SN T 0173-2010 进出口食品中副溶血性弧菌检验方法.pdf

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1、中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 0173-2010 代替SN0173-1992 进出口食品中副溶血性弧菌检验方法Determination of Vibrio Parahaemolyticus in food for import and export 2010-01-10发布2010-07-16实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检瘦总局SN/T 0173一2010目IJ1=1 本标准代替SN0173-1992(出口食品副溶血性弧菌检验方法。本标准参照ISO/TS21872-1: 2007(食品和饲料的微生物学检验方法致病性弧菌属的水平检验方法第1部分:副溶血性弧菌和霍乱弧菌

2、的检验(Microbiologyof food and animal feeding stuffs Horizontal method for the detection of potehtially enteropathogenic Vibrio spp. -Part 1: Detection of Vibriorahaemolyticus and Vibrio cholerae)、美国FDA细菌学分析手册第九章弧菌属2004 (FDA Bacteriological Analytical Manual Chapter 9 Vibrio，2004)对原标准文本格式、某些文字表述和文本内容进行

3、修订，但主要技术路线与检验方法未做改动。本标准与SN0173-1992相比，主要变化如下:将原标准名称修订为进出口食品中副洛血性弧菌检验方法; 将范围进行了修订;一一增加了方法提要与流程;一在检测步骤中增加了带壳贝类样品的制备和稀释方法;一一将副溶血性弧菌的定性和定量检测步骤分别进行叙述;一一增加了显色培养基进行筛选检测;一一将报告结果修订为定性结果报告和最近似值(MPN)结果报告;一将培养基、试剂的配方参照ISO/TS21872-1方法进行了部分修订。本标准的附录A、附录D为规范性附录，附录B、附录C为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位:中华人民共和国辽

4、宁出入境检验检疫局、天津出入境检验检疫局、山东出入境检验检疫局。本标准主要起草人:徐君怡、曹际娟、高旗利、郑秋月、雷质文、王秋艳、蒋丹、马惠蒋、宋慧君、卢行安。本标准所代替标准的历次版本发布情况为:一一-SN0173-1992。I SN/T 0173-2010 进出口食品中副溶血性弧菌检验方法1 范围本标准规定了进出口食品中副洛血性弧菌的定性检测方法和最近似值(MPN)计数方法。本标准适用于食品中副溶血性弧菌的检验，动物饲料和其他食品生产和加工区域环境样品中的副洛血性弧菌检验可参照使用。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改

5、单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB 19489 实验室生物安全通用要求SN 0330 出口食品中微生物学检验通则SN/T 1538. 1 培养基制备指南第1部分:实验室培养基制备质量保证通则SN/T 1538.2 培养基制备指南第2部分:培养基性能测试实用指南3 取样与制样3. 1 取样取样数量及取样方法按SN0330进行。3.2 试样制备3.2. 1 鱼类取鱼体不同部位。3.2.2 带壳贝类应先在清洁的流水中洗净外壳，用70%乙醇消毒外壳，然后以无菌操作切断闭

6、壳肌，打开贝壳。取出含内脏的全部贝肉和贝液。每个检测样品至少应包括12个贝类个体。3.2.3 甲壳类取包括鲤及肠的部分或整体。3.3 样晶解冻及保存冷冻样品应在45oC以下不超过15min或在2oC5 oC不超过18h解冻。若不能及时检验，应放于15 oC左右保存，在48h内检验;非冷冻而易腐的样品应尽可能及时检验，若不能及时检验，应置于6 oC10 oC冰箱保存，在24h内检验。4 设备与材料4. 1 试管:15 mmX 150 mm, 10 mmX 100 mm。4.2 吸管:1mL, 10 mL。4.3 培养皿:直径90mm。4.4 均质器:8000 r/min10 000 r/mino

7、 4.5 恒温箱:36oC :1: 1 oC。4.6 恒温水浴箱:42 oC :1: 1 oC。SN/T 0173-2010 5 培养基及试剂5. 1 碱性蛋白陈水(APW)。见附录A第A.1章。5.2 氯化纳多粘菌素B肉汤(SPB)。见附录A第A.2章。5.3 硫代硫酸铀、拧橡酸铀、胆盐、震、糖琼脂(TCBS)。见附录A第A.3章。5. 4 CHROM ID VIBRIO弧菌显色培养基。见附录A第A.4章。5.5 氯化纳三糖铁琼脂(TSI)。见附录A第A.5章。5.6 氯化铀营养琼脂。见附录A第A.6章。5. 7 氧化酶试剂。见附录A第A.7章。5.8 鸟氨酸脱竣酶氯化铀肉汤(5.9 赖氨酸

