GB 19192-2003 隐形眼镜护理液卫生要求.pdf

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1、ICS 11. 040. 70 C 59 G昌中华人民共和国国家标准GB 19192-2003 idt ISO /DIS 11980: 1996 ISO/DIS 11981: 1996 隐形眼镜护理液卫生要求2003-06-13发布Hygienic requirement for contact lens care solution 2004-02-01实施壁罕在中华人民共和国坐立葡萄国家质量监督检验检痊总局也WGB 19192-2003 前言隐形眼镜扩1J-II I( I i J 11.丁质量直接关系到配戴者的眼睛健康。根据中华人民共和国传染病防治法队中华人民共和国传染病防治法实施办法和消毒

2、管理办法)，特制定本标准。本标准等同采用ISO/D1S11981 :1996与ISO/D1S11980: 1996，并根据国际标准的基本原理、试验方法与评价标准，选择适应我国具体情况的技术要求、试验菌株与培养方法，参照采用ISO/CD14729: 1996、ISO/CD14730: 1996、ISO/D1S13212 :1996与ISO/D1S14534: 1996 0 本标准第四章(对茄科镰刀霉菌的消毒效果除外)为强制性，其余各章为推荐性。本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准由上海市疾病预防控制中心负责起草，苏州中化药品工业有限公司、北京博士伦眼镜护理产品有限公司、眼力健制药有限公

3、司参加起草。本标准主要起草人:沈伟、何静芳、仲伟鉴、潘希和、王彩娟、桑蔚、孙伟之。1 范围中华人民共和国国家标准隐形眼镜护理液卫生要求Hygienic r叫uirementfor contact lens care solution GB 19192-2003 idt ISO/DIS 11980 , 1996 ISO/DIS 11981 , 1996 本标准规定了隐形眼镜(硬性镜和/或软性镜)护理液的定义、技术要求、试验方法、检验规则以及包装、标志与使用说明等要求。本标准适用于隐形眼镜专用护理液产品。2 引用标准下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版

4、本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。GB 15979-2002 一次性使用卫生用品卫生标准ISO/DIS 11980 ,1 996 光学仪器与光学器材一一隐形眼镜及其护理产品一一临床研究指导ISO/DIS 11981 ,1 996 光学仪器与光学器材一一隐形眼镜和隐形眼镜护理产品一隐形眼镜及其护理产品物理相容性试验方法中华人民共和国药典1995年版二部澄清度检查法与无菌检查法中华人民共和国卫生部消毒技术规范)(第三版)第一分册实验技术规范)(1999)消毒剂毒理学实验技术3 定义本标准采用下列定义。3.1 隐形眼镜护理液contact lens

5、care solution 专用于隐形眼镜护理的，具有清洁、消毒、冲洗或保存镜片，中和清洁剂或消毒剂，物理缓解(如润滑)隐形眼镜引起的眼部不适等功能的溶液或可配制成溶液使用的可溶性固态制剂，包括使用时可直接或非直接接触眼球的产品。隐形眼镜护理液可分单一功能型与多功能型。单一功能型隐形眼镜护理液系仅具有上述一种功能的产品;多功能型隐形眼镜护理液系同时具有清洁、消毒、冲洗、保存四种功能的产品。3.2 多次量产品multidose products 最小包装容器内的护理液容量能使用一次以上的产品。3.3 一次量产品singledose products 最小包装容器内的护理液容量只能使用一次的产品。

6、3.4 清洁cleaning 去除蛋白质、有机物、污物等的处理。3.5 消毒disin fection 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局2003-06-13批准2004-02心1实施GB 19192一-2003杀灭或清除病原微生物使其达到无害化的处理。3.6 中和neutralisation 消除消毒剂和/或抗微生物剂抑/杀菌活性的处理。3.7 有效成分active ingredient 产品中具有清洁、消毒、中和等功能的组分。3.8 抛弃日期discard date 多次量产品开封后的最长使用期限。3.9 有效期valid date 自生产之日起，未开封的具有清洁、消毒、中和等功能的产

7、品保持其上述功能的最长有效使用期限。3.10 保质期guarantee date 自生产之日起，未开封的无上述功能的产品维持其最低有效成分含量的最长使用期限。4 技术要求隐形眼镜护理液技术要求应符合表1中的要求。表1隐形眼镜护理液技术要求项目名称要求适用理化性能外观澄清液体液态成品原液与固态成品使用液p H 6. 57. 8 直接与眼接触的产品原液或使用液渗透压(mosm/kg.H20 260340 直接与眼接触的产品原液或使用液有效成分吉量在标示吉量范围内所有产品过氧化氢残留量/(mg/kgH, ) 30 以过氧化氢为有效成分的产品与镜片的物理相容性用护理液处理前后，镜片的物理参直接与镜片接

