GB T 23884-2009 动物源性饲料中生物胺的测定.高效液相色谱法.pdf

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1、ICS 65. 120 B 46 中华人民共和国国家标准GB/T 23884-2009 动物源性饲料中生物肢的测定高效液相色谱法Determination of biogenic amines in animal-derived feeds一High performance Iiquid chromatography 2009-05-26发布中华人民共和国国家质量监督检验检菇总局中国国家标准化管理委员会2009-10-01实施发布G/T 23884-2009 目。吕本标准的附录A和附录B为资料性附录。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC76)提出并归口。本标准负责起草单位:中国农

2、业大学、农业部饲料效价与安全监督检验测试中心(北京)。本标准主要起草人:杨文军、张丽英、王宗义。I I 范围动物源性饲料中生物肢的测定高效液相色谱法G/T 23884-2009 本标准规定了以高效液相色谱测定鱼粉和肉骨粉中的组胶、腐胶、尸胶、酶胶、精胶和亚精胶的方法，6种生物胶的化学名称、分子式和相对分子质量(按1999国际相对原子质量)参见附录A。本标准适用于动物源性饲料鱼粉和肉骨粉中组胶、腐胶、尸胶、酷胶、精胶和亚精胶的测定，检测限为0.5mg/kg o 2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款，凡是注目期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订

3、版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法GB/T 20195动物饲料试样的制备3 原理试样中的组胶、腐胶、尸胶、酷胶、精胶和亚精胶以5%三氯乙酸溶液提取，经碱化，苯甲酷氯衍生化后，乙酿萃取，氮气吹干，甲醇溶解残渣，反相液相色谱柱分离测定，紫外检测器检测，外标法定量分析。4 试剂和材料除特殊注明外，本标准所用试剂均为分析纯，水符合GB/T6682二级用水规定。4. 1 苯甲曹先氯。4.2 乙腊(色谱纯)04.3 三氯乙酸。4.4 乙酸钱。4.5 氢氧化锅

4、。4.6 乙隧。4.7 5%三氯乙酸提取液z称取50g三氯乙酸，用水溶解，并定容至1000 mL。4.8 c(CH3COOl吨H4)=0.02 mol/L乙酸钱溶液z称取1.54 g乙酸钱，用水溶解，并定容至1000 mL。4. 9 c(NaOH) = 2 mol/L氢氧化销溶液z称取80g氢氧化锁，用水溶解，并定容至1000 mL。4. 10 标准储备液:分别准确称取组胶、腐胶、尸胶、酶胶、精胶和亚精胶标准品适量(含量二三99.0%)，于棕色容量瓶中，用水溶解，定容至刻度，摇匀，使其溶液浓度为1mg/mL，贮存于4oc冰箱中，有效期为一个月。4. 11 标准工作液:准确量取标准储备液(4.1

5、0)于容量瓶中，用水稀释，依次配制成浓度为O.1g/mL、1.0g/mL、5.0g/mL、10.0问/mL、20.0问/mL、50.0g/mL的标准溶液，现配现用。5 仪器5. 1 分析天平(精度0.1mg)。1 GB/T 23884-2009 5.2 超声波清洗器。5.3 微孔有机相滤膜:孔径0.45m。5.4 恒温水浴锅。5.5 涡旋振荡器。5.6 氮吹仪。5. 7 摇床。5.8 高效液相色谱仪:配置紫外检测器。6 试样制备按GB/T20195的规定制备试样，粉碎过孔径。.45mm筛，充分混匀，装瓶，备用。7 分析步骤7. 1 试液的制备7. 1. 1 提取称取1.00 g,_,2. 00