8、脱竣酶氧化铀肉汤(5.10 精氨酸双水解酶氯化铀肉5. 11 日半乳糖昔酶试剂。见附录5. 12 氧化铀榕液。见附录A第A.12章。5.13 氯化铀蛋白陈水。见附录A第A.13 5.14 麓墓质氯化铀肉汤。见附录A5. 15 V-P半固体琼脂(VP)。见5. 16 糖类分解试验用培养基。5. 17 42 oC生长试验用培养基。5.18 O/F试验用培养基(HLGB)5. 19 神奈川现象试验用我妻氏琼脂(WA)。见附录6 方法提要与流程6.1 方法提要本方法采用增菌培养和分离最近似值(MPN)的方法对副溶6.2 检测流程进出口食品中副溶血性弧菌7 检测步骤7. 1 定性检测7. 1. 1 增菌

9、培养7. 1. 1.1 新鲜样品。同时也采用带有前增菌的以无菌操作称取25g检样，加入225mL SPB肉汤或APW肉汤中，36oC:!: 1 oC培养18h:!:lh，进行选择性增菌。如果样品不足25g，在实验能够证明不影响结果的情况下，则取全部样品(xg或xmL)，加入9x mL增菌液中进行选择性增菌。7. 1.1. 2 带壳贝类取至少12个贝类个体，按3.2.2制备试样。取试样加入等体积的SPB肉汤(1: 2稀释)，均质90 s。称取上述均质样掖20g加入80mL SPB肉汤中，36oC土1oC培养18h:!:l ho 注:建议称取均质样液的质量(20g)，由于均质时产生的气泡，可能影响

10、正确的体积读数。7. 1.1. 3 经加热、辐射处理或冷藏、冻结的样晶以无菌操作称取25g检样，接种于225mL APW肉汤中，于36oC:!: 1 oC前增菌6h士1h。之后，2 SN/T 0173-2010 ;LY养物表面取1叫养物接种到川L的S叫汤中，36oC士1oC培养川1h，进行选7. 1. 2 分离培养将7.1. 2的培养物接种TCBS琼脂和CHROMID VIBRIO弧菌显色培养基平板上。36oC主1oC 培养18h土1ho 副溶血性弧菌在TCBS平板上的典型菌落呈圆形，边缘整齐、湿润、稍泪浊、半透明，多数具尖心、斗笠状，蓝绿色菌落，直径2mm4 mm。副榕血性弧菌在CHROMI

11、D VIBRIO弧菌显色培养基平板上的典型菌落呈紫红色菌落(某些弧菌，如河流弧菌也可能会产生与副溶血弧菌相似的紫红色菌落)。取可疑菌落按7.3进行鉴定。7.2 带有前增菌的最近似值(7.2. 1 检样制备以无菌操作称取50g检样放.,8 000 r/min均质1min，或以剪刀尽量剪碎，并充分振荡使成1: 厅喃喃喃-回9 如果样品不足50g，在实验能够证明不影国，则取全部样品(xg或xmL)，加入x mL增菌液以获得10-1浓度的稀释液。用1mL灭菌吸管吸1 : 10稀1 : 100稀释液。按上项操作顺序7.2.2 增菌培养7.2.2. 1 新鲜样晶选择3个连续适宜的稀释度，汤中，每一稀释度接

12、种3管，36oC土1oC培养18h :l: 若选择的稀释度为接种1g样相.应以1双料SPB肉汤中。7.2.2.2 带壳贝类取至少12个贝类个体，按90 s。称取上述均质样液20g 10倍递增稀释。36oC士1oC培注:建议称取均质样液的质量(7.2.2.3 经加热、辐射处理或冷选择3个连续适宜的稀释度，-胃吸管肉汤，每一稀释度接种3，36旦河嘲回rrh士1h。稀释液，接种10mL单料SPB肉性增菌培养。1 : 10稀释液10L，接种10mL 的SPB肉汤(1: 2稀释)，均质的均质液，同7.2.2.1方法进行体积读数。稀释液，接种10mL单料APW者选择的稀释度为接种1g样品时，则应以10mL

