不附合买卖双方签定的第 号贸易合同的规定。 （This lot of commodity doesnt comply with the requirements sti pulated inteh contract No. agreed betwween the consignor and the consignee）所长 （Director）检验员 （inspector）页码，10/10GB 1569919952006-3-29file:/C:InetpubwwwrootdatagbcC156990R.htm