8、触的产品原液或使数应一致用液微生物活菌计数/(cfu/g)100 不直接接触眼睛的固态产品致病菌不得检出不直接接触眼睛的固态产品无菌检查元菌生长直接接触眼睛的液态产品消毒效果杀灭率/(%)大肠杆菌二三99.90金黄色葡萄球菌二主99.90具有消毒功能的产品绿服杆菌二三99.90白色念珠菌主主90.00茄科镰刀霉菌注90.00安全性急性经口毒性5000 mg/kg 所有产品致突变试验无致突变性或遗传毒性GB 19192-2003 表l(完)项目名称要求适用皮肤剌激元刺激性眼刺激无剌激性直接与眼接触的产品原液或使用液皮肤变态反应极轻细胞毒性无细胞毒性稳定性成品稳定性符合产品标识有效期或保质期所有产

9、品开封产品抛弃日期符合产品标识抛弃日期多次量产品临床试验无不良反应吉有新成分的各种产品或有效成分与己上市产品浓度不一致的产品静有效成分为过氧化氢的护理液，用中和后产物进行测定。5 试验方法随机抽取三个批号的最小容量包装产品进行测试，每个批号至少抽取三件，二分之一用于检测，三分之必要时复测，二分之一留样。5.1 理化指标5. 1. 1 外观按中华人民共和国药典(1995年版二部)澄清度检查法测试，应符合表l中的相应要求。5. 1. 2 pH 取试样20mL，在温度(25士1)C时用己校正的酸度计进行测定，应符合表1中的相应要求。5. 1. 3 渗透压取0.5mL试样，用渗透压计测定。以蒸馆水或已

10、知校正值的溶液做校正，以二次读数的平均值为测定结果，应符合表1中的相应要求。5. 1. 4 有效成分含量按国家标准、中华人民共和国药典、行业标准的顺序选择测定方法。每份试样平均测三次，取其平均值，应符合表I中的相应要求。5. 1. 5 过氧化氢残留量将护理液按说明书规定的方法和最短作用时间进行中和，取中和后样液5.0mL至150mL锥形瓶内，加入10%硫酸5mL及蒸馆水10mL，以0.002mol/L高锺酸伺标准溶液滴定，稳定摇动，滴定至粉红色并至少保持15s为终点。同时作空白对照。按式(1)计算过氧化氢残留量，应符合表1中的相应要求。(V - Vo) x c X 170. 1 H22(mg/

11、kg H2) =( 1 ) 0.002 X 50 式中，V样品消耗0.002mol/L高锺酸饵溶液的体积，mL，V, 空白消耗0.002mol/L高锺酸饵溶液的体积，mL，一高镜酸例标准溶液的摩尔浓度。5. 1. 6 与镜片的物理相容性按ISO/OIS11981方法测试，应符合表1中的相应要求。5.2 微生物指标5.2.1 固态样品处理GB 19192-2003 精确称取2.000g试样.放人20.0 mL O. 03 mol/L磷酸盐缓冲液(PBS)内(如产品中含有抑菌成分，则用中和剂代替PBS)，完全溶解后取样按下述方法进行检测。5.2.2 活菌计数取1.0 mL样液接种营养琼脂培养基，每

12、管平行接种两个平皿，于35L37C培养48h，按式(2)计算平板上平均菌落数，应符合表l中的相应要求。活菌计数(cfu/g)=平板上平均菌落数XI0.(2 ) 5.2.3 致病菌按GB15979一1995(一次性使用卫生用品卫生标准附录A中的方法进行金黄色葡萄球菌、绿胶杆菌、大肠杆菌检测，应符合表1中的相应要求。注1，丰试验用中和剂必须通过附录D(标准的附录)中规定的悬液定量中和剂鉴定试验。注2，如找不到合适中和剂，可按中华人民共和国药典(1995年版二部)无菌检查法中薄膜过滤法处理样液，将薄膜直接接种相应的培养基进行检测。5.2.4 无菌检查按中华人民共和国药典(1995年版二部)无商检查法

