SN T 2094-2008 进出口食品中α-硫丹和β-硫丹残留量的检测方法.酶联免疫法.pdf
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1、书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖犜进出口食品中硫丹和硫丹残留量的检测方法酶联免疫法犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犲狀犱狅狊狌犾犳犪狀犪狀犱犲狀犱狅狊狌犾犳犪狀狉犲狊犻犱狌犲狊犻狀犳狅狅犱狊狋狌犳犳犳狅狉犲狓狆狅狉狋犪狀犱犻犿狆狅狉狋犈狀狕狔犿犲犾犻狀犽犲犱犻犿犿狌狀狅狊狅狉犫犲狀狋犪狊狊犪狔犿犲狋犺狅犱发布实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布书书书前言本标准附录和附录为规范性附录,附录和附录为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位:中华人民共和国天津出入境检验检疫局、天津科技大学。本标准主要起草人:郑文杰、王硕、张宏伟、张燕、贺艳、刘火
2、亘、林安清、赵卫东、魏亚东、吴延晖。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。犛犖犜进出口食品中硫丹和硫丹残留量的检测方法酶联免疫法范围本标准规定了进出口食品中硫丹和硫丹总残留量的酶联免疫测定方法。本标准适用于粮谷、蔬菜、茶叶、烟草、水果、肉及肉制品、虾中硫丹残留量的筛选检测。鱼类不适用酶联免疫法的测定,用胶体金试纸条法测定,方法见附录。测定方法方法提要用甲醇或丙酮提取样品中硫丹和硫丹,用竞争性酶联免疫法进行检测。试剂和材料除另有要求外,所有试剂均为分析纯,水为二次蒸馏水。甲醇。丙酮。亚铁氰化钾。硫酸锌溶液。磷酸氢二钠()。磷酸二氢钠()。氯化钠。无水醋酸钠。环糊精。过氧化氢脲。,四甲基对二氨
3、基联苯。二甲基亚砜。磷酸盐缓冲液():见附录。吐温。无水硫酸钠:灼烧,在干燥器内冷却至室温,贮于密封瓶中备用。鱼皮胶水溶液(保存保存)。掩蔽剂稀释液:鱼皮胶磷酸盐缓冲液(,体积比)稀释,于使用时配制。溶液:甲醇:掩蔽剂稀释液(,体积比)。酶标记物:辣根过氧化物酶和半抗原的结合物,保存,于使用时用磷酸缓冲液倍稀释,酶标物稀释后不能继续使用。洗涤液,见附录。底物液,见附录。底物液,见附录。终止液:硫酸。、硫丹混合标准品(英文名称:、代码:):纯度大于等于。标准品贮备液:配制成甲醇贮备液,保存。犛犖犜低温保存试剂,放置于室温不要超过,使用时,各溶液应达到室温。仪器和设备粉碎机。旋涡混合器。气浴摇床。
4、酶标仪。市售硫丹检测试剂盒。氮吹仪。单道微量加样器:,。多通道微量加样器:。制样蔬菜(大白菜、蒜、葱、茼蒿、小松菜、甘蓝(绿、紫)、卢笋、姜、菠菜、胡萝卜、芹菜):称取(精确到)粗粉碎样品到玻璃瓶中,加入甲醇,机械振荡()。室温静置分层,吸取上清液用掩蔽剂稀释液稀释倍后进行测定,胡萝卜稀释倍;芹菜稀释倍。粮谷(红豆、绿豆、毛豆、花生):称取(精确到)粗粉碎样品到玻璃瓶中,加入甲醇,机械振荡()。室温静置分层,吸取上清液用掩蔽剂稀释液稀释倍后进行测定。茶叶:称取(精确到)粗粉碎样品到玻璃瓶中,加入甲醇,机械振荡()提取。室温静置分层,吸取上清液用掩蔽剂稀释液稀释倍后进行测定。烟草:称取(精确到)