6、 g试样(准确至0.1mg)于50mL螺口离心管中，准确加人20.00mL提取液(4.7) ，摇床中振荡提取，转速为120r/min，振摇30mino提取液在3000 r/min离心10min，上清液作为衍生化使用。7. 1. 2 衍生化准确移取2.00mL上清液(7.1.1)于10mL离心管中，加入2.00 mL 2 mol/L氢氧化锅溶液(4.9) ，摇匀，再加人20.0L苯甲酷氯(4.口，涡旋振荡30s，置于37.5 oc水浴锅中20min，每隔5min 振荡30s 7.1.3 萃取离心管中加入2.00g氯化锅，涡旋振荡30s ，再加入2.00mL乙隧(4.6) ，涡旋振荡30s，静置2

7、 min，在3000 r/min离心10min。7. 1. 4 氮吹将离心管上层的乙隧层移取至另外10.00mL离心管中，氮气吹干，向残渣中准确加入1.00 mL甲醇，甲醇液通过0.45m有机相滤膜，滤液上机测定。7.2 标准工作液的衍生化、萃取和氮吹同时移取标准工作液，衍生化、萃取和氮吹，步骤同7.1.2、7.1.3和7.1.407.3 色谱条件7.3.1 色谱柱:具有C18填料的柱子(粒度为5m):柱长150mm，内径4.6mm。7.3.2 流动相及洗脱程序(如表1): 时间/口lln。5 10 15 7.3.3 流速:1. 0 mL/mino 7.3.4 进样体积:10L，_，20L。7

8、.3.5 检测波长:254nmo 表1梯度洗脱程序0.02 mol/L乙酸镀溶液/% 70 25 25 70 乙睛/% 30 75 75 30 G/T 23884-2009 8 定量测定向液相色谱柱中注入待测定组胶、腐胶、尸胶、酷胶、精胶和亚精胶标准工作液及试样溶液(7.1. 4) , 得到色谱峰面积响应值，用外标法定量。6种生物胶标准色谱图参见附录B。9 结果计算9. 1 试样中组胶、腐胶、尸胶、酷胶、精胶和亚精胶含量以质量分数w;(mg/kg)计分别按式(1)计算:t-eo幽-Rt x-v CLX X-m v一- -s -PA -Z阳P一一ez w .( 1 ) 式中:Pi试样溶液峰面积值

9、;V一一试样的总稀释体积，单位为毫升(mL); c一一标准溶液浓度，单位为微克每毫升(g/mL); Vst一一标准溶液进样体积，单位为微升L;Pst一一标准溶液峰面积平均值;m一一一试样质量，单位为克(g); Vi-一试样溶液进样体积，单位为微升(L)。9.2 平行测定结果用算术平均值表示，保留三位有效数字。10 重复性在重复性条件下，完成的两次平行测定结果的相对偏差不大于10%。3 G/T 23884-2009 附录A(资料性附录)6种生物肢的化学名称、分子式和相对分子质量6种生物胶的化学名称、分子式和相对分子质量见表A.lo表A.l6种生物肢的化学名称、分子式和相对分子质量项目名称化学名称

10、分子式相对分子质量组胶2-(4一咪瞠基)乙胶Cs Hg N3 11 1. 0 腐胶1，4-丁二股C4日12N2124.6 尸胶1，5-戊二胶Cs H14N2 138.6 醋胶2-对经苯基乙胶C8 Hll NO 137.1 精胶NN-双(3-氨丙基)-1，4-丁二胶C7 H19N3 145.2 亚精胶N-(3-氨丙基)-1，今丁二胶ClO H26 N4 202.3 4 GB/T 23884-2009 附录B(资料性附录6种生物股标准色谱图6种生物胶标准色谱图，见图B.lo6 3 2 4 5 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 1一一腐胶52一一尸胶g3一一

11、亚精胶54一一精胶z5一一组胶56一一酷膀。图B.1 6种生物肢的色谱图5 goNi寸的NH筒。华人民共和国家标准动物源性饲料中生物胶的测定高效液相色谱法GB/T 23884-2009 国中骨中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销* 印张O.75 字数10千字2009年8月第一次印刷开本880X12301/16 2009年8月第一版骨定价16.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533书号:155066 1-38472 GB/T 23884-2009 打印日期:2009年10月14日