13、测试(如产品中含有抑菌成分，须先用薄膜过滤法处理)，应符合表l中的相应要求。5.3 消毒效果指标见附录A(标准的附录)，应符合表1中的相应要求。5.4 安全性指标5.4.1 急性经口毒性试验、致突变试验、皮肤刺激试验、眼剌激试验、皮肤变态反应试验按中华人民共和国卫生部消毒技术规范)(第三版)第一分册实验技术规范)(1999)消毒剂毒理学实验技术测试，应符合表l中的相应要求。5.4.2 细胞毒性试验见附录B(标准的附录)，应符合表1中的相应要求。5.5 稳定性指标见附录C(标准的附录)，应符合表1中的相应要求。5.6 临床试验5.6.1 须进行临床试验的产品.a)含有新成分的各种护理液=须进行6

14、0位受试者3个月的临床试验;b)有效成分高于己上市产品浓度的各种护理液=须进行30位受试者1个月的临床试验;。有效成分低于己上市产品浓度的眼内溶液以及具有清洁、消毒或中和作用的护理液z须进行30位受试者1个月的临床试验。5.6.2 试验对照.必须设与受试者等量的配对对照。5.6.3 试验方法按ISO/DIS11980方法进行，应符合表1中的相应要求。6 检验规则6.1 出厂检验出厂检验项目，包括外观、pH、渗透压、有效成分含量、活菌计数、致病菌、无菌检查。6.2 定期检验定期检验项目，过氧化氢残留量、消毒效果每半年检验一次g安全性、稳定性每两年检验一次。6.3 型式检验型式检验项目，包括本标准

15、技术要求的全部内容。在下列情形之一时，应进行型式检验。新产品;当原料、工艺、配方有重大改变，可能影响产品性能时:GB 19192-2003 停产六个月以上重新恢复生产时g一一卫生二主管部门提出进行型式检验对。6.4 致突变试验规定6.4.1 我国首创或根援国内外文献报道首次进行生产的新护理液3必须做三项致突变试验。6.4.2 从国外进口在我国销儒、或国外已批准生产现由我国生产的护理液2至少做两项致突变试验(基因水平和染色体水平)。6.4.3 与国内已获准生产的护理液属问一类的产品:至少做一项致突变试验。6.4.4 定期检验与型式检验，$:少做一项致突变试验。7 包装、标志与使用说明7.1 包装

16、7. 1. 1 与隐形眼镜护理液直接接触的包装材料g应安全无害，不影响产品在有效期内的卫生质量。7. 1. 2 隐形H镜护理产品始运输包装=应能保护产品在运输、贮存过程中不受损坏。7.2 标志7.2.1 销售包装标志z应用中文标明产品名称、主要有效成分、净含堡、生产批号、有效期或保质期、制造商名称与地址、批准文号、执行标准号，以及必要的使用说明与注意事项。进口产品还应标明经销商名称与地址s7.2.2 运输包装标志s应用中文标明产品名称、规格与数量、生产批号、有效烧或保质烧、制造商名称与地址、批准文号、执行标准号，以及必要的注意事项.进口产品还应标明经销商名称与地址。7.3使用说确7.3.1 每

17、一销售包装内均应附有使用说明。7.3.2 使用说确必须熔哥哥确的中文标哥哥如下内容z产品名称与熟III昌、主要有效成分与含量、维能、适用范围与禁忌、详细使用方法与步骤、不良反应或副作用、贮存条件、有效期或保质期，以及注意事项。7.3.3 一次最产品始使用说碗应写确只能使用一次飞多次量产品说明Jlii.写明每次使用后必须立即关闭容器，并标明抛弃日期。GB 19192-2003 附录A(标准的附录)消毒效果试验方法A1 目的用于确定隐形眼镜护理液是否具有消毒功能。A2 哥哥这方法A2.1 悬液定繁杀菌试验A2. 1. 1 试验微生物a)细菌大肠杆菌(ATCC8739或8099)金草草色葡萄E靠窗(

18、ATCC6538) 绿8在杆菌(ATCC9027) b)酵母菌2白色念珠菌(ATCC 10231) c)霉菌z茄科镰刀霉菌(ATCC 36031) A2.1.2 操作餐A2. 1. 2.1 取番自种314代苦苦养琼黯斜窗新鲜培养物(Sh-24灿，衔。嗣03mol/L磷商量盐缓冲液(PBS)洗下.稀将成含菌量为lXIOcfu/mL-IXIO cfu/mL的菌悬液。A21. 2. 2 从三批试样中分别吸取10.0mL加入三支灭菌试管中，置20C250C水;在5min。A2. 1. 2.3 在试管中分别加入0.1mL离悬液，使最终含商量最为1X 10 cfu/mL 1 X 10 cfu/mL，混匀，