5、粗粉碎样品到玻璃瓶中,加入甲醇,机械振荡()。静置,吸取上清液用掩蔽剂稀释液稀释倍后进行测定。肉类(牛肉、羊肉、鸡肉):称取(精确到)粗粉碎样品到玻璃瓶中,加入甲醇,涡旋剧烈混合,过滤,吸取上清液用掩蔽剂稀释液稀释倍后进行测定。虾:称取(精确到)待测样,搅碎后加入无水硫酸钠搅匀,再加入丙酮、硫酸锌溶液和亚铁氰化钾,涡旋混匀;于离心。取全部上清液氮吹至干;加入甲醇水溶液,充分溶解,滤纸过滤。虾样的标准曲线用阴性样品提取液配制。酶联免疫法检测标准曲线的制备用溶液稀释的硫丹标准溶液储备液至,用溶液对的硫丹标准溶液进行梯度稀释,得到一系列不同浓度的硫丹标准溶液(,)。样品测定在酶标板中分别加入不同浓度
6、的硫丹标准溶液和样品待测液,在空白和对照孔中分别加入的水。除空白孔外,在每个孔中加入的酶标记物稀释液,空白孔中则加入磷酸盐缓冲液,轻拍混匀,用粘胶纸封住微孔以防溶液挥发,室温孵育。弃掉酶标板中的液体,用洗涤液洗板次。加入混合好的底物液,轻轻混匀,室温放置后,每个孔加入的终止液,轻轻晃动酶标板,内在酶标仪上读出每孔、吸光值。结果的计算计算抑制率值测定不同浓度硫丹对抗原抗体结合反应的抑制率见式():犐犆犃样品犃空白犃对照犃空白()犛犖犜式中:犐犆硫丹对抗原抗体结合反应的抑制率,:犃对照吸光值与吸光值的差值;犃样品硫丹标准液或样液的平均吸光度值;犃空白不加入酶标及硫丹标准液的平均吸光度值。绘制标准曲
7、线以抑制率为纵坐标,硫丹浓度对数为横坐标绘制校正曲线。每次试验均应重新绘制标准曲线,见图。图硫丹标准曲线结果计算从图绘制的标准曲线上读取样液抑制率所对应的硫丹浓度(犮),按式()计算试样中的硫丹残留量:犡犮犚犕()式中:犡试样中硫丹残留量,单位为微克每千克();犮根据样品孔的抑制率查得试样中硫丹浓度,单位为微克每升();犚某类样品换算系数,系数见表;犕调整待测定液浓度使其在标准曲线范围内所稀释的倍数。表不同类样品的换算系数值食品名称牛肉、羊肉、鸡肉大白菜、蒜、葱、茼蒿、小松菜、甘蓝、芦笋胡萝卜芹菜、绿豆、红小豆、花生茶叶烟草虾犚值检测低限、回收率检测低限本方法检测低限见附录。回收率硫丹添加浓度
8、和回收率的实验数据见附录。犛犖犜附录犃(规范性附录)试剂犃磷酸盐缓冲液磷酸盐缓冲液:磷酸盐氯化钠,磷酸氢二钠()磷酸二氢钠()氯化钠()调值至。用水定容至。于保存。使用时,溶液应达到室温,用水稀释。犃洗涤液洗涤液:磷酸盐缓冲液水吐温磷酸氢钠()磷酸二氢钠()氯化钠()加水定容至,室温保存周周。使用时,用水稀释。犃底物液犃底物液犃无水醋酸钠环糊精过氧化氢脲调值至。加水定容至。于保存,使用时需达到室温。犃底物液犅,四甲基对二氨基联苯()二甲基亚砜()使用前室温避光保存。使用时,按底物液底物液为(体积比)混合使用。犛犖犜附录犅(规范性附录)鱼中硫丹和硫丹总残留量的检测方法胶体金试纸条法犅样品提取称取
