GB T 19915.4-2005 猪链球菌2型三重PCR检测方法.pdf
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1、ICS 07.100.30 C 53 道自中华人民共和国国家标准G/T 19915.4-2005 猪链球菌2型三重PCR检测方法Method of detecting Streptococcus suis type 2 by triple-PCR 2005-09-27发布中华人民共和国国家质量监督检验检瘦总局中国国家标准化管理委员会2005-11圄01实施060609000418 GB/T 19915.4-2005 前猪链球菌2型是链球菌属的成员,其致病菌株可致猪链球菌病,引起猪败血症、脑膜炎等。人可通过伤口感染该菌,并导致死亡。为了区别正常猪所携带的猪链球菌2型无毒菌株与发病猪分离的致病菌株
2、,特制定本标准。本标准是采用现代分子生物学诊断技术制定的。本标准由农业部畜牧兽医局提出。本标准由全国动物防疫标准化技术委员会归口。本标准起草单位z南京农业大学。本标准主要起草人:陆承平、姚火春、范红结、何孔旺。I GB/T 19915.4-2005 猪链球菌2型三重PCR检测方法1 范围本标准规定了猪链球菌2型英膜基因Ccps2)、溶菌酶释放蛋白基因Cmr)和orf2这三个毒力基因的三重PCR检测技术。本标准适用于由猪链球菌2型致病2 规范性引用文件是否可使用这些文件3 术语和定义3.1 猪链球菌2猪链球菌血清型。猪链均一种重要的人畜4 测定方法4.1 方法提要挑取可疑细菌4.2 试剂和材料u
3、是猪链球菌的一个哥病原菌。除另有规定,所用、4.2.1s2、mrp和orf24.2.2 Taq DNA聚合酶。4.2.3 琼脂糖:电泳级。4.2.4 澳化乙链。4.2.5 分子量标记:DL-2000。4.2.6 TE缓冲液:10mmol/LTris-HClCpH 8.0) , 1 mmol/L EDTACpH 8.0)。4.2.7 10XPCR缓冲液:100 mmol/L KCl , 160 mmol/LCNH4 )2S04 , 20 mmol/L MgS04 , 200 mmol/L Tris-HCICpH 8.的,1%TritonX-100 , 1 mg/ mL BSA。4.2.8 电泳缓
4、冲液:242 g Tris碱,57.1 mL冰乙酸,100mL O. 5 mol/L EDTACpH8. 0),加蒸馆水至1 000 mL,使用时10倍稀释。4.2.9 加样缓冲液:0.25%澳酣蓝,40%煎糖。4.2.10 阳性对照猪链球菌2型HA9801株基因组DNA模板,阴性对照马链球菌兽疫亚种ATCC35246株和金黄色葡萄球菌ATCC25923株基因组DNA模板。GB/T 19915.4一20054.2. 11 猪链球菌2型三重PCR反应混合物。4.3 仪器和设备4.3. 1 离心机。4.3.2 DNA热循环仪。4.3.3 核酸电泳仪。4.3.4 pH 计。4.3.5 移液器:10L
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