19、并开始计玲。A2. 1. 2. 4 分别于四个不同作用时间(推荐最短消毒时间的25%、50%、75%、100%)，各取1.0 mL菌革15/昆合液移入9.0mL中和剂中，混匀。A2. 1. 2. 5 中和10min后，吸取其原液或10傍系列稀释液1.0 mL分别接种营养琼脂培养基(细菌人沙缓民琼黯培养基酵母离或马铃薯葡萄糖王宝路法养基(霉黯每管接矜两块平板，继童基与静母离分别于35C37C培养48h(细菌草草72h(酵母离)，霉茵于20C25C培养10d14 d，作活密计数，取其平均值。A2. 1. 2. 6 以O.03 mol/L PBS代替样品，按上述同样方法加商进行活菌计数作为阳性对照。

20、取PBS、巾和;1J各1.0 mL分别接待营养琼腹培养基或沙堡民琼Hii楼养基以及未接种的上述培养基辈作为阴性对照。A2. 1. 2. 7 按式(Al)计算每种商每个作用时间点的杀灭率:杀灭非理韭芷血lU理莘莘辈脏重整X100% .叫Al) 阳性对照组活菌数A2. 1. 2. 8 试验所选中和部j必须通过版录D牛虫草定的悬液iE囊中辛O;1J鉴定试验，并豆阴姓对照必须元淄生长，否则重新测试。A2.2 有机物对消毒效果影响试验A2. 2.1 试验微生物径选A2.1. 1中的一科级商进行测试。A2.2.2 操作程序A2.2. 2.1 取自育种314代营养琼脂斜面新鲜培养物08h24 hl，用0.0

21、3rno1汀.PBS洗下并稀释，加入适量元菌小牛血清，使最终含血清量为10%，含菌量为lXl0cfu/rr汀.1X 108 cfu/mL的商悬液。GB 19192-2003 A2. 2. 2. 2 以悬液定量杀菌试验确定的最低有效浓度所需的最短作用时间为试验时间起点，以后按等差或等倍组距再选择三个作用时间取样检测。A2. 2. 2. 3 以下步骤按A2.1. 2. 2A2. 1. 2. 8进行。A2. 2. 3 评价规定达到合格的最短有效作用时间与悬液定量杀商试验结果相同，为有机物对产品杀菌作用无明显影响;如最短有效作用时间延长一倍或以上为有影响。A2.3 模拟现场试验(镜片定量杀菌试验A2.

22、 3.1 试验微生物根据悬液定量杀菌试验结果，选择抗力最强的一种细菌与酵母菌进行测试。A2. 3. 2 试验镜片A2. 3. 2.1 镜片类型:分低含水非离子型与高含水离子型。A2. 3. 2. 2 试验镜片必须是未使用过的新镜片。A2. 3. 2. 3 镜片应凹面向上放入无菌培养皿内，在凹凸两面顶点各接种0.01mL菌液。A2. 3. 3 操作程序A2. 3. 3.1 将试验镜片(每组四片低含水非离子型与四片高含水离子型)以及阳性对照镜片(各两片)分别放置于灭菌培养皿中，取试验菌液0.02mL接种于镜片上(染菌量为2X 10 cfu/片lX10 cfu/片).于20.C25.C吸收5min-

23、lO mino A2. 3. 3. 2 按生产商所提供的镜片消毒的详细说明处理试验镜片，包括清洁、消毒、冲洗、贮存的所有步骤。A2. 3. 3. 3 处理完毕，立即以无菌操作方法分别将试验镜片移人5.0mL中和剂试管内，振摇，使镜片上的残留菌被充分洗脱在中和剂中。A2.3.3.4 按A2.1. 2. 5的方法进行活菌计数。A2. 3. 3. 5 将未经处理的阳性对照镜片以元菌操作方法分别移入5.0 mL O. 03 mol/L PBS试管内，振摇，充分洗脱镜片上残留菌，再按A2.1. 2. 5的方法进行活菌计数。A2. 3. 3. 6 取O.03 mol/L PBS、中和剂各1.0 mL分别接

24、种营养琼脂培养基与沙堡氏琼脂培养基以及未接种的上述培养基作为阴性对照。A2. 3. 3. 7 按式CA2)计算每种镜片上每种菌的消除率3阳性对照组活菌数试验组活菌数消除率rHI_L /J ;.il_io:;:M_-r:*I.:n.H.j iTI3Vo. X 100% .( A2) 阳性对照组活菌数A2. 3. 3. 8 试验所选中和剂必须通过附录D中规定的载体定量中和剂鉴定试验，并且阴性对照必须元菌生长，否则重新测试。A2. 3. 4 评价规定对细菌的消除率二三99.90%.对酵母菌的消除率90.00%为合格。GB 19192-2003 附录自(标准的附录)细胞毒性试验与评价方法B1 目的将一