13、灭菌吸管吸取1: 10稀释液10mL，接种10mL 双料APW肉汤中。在各管APW培养物表面各取1mL培养物，分别接种到10mL的SPB肉汤中，36oC :l: 1 oC培养18 h:l: 1 h。7.2.3 分离培养选取3个有菌生长的最高稀释度SPB肉汤管，以3mm直径接种环分别取环菌攘，划线于TCBS平板和fHROMIDvmo弧菌显色培养基平板上。36oC土1oC培养24h :l: 3 h。取可疑菌落按7.3进行鉴足。7.3 鉴定7.3. 1 选择可疑菌落并纯化菌落在TCBS平板和CHROMID VIBRIO弧菌显色培养基平板上如出现可疑菌落，至少应挑取5个可疑菌落，进行传代培养。如果平板

14、上的可疑菌落少于5个，则应该全部挑取传代培养。3 噜嚣:-SN/T 0173-2010 注:食品，特别是海产品，可能含有大量的细菌，包括非致病性的弧菌属，这些菌可能在选择性培养阶段生长。如果在传代培养阶段选择的菌落太少的话，则可能造成目标致病菌的漏检。在氯化铀营养琼脂表面接种可疑菌落以获得纯培养物，36c士1C培养24h:!:3 h。用该纯培养物进行确认实验。7.3.2 初步生化试验7.3.2.1 革兰氏染色与镜检副搭血性弧菌为革兰氏阴性，呈棒状、弧状、卵圆状等多形态，两端浓染、无芽抱。7.3.2.2 无盐腰脏水接种无盐膜脏水，36C士1C培养24h:!:3 h。副洛血性弧菌在无盐膜陈水中几乎

15、不生长。7.3.2.3 3%氧化铀膜脏水接种3%氧化铀膜脏水，36C士1C培养24h:!: 3 h。副榕血性弧菌在3%氯化纳膜陈水中生长旺盛。7.3.2.4 氯化铀三糖铁琼脂接种氯化铀三糖铁斜面，穿刺底层并划线斜面。36C:!: 1 C培养18h士1h。反应结果解释如下:a) 琼脂底层1) 黄色:葡萄糖发酵反应阳性(发酵葡萄糖); 2) 红色或者未变色:葡萄糖发酵反应阴性(不发酵葡萄糖); 3) 黑色:产生硫化氢;的产生气泡或者培养基爆裂:葡萄糖发酵产气;b) 琼脂斜面1) 黄色:乳糖或煎糖利用阳性(使用乳糖或蔚糖); 2) 红色或未变色:乳糖或庶糖利用阴性(不使用乳糖或庶糖); 3) 典型的

16、副榕血性弧菌在氧化纳三糖铁斜面上的反应为底层黄色，斜面红色，不产生硫化氢，不产气。7.3.2.5 生化确认菌株选择选取初步生化实验符合的菌株继续按7.3.3进行生化鉴定确认，或采用法国梅里埃公司的ID32E鉴定试剂条进行生化鉴定(按该试剂盒的操作说明进行)。7.3.3 生化确认7.3.3.1 嗜盐性试验各取一环3%氯化铀膜陈水培养物，分别接种6%、8%和10%氧化铀膜陈水中，36C土1C培养24 h:!:3 h。7.3.3.2 氧化酶试验以无菌白色滤纸蘸取营养琼脂表面纯培养物，滴加氧化酶试剂进行氧化酶试验。如果滤纸颜色在10 s内变为紫色或者深紫色，则为阳性反应。7.3.3.3 鸟氨酸脱搓酶试