9、(精确到)待测样,切碎后加入无水硫酸钠搅匀,再加入甲醇,涡旋混匀。过滤后氮吹至干,再加入含甲醇的磷酸盐吐温溶液稀释液待测。犅检测将胶体金标记硫丹抗体原液与抗体稀释液按体积比混合,取样品提取液,加入金标抗体稀释液混匀。取上述混合液滴加到试纸条包被区域,待液体完全流过后,在质控线显色的情况下,目视检测线的颜色。将限量样品管加入含甲醇的磷酸盐吐温溶液,溶解混匀,以此试剂代替样品待测液按上述方法操作,作为限量对照,样品测试带颜色比限量带浅,则判断为样品中硫丹含量超过限量。犅检测低限检测低限。犛犖犜附录犆(资料性附录)酶联免疫方法的测定低限表犆酶联免疫方法的测定低限样品检出限()大葱芹菜胡萝卜大白菜茼蒿
10、甘蓝(绿)甘蓝(紫)大蒜菠菜小松菜芦笋样品检出限()姜红小豆绿豆毛豆花生茶叶牛肉鸡肉羊肉虾烟草犛犖犜附录犇(资料性附录)硫丹添加浓度和回收率表犇硫丹添加浓度和回收率样品添加水平回收率大葱芹菜胡萝卜大白菜茼蒿甘蓝(绿)甘蓝(紫)大蒜菠菜小松菜芦笋样品添加水平回收率姜红小豆绿豆乇豆花生茶叶牛肉鸡肉羊肉虾烟草犛犖犜犉狅狉犲狑狅狉犱犜犺犲犃狀狀犲狓犃犪狀犱犅狅犳狋犺犻狊狊狋犪狀犱犪狉犱犻狊狀狅狉犿犪狋犻狏犲犪狀狀犲狓犜犺犲犃狀狀犲狓犆犪狀犱犇犻狊犻狀犳狅狉犿犪狋犻狏犲犪狀狀犲狓犜犺犻狊狊狋犪狀犱犪狉犱狑犪狊狆狉狅狆狅狊犲犱犫狔犪狀犱犻狊狌狀犱犲狉狋犺犲犮犺犪狉犵犲狅犳犆犲狉狋犻犳犻犮犪狋犻狅狀犪狀犱犃
11、犮犮狉犲犱犻狋犪狋犻狅狀犃犱犿犻狀犻狊狋狉犪狋犻狅狀狅犳狋犺犲犘犲狅狆犾犲狊犚犲狆狌犫犾犻犮狅犳犆犺犻狀犪犜犺犻狊狊狋犪狀犱犪狉犱狑犪狊犱狉犪犳狋犲犱犫狔犜犻犪狀犼犻狀犈狀狋狉狔犈狓犻狋犐狀狊狆犲犮狋犻狅狀犪狀犱犙狌犪狉犪狀狋犻狀犲犅狌狉犲犪狌狅犳狋犺犲犘犲狅狆犾犲狊犚犲狆狌犫犾犻犮狅犳犆犺犻狀犪,犜犻犪狀犼犻狀犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔狅犳犛犮犻犲狀犮犲犪狀犱犜犲犮犺狀狅犾狅犵狌狔犜犺犻狊狊狋犪狀犱犪狉犱狑犪狊犿犪犻狀犾狔犱狉犪犳狋犲犱犫狔犠犲狀犼犻犲犣犺犲狀犵,犛犺狌狅犠犪狀犵,犎狅狀犵狑犲犻犣犺犪狀犵,犢犪狀犣犺犪狀犵,犢犪狀犎犲,犡狌犪狀犔犻狌,犠犲犻犱狅狀犵犣犺犪狅,犠犲犻犱狅狀犵犣犺犪狅
12、,犃狀狇犻狀犵犔犻狀,犢犪犱狅狀犵犠犲犻,犢犪狀犺狌犻犠狌犜犺犻狊狊狋犪狀犱犪狉犱犻狊犪狆狉狅犳犲狊狊犻狅狀犪犾狊狋犪狀犱犪狉犱狆狉狅犿狌犾犵犪狋犲犱犳狅狉狋犺犲犳犻狉狊狋狋犻犿犲犛犖犜犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犲狀犱狅狊狌犾犳犪狀犪狀犱犲狀犱狅狊狌犾犳犪狀狉犲狊犻犱狌犲狊犻狀犳狅狅犱狊狋狌犳犳犳狅狉犲狓狆狅狉狋犪狀犱犻犿狆狅狉狋犈狀狕狔犿犲犾犻狀犽犲犱犻犿犿狌狀狅狊狅狉犫犲狀狋犪狊狊犪狔犿犲狋犺狅犱犛犮狅狆犲犜犺犻狊狊狋犪狀犱犪狉犱狊狆犲犮犻犳犻犲狊狋犺犲犿犲狋犺狅犱狊狅犳犱犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀犫狔犈犔犐犛犃犿犲狋犺狅犱狅犳,犲狀犱狅狊狌犾犳犪狀狉犲狊犻犱狌犲狊犻狀犳狅狅犱狊狋狌犳犳