17、验接种鸟氨酸脱竣酶氯化铀肉汤(5.8)。在肉汤上面覆盖1mL灭菌矿物油。36C:!: 1 C培养24 h:!:3 h。培养后液体混浊变紫为阳性反应(细菌生长，鸟氨酸脱竣);液体黄色为阴性反应。7.3.3.4 赖氨酸脱搓酶试验接种赖氨酸脱竣酶氧化饷肉汤(5.9)。在肉汤上面覆盖1mL灭菌矿物油。36C:!: 1 c培养24 h士3h。培养后液体混浊变紫为阳性反应(细菌生长，赖氨酸脱殷);液体黄色为阴性反应。4 SN/T 0173-2010 7.3.3.5 精氨酸双水解酶试验接种精氨酸双水解酶氯化铀肉汤(5.10)。在肉汤上面覆盖1mL灭菌矿物油。36oC土1oC培养24 h士3h。培养后液体混浊

18、变紫为阳性反应(细菌生长，精氨酸双水解);液体黄色为阴性反应。7.3.3.6 v-p试验以接种针由氯化锅营养琼脂上取少许培养物穿刺v-p半固体琼脂(5.15),36 oC :l: 1 oC培养24h :l: 3 h。在加v-p试剂前应先观察动力。沿穿刺线周围呈扩散性生长为动力阳性。7.3.3.7 萨半乳糖苦酶试验挑取可疑菌落，在装有0.25mL氯化铀榕被(5.12)的试管中制成菌悬液，加入一滴甲苯，振摇试管。将试管于36oC士1oC静置5mlllo加入0.25mL -半乳糖昔酶试剂(5.11) , Y昆匀。将试管放入36 oC :l: 1 oC培养箱中，放置24h:l: 3 h，随时观察。培养

19、后液体变黄为阳性反应(存在日半乳糖昔酶)。反应结果通常20min后可见。24h后无颜色变化为阴性反应。7.3.3.8 髓基质试验将可疑菌落接种于装有5mL膜蛋白陈-色氨酸氧化铀肉渴(5.14)中。36oC :l: 1 oC培养24h士3h。培养后加入1mL Kovacs试剂。形成红色环为阳性反应(形成呵|味儿黄色环为阴性反应。7.3.4 扩大生化鉴别如果所分离的菌株符合7.3.3生化确认特性，按第8章报告结果。如果所分离的菌株仅有一项不符合7.3.3生化确认特性时，则需进一步扩大生化鉴别，进行蔚糖分解试验，42oC生长试验，O/F试验鉴定。如上述扩大生化鉴别符合副溶血性弧菌特性，可按第8章报告

20、结果;若有一项不符合，则为阴性。副溶血性弧菌的生化鉴定特性见表1。副溶血性弧菌与有关细菌的鉴别可参见附录C。表1副溶血性弧菌的生化鉴定特性鉴定程序生化项目生化性状氯化纳三糖铁斜面产碱底层产酸，不产气初步生化实验硫化氢阴性嗜盐性无盐膜陈水几乎不生长3%氯化纳膜陈水生长旺盛6%氯化纳膜陈水明显生长8%氯化纳膜陈水明显生长10%氯化纳膜陈水几乎不生长就基质阳性v-P 阴性生化确认动力F日性氧化酶阳性赖氨酸脱竣酶阳性精氨酸双水解酶阴性鸟氨酸脱竣酶阳性ONPG水解阴性42 C生长阳性扩大生化鉴别。/F试验不分解发酵型发酵型5 键句SN/T 0173-2010 7.4 神奈川现象及血清学试验(根据需要进行

21、)7.4.1 棉奈川现象试验以接种环将3%氯化铀膜陈水培养物点种于充分干燥的我妻氏琼脂平板上。可先在平板背面以玻璃铅笔划出若干小区，使一个平板能做多个试验。36oc士1oc培养18h:!: 1 h。在24h以内观察结果，阳性结果在菌落周围有一清晰的透明环。7.4.2 血清学鉴定7.4.2.1 K抗原凝集试验将经生化试验证实为副溶血性弧菌的菌株转种在两支3%氯化铀普通琼脂斜面上，36oC:!: 1 oC培养18h。以2mL2%氧化铀溶液洗下一支琼脂斜面培养物，制成浓厚菌悬液。先以K多价抗血清与菌悬液进行玻片凝集试验。在1min内那i寨币市-阳性在罪鱼去.明#干自然凝集试验，若自然凝集试验为阴性，

22、再以该K多价抗血清中的单.IK抗血清出现阳性凝集的，为该菌株的相应K抗原。7.4.2.3 血清学报告副溶血性弧菌的抗原分为0、根据以上血清学试验结果，可GB 194890 8 报告结果8.1 定性结果报告根据生化试验是否符合副8.2 最近似值(MPN)结果报告生化试验符合副溶血性弧品中的副溶血性弧菌MPN值，报当报告每100g样品中副榕血6 表(见附录D)，查出每克样近似值(MPN/g)。数字乘以100。SN/T 0173-2010 !E! ,1: 附录(规范性附录)培养基与试剂1)A A.1 碱性蛋白脏水A. 1. 1 组成蛋白陈氧化铀蒸馆水A. 1.2 制法?昆匀后，调节pH值至8.6:!

23、: 15 min。20.0 g A.3 TCBS琼脂广口瓶或者试管中，1210C灭菌A.2 氯化锅多粘菌素B肉汤(SPB)A. 2.1 组成酵母浸膏蛋白陈氯化铀多粘菌素B蒸俑水A.2.2 制法将各组分(多粘菌素B除外10 mLo 121 oC灭菌15min。至pH7.4。分装于试管中，每管!l A. 3.1 组成蛋白陈酵母浸膏拧橡酸铀硫代硫酸铀拧穰酸铁氯化铀牛胆盐荒糖庸香草酣蓝澳庸香草酣蓝琼脂水o g 10.0 g 1. 0g 10.0 g 8.0 g 20.0 g 0.04 g 0.04 g 18.0 g 1 000 mL 1) 为保证培养基的质量，应按SN/T1538.1、SN/T1538

24、.2进行培养基的制备与性能测试。若使用商售的脱水合成培养基，应选用国内外通过IS09000质量管理体系认证生产厂商的产品并按其说明制备和使用。7 SNjT 0173一2010A.3.2 制法将各成分加热煮沸，调节pH值至8.6 :f: 0. 2(25 OC)。不要高压灭菌。分装15mL20 mL于培养皿内制成平板。A. 4 CHROM ID VIBRIO弧菌显色培养基1)A. 4.1 组成蛋白陈(牛)肉浸膏(牛或猪)大豆蛋白陈氧化纳碳酸铀中性红碳水化合物混合物胆盐(牛或绵羊)显色剂混合物选择性混合物琼脂纯水L Chubu ggggr ohobFDnJI 5-151623gN叭hFDgg8061

25、01J Eno-i( -AAURunhununu-nunun1111 lull-Jd A.4.2 制法将各成分加热煮沸，调节pH值至8.6:f: 0. 2(25 OC)。不要高压灭菌。分装15mL20 mL于培养皿内制成平板。A.5 氯化铀三糖铁琼脂(TSI)A.5.1 组成蛋白陈牛肉浸膏酵母漫膏氯化饷乳糖m;糖拧攘酸铁酣红琼脂水20.0 g 3.0 g 3.0 g 10.0 g 10.0 g 10.0 g 0.3 g 0.024 g 18 g 1 000 mL A.5.2 制法氓匀后，加热至溶解，调节pH值至灭菌后为7.4 :f: 0. 2(25 OC)。分装10mL于试管中，121oc灭菌

26、15 min。倾斜放置，制成斜面。A.6 氧化制营养琼脂A. 6.1 组成牛肉浸膏5.0 g 1) 该培养基为法国梅里埃公司的产品。8 SN/T 0173一2010蛋白陈氯化铀琼脂水A.6.2 制法混匀后，加热至溶解，调节pH值至灭菌后为7.2:t 0. 2(25 OC) , 121 oC灭菌15mino分装15mL 20 mL于培养皿内制成平板。或者分装10mL于灭菌试管中，倾斜放置，制成斜面。1. 0g 100 mL 氧化酶试剂A. 7.1 组成N，N，N，N四甲基间苯二胶水3.0 g 10.0 g 18 g 1 000 mL A.7 A.7.2 制法在冷水中溶解，用前配制，置于棕色瓶内。