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14、狊狋犻犾犾犲犱犫狔犿犲狋犺犪狀狅犾犪狀犱犪犮犲狋狅狀犲犜犺犲犫犪狊犻狊狅犳狋犺犲狋犲狊狋犻狊狋犺犲犮狅犿狆犲狋犻狋犻狏犲犲狀狕狔犿犲犾犻狀犽犲犱犻犿犿狌狀狅狉犲犪犮狋犻狅狀犚犲犪犵犲狀狋狊犪狀犱犿犪狋犲狉犻犪犾狊犐狀狋犺犻狊狊狋犪狀犱犪狉犱,犪犾犾狋犺犲犮犺犲犿犻犮犪犾狉犲犪犵犲狀狋狊狊犺狅狌犾犱犫犲犪狀犪犾狔狋犻犮犪犾犾狔狆狌狉犲犪狀犱“狑犪狋犲狉”犻狊犱狅狌犫犾犲犱犻狊狋犻犾犾犲犱狑犪狋犲狉犕犲狋犺犪狀狅犾犃犮犲狋狅狀犲犉犲狉狉狅狌狊犓犆犖犿狅犾犔犣狀犛犗犿狅犾犔犖犪犎犘犗犎犗犖犪犎犘犗犎犗犖犪犆犾犛犖犜犖犪犃犆犮狔犮犾狅犱犲狓狋狉犻狀犎狔犱狉狅犵犲狀狆犲狉狅狓犻犱犲狌狉犲犪狊犲,狋犲狋狉
15、犪犿犲犺狋狔犫犲狀狕犻犱犻狀犲犇犕犛犗犘犺狅狊狆犺犪狋犲犫狌犳犳犲狉(狆犎)犛犲犲犃狀狀犲狓犃犜狑犲犲狀犖犪犆犗犳犻狊犺狊犽犻狀犵犲犾,狊狋狅狉犲犪狋犜犲犪狋狌犱狅狉犲犪犵犲狀狋:犳犻狊犺狊犽犻狀犵犲犾:狆犺狅狊狆犺犪狋犲犫狌犳犳犲狉(,犞犞)犚犲犪犵犲狀狋:犿犲狋犺犪狀狅犾:狋犲犪狋狌犱狅(,犞犞)犈狀狕狔犿犲犮狅狀犼狌犵犪狋犲:犺狅狉狊犲狉犪犱犻狊犺犮犪狋犪犾犪狊犲犪狀犱狊犲犿犻犪狀狋犻犵犲狀,狊狋狅狉犲犪狋,犱犻犾狌狋犲犱犳狅犾犱狑犻狋犺狆犺狅狊狆犺犪狋犲犫狌犳犳犲狉狑犺犲狀狌狊犲犱犜犺犲犱犻犾狌狋犲犱狊狅犾狌狋犻狅狀犻狊狌狊犲犾犲狊狊犪犳狋犲狉犺犠犪狊犺狉犲犪犵犲狀狋狊犲犲犃狀狀犲狓犃
16、犛狌犫狊狋狉犪狋犲犃,狊犲犲犃狀狀犲狓犃犛狌犫狊狋狉犪狋犲犅,狊犲犲犃狀狀犲狓犃犛狋狅狆狊狅犾狌狋犻狅狀:犎犛犗犿狅犾犔犈狀犱狅狊狌犾犳犪狀犪狀犱犈狀犱狅狊狌犾犳犪狀狊狋犪狀犱犪狉犱(犆犃犛犮狅犱犲:)犘狉犲狆犪狉犲犱狊狋犪狀犱犪狉犱狊狅犾狌狋犻狅狀:犵犿犔犿犲狋犺犪狀狅犾,狊狋狅狉犲犪狋犃犾犾狊狅犾狌狋犻狅狀犿狌狊狋犫犲狊狋狅狉犲犱犪狋犾狅狑狋犲犿狆犲狉犪狋狌狉犲犪狀犱狀犲狏犲狉犫犲狆犾犪犮犲犱犪狋狉狅狅犿狋犲犿狆犲狉犪狋狌狉犲犾狅狀犵犲狉狋犺犪狀犺,狉犲犪犮犺狉狅狅犿狋犲犿狆犲狉犪狋狌狉犲犫犲犳狅狉犲狌狊犲犃狆狆犪狉犪狋狌狊犪狀犱犲狇狌犻狆犿犲狀狋犕狌犾犾犲狉犛犖犜犞犻犫狉犪狋狅狉犎狅犿狅
17、犵犲狀犻狕犲狉犕犻犮狉狅狑犲犾犾狊狔狊狋犲犿犈狀犱狅狊狌犾犳犪狀犱犲狋犲犮狋犻狅狀犽犻狋犚狅狋犪狉狔犲狏犪狆狅狉犪狋狅狉犘犻狆犲狋狋犲狊:犔,犔,犔犕狌犾狋犻犮犺犪狀狀犲犾狆犻狆犲狋狋犲:犔犛犪犿狆犾犲犲狓狋狉犪犮狋犻狅狀犞犲犵犲狋犪犫犾犲:犆犺犻狀犲狊犲犮犪犫犫犪犵犲,犵犪狉犾犻犮,狊犮犪犾犾犻狅狀,犵狉犲犲狀狏犲犵犲狋犪犫犾犲,狑狅犪犱,犮犪犫犫犪犵犲(犵狉犲犲狀,狆狌狉狆犾犲),犪狊狆犪狉犪犵狌狊,犵犻狀犵犲狉,狊狆犻狀犪犮犺,犮犪狉狉狅狋狊,犮犲犾犲狉狔:犠犲犻犵犺狋犵(狆狉犲犮犻狊犻狅狀犵)狊犪犿狆犾犲犵狉犻狀犱,犪犱犱犿犔犿犲狋犺犪狀狅犾,狏犻犫狉犪狋犲犪狋狉犿犻狀犺,犱犲狆狅狊犻
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