27、5.0 g 3.0 g 1. 0g 0.015 g 10.0 g 1 000 mL 鸟氨酸脱搂酶氯化铀肉汤(ODC)A. 8.1 组成L-鸟氨酸酵母浸膏葡萄糖澳甲酣紫氯化铀水A.8 A.8.2 制法混匀后，加热至洛解，调节pH值至6.8士0.2(25OC)。分装2mL5 mL于小试管中，121oC灭菌15 mino 赖氨酸脱搂酶氯化铀肉汤(LDC)A. 9.1 组成L-赖氨酸酵母浸膏葡萄糖澳甲酣紫氯化纳水A.9.2 制法1昆匀后，加热至溶解，调节pH值至6.8士0.2(250C)。分装2mL5 mL于小试管中，121oC灭菌5.0 g 3.0 g 1. 0g O. 015 g 10.0 g 1

28、 000 mL A.9 jtt捕民协醋明;:115 mino 5.0 g 3.0 g 精氨酸双水解酶氧化铀肉汤(ADH)A. 10. 1 组成精氨酸酵母浸膏A.10 9 SN/T 0173-2010 葡萄糖澳甲酣紫氧化纳水. 10.2 制法1. 0g 0.015 g 10.0 g 1 000 mL 混匀后，加热至溶解，调节pH值至6.8土0.2(25C)。分装2mL5 mL于小试管中，121C灭菌15 min。.11 萨半乳糖曹酶试荆. 11. 1 ONPG溶液. 11. 1. 1 组成磷硝基酣-半乳糖昔水. 11. 1.2 制法将ONPG榕于50C水中。将溶液冷. 11. 2 缓冲液. 11

29、. 2. 1 组成磷酸二氢铀(NaH2P04)氢氧化铀(NaOH)(0. 1 mol/L 水，补足至.11.2.2 制法50 mL容量瓶中将磷酸二氧铀pH值至川士0.2(25C)，用水气. 11. 3 试验用混合试剂.11.3.1 组成缓冲液(A.11. 2) ONPG溶液(A.11. 1) . 11. 3. 2 制法将缓冲液加入ONPG榕液中。.12 氧化铀溶液. 12. 1 组成氯化铀水. 12.2 制法0.1 mol/L的氢氧化铀溶液调节10.0 g 1 000 mL ?昆匀后，调节pH值至灭菌后为7.5:c 0. 2(25 C)。分装10mL于试管中，121c灭菌15min, .13

30、氯化铀蛋白臆水. 13. 1 组成蛋白陈氯化铀水10 10 g o g、20g、60g、80g或100g 1 000 mL . , F SN/T 0173-2010 A.13.2 制法混匀后，调节pH值至灭菌后为7.5士0.2(25OC)。分装10mL于试管中，121oc灭菌15min。A. 15. 1 v-p半固体琼脂A. 15. 1. 1 组成酵母浸膏蛋白陈氧化纳葡萄糖琼脂蒸情水A. 15. 1.2 制法混匀后，加热至溶解，调节pH值至7.3士O.1 (25 OC)。分装于试管中，每管1mL, 121 oc灭菌15 min。灭菌后，立即取出放凉。A. 15.2 V-P试剂A. 15.2.1

31、 组成甲液:-荼酣元水乙醇乙液:氢氧化押肌酸蒸馆水A. 15.2.2 制法甲液:将荼酣溶于无水乙醇中。乙液:先将氢氧化押溶于水中，再加入肌酸。A.14 蘸基质氯化铀肉汤A. 14. 1 色氨酸氯化铀肉汤A. 14. 1. 1 组成醋蛋白脏、(酶消化)DL-色氨酸氧化铀水A.14. 1. 2 制法?昆匀，加热至榕解，过滤。调灭菌15min。. A. 14.2 Kovacs试剂A. 14.2.1 组成对二甲肢基苯甲醒盐酸(=1.18 g/mL1. 19 2甲基2丁醇A. 14.2.2 制法将3种物质混匀。A.15 V-P半固体琼脂(VP)-Enall-呵lil-N幽跚嘟嘟耐皿俨i j 10.0 g

32、 1. 0g 10.0 g )。分装5mL于试管中，121oc 6.0 g 100.0 mL 40.0 g 0.3 g 100.0 mL 11 SN/T 0173-2010 以上试剂保存于冰箱中，可使用2个月。试验时，分别加甲液0.2mL(约6滴)和乙液0.1mL(约3滴)。加入试剂后呈现红色者为阳性，铜色者为阴性。对阴性结果1h后再做一次检查。A.16 糖类分解试验用培养基A. 16. 1 组成蛋白陈10.0 g 牛肉浸膏3.0 g 氯化铀30.0 g 澳饵酣紫0.04 g 蒸馆水1 000 mL A. 16.2 制法混匀后，加热洛解，按1%量加入糖类。调至pH7.O:J: O. 2(25

33、OC)。分装于试管中，每管1mL, 1120C高压灭菌15min。A.17 420C生长试验用培养基A. 17. 1 组成膜陈大豆陈氧化铀磷酸氢二押葡萄糖蒸馆水A. 17.2和tl7去17.0 g 3.0 g 30.0 g 2.5 g 2.5 g 1 000 mL 除葡萄糖外，将各种成分棍合溶解，煮沸1min2 min，加入葡萄糖，调至pH7.3土0.2(25OC)。分装于试管中，每管7mL, 121 oC高压灭菌15min。A.18 /F试验用培养基(HLGB)A. 18. 1 组成蛋白陈酵母浸膏氯化铀葡萄糖1臭饵酣紫琼脂蒸馆水A. 18.2 制法2.0 g 0.5 g 30.0 g 10.

34、0 g 0.015 g 3.0 g 1 000 mL 混匀后，加热溶解，调至pH7.4士0.2(250C)。分装于试管中，每管3mL, 121 oC高压灭菌15min。本培养基用于鉴别草兰氏阴性细菌对于葡萄糖的发酵性和氧化型代谢作用。将同一菌株接种于2支该培养基中，其中一支管的培养基上面加灭菌矿物油脂来隔离氧气，而另一支管不加。这样发酵型细菌在两管培养基中均产生酸性反应，氧化型细菌则在未加矿物油脂的管中产生酸性反应，而在加油脂的培养管中只有轻度或者不生长也元反应变化。SN/T 0173-2010 A.19 神奈川现象试验用我妻氏琼脂(WA)心幽描中1山儿州削副划川1144lfhhfA. 19.

35、 1 组成酵母浸膏蛋白陈氯化铀磷酸氢二饵甘露醇结晶紫琼脂蒸懵水A. 19.2 制法调至pH8.0(不必高压)，加热30min，待冷至50OC，按5%的体积轻轻加入事先准备好的以生理盐水洗三次的新鲜人或兔血球。混合均匀倾注平血，充分干燥后使用。3.0 g 10.0 g 70.0 g 5.0 g 10.0 g 0.001 g 15.0 g 1 000 mL 飞叫幢幢晴圆圆血，也ilrv情盟13 SN/T 0173一2010新鲜样品:25 g样品至225 mLSPB肉汤附录B(资料性附录)进出口食晶中副溶血性弧菌检测流程图神奈川现象及血清学实验(根据需要进行)图B.1进出口食品中副溶血性弧菌定性检测

36、流程图14 37 c 6 h士1h 37 c 18 h:!:l h . . 新鲜样品:50 g样品至450 mL SPB肉汤制备10倍递增稀释液神奈川现象及血清学实验(根据需要进行SN/T 0173-2010 加工产品:50 g至450mL 碱性蛋白陈水图B.2进出口食晶中副溶血性弧菌最近似值(MPN)检测流程固15 2 3 注:表内所列接种量如改用1g(mL)、0.1g(mL)、0.01g(mL)时，表内数字应相应降低10倍;如改用0.01g (mL)、0.001g(mL)、0.0001 g(mL)时，则表内数字应相应增加10倍，其余类推。附录D(规范性附录)1 g(mL)检样中最近似数(M

37、PN)表表D.11 g(mL)检样中最近似数(MPN)表阳性管数接种量/g(mL)阳性管数0.1 nu-nu-nu 。2 0 0 1 1 15 2 2 3 2 20 3 3 1 3 3 SN/T 0173-2010 岛1PN0.001 2 3 20 26 3 I 34 。21 2 44 o 93 1 460 17 OFCN-RFOH5 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准进出口食品中副溶血性弧菌检验方法SN/T 0173-2010 9峰中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷晤开本880X 1230 1/16 印张1.5字数35千字2010年4月第一版2010年4月第一次印刷印数1-1600 定价24.00元唔书号:155066 2-20675 SN/T 0173-2010