25、定最受试物加入锄胞培养液中培养细胞，通过对细胞生长和增殖的影响来评价护理液对哺乳动物细施的潜在毒姓作用。B2试fiJa)阳性对照:64g/L苯盼溶液。bl阴性对黑z下述培养基。c)级2每株=推荐使用L929缀施川、鼠成纤继续Ilf!)，试验用绍鹿为传代48b72 b生长旺盛豹细胞。d)培养基:EaglesMEN加入体积分数为10%的小牛血清。e)磷酸盐缓冲液(PB衍。无钙镣磷酸盐缓玲液盼红溶液200 g/L氯化续溶液100 g/L氯化钙榕液水B3 试验步骤1号队。由L10.0 mL 0.5 mL 1. 0 mL 力1 000 mL B3.1 细胞悬液和l备z用细胞培养基配制4万个/mL细胞悬液

26、分注于试管内(1mL/管)，阴性对照组13管(1警告F哥儿材料组10管(1管备用必要对设在!11控对照组3营，景37C恒温培养箱中培养24人民.2受试物带j备=取0.2mL受试物加入细胞培养液中，37C培养挝人B3.3 受试液交换，24b尉，每管舍弃原培养液，阴性对照组9管用新鲜培养液交换，阳性对照组用含64 g/L苯盼的细胞培养液交换，受试物主且用含体积分数为50%受试液的新鲜培养液进行交换，并对三支阴性对照管进行细胞计数，其余置3rc继续培养DB3.4 忽然计数与吸光度测定B3. 4.1 分别于2、4、7天将对照组和试验组各三管进行细胞计数或吸光度测定，以判断细胞的增殖度。B3. 4. 2

27、 细胞计数法2用食拘橡酸纳的结品紫罗兰染色，血球计数板在显微镜下计数，上下限不得超过10%，否则重重新计数。B3. 4. 3 分光光度计测定吸光度法(仲裁法):弃去原细胞培养液，用PBS洗涤，体积分数为10%的fjl醒溶液固定10mn，水洗(2-3)次，加5g/L结晶紫罗兰.5 mL染色3min，水洗(2-3)次，加10g/L 十二烧基硫酸纳3.5mL.用分光光度计在波长588nm T测定吸光度。B4 结果计算B4. 1 细胞计数法z细胞计数经95%可f高度的数理统计，得上限、平均数、下限，通过细胞计数计算相对增殖度CRGRJ.见式(81)。GB 19192-2003 试验组平均值/ RGR

28、.m:-LXIOO% 阴性对照级平均锻川.( Bl ) B4.2 吸光度测定法s格对增殖度计算觅式(BZ)。试验组吸光度空白对照吸光度/ RGR= 号旦辛苦号正XI00%.(启2) E哥饺对照主呈级光JJt空白对照吸光度 B4.3 毒性评定z按我Bl规定把RGR值转换成六级反应以评定护理液毒性程度。表Bl反应分级标准反应级l级2级3级4级5级B5 评价规定B5.1 试验综巢为。级或1级反应为合格。B5.2 试验结果为2级反应的，应综合细胞形态分析，综合评价。B5.3 试验结果为3-5级反应为不合格e相对增殖度呈lOO75-99 50-74 25-49 1-24 。Cl 成晶稳定性试验C1. 1

29、 目的GB 19192-2003 附录C(标准的附录)稳定性试验方法用于确定隐形眼镜护理液成品的有效期。C1. 2 测试方法Cl. 2.1 自然留样法将试样放置25C土2C室温条件下，定期(开始、3月、6月，以后每6个月一次)取样检测其理化性能(与镜片物理相容性除外)、微生物情况，以及选择附录B中抗力最强的一种细菌进行消毒效果试验。C1. 2. 2 加速试验法将试样放置45C土2C与相对湿度(75土5)%条件下，定期(开始、3月、6月取样检测，指标同C1.2.1.C1. 3 评价规定Cl. 3.1 至少应进行6个月的自然留样与加速试验。C1. 3. 2 各项检测结果均应符合表1中的相应要求。C

30、l. 3. 3 自然留样法可直接确定产品有效期。Cl. 3. 4 加速试验可根据温度与自然留样法温度差(x)计算加速因数，计算公式为2加速因数二2.ox/10 (当x=20时，2.02.0二4)。然后用加速因数乘以试验时间推测产品有效期，但不得超过两年。C2 开封产品抛弃日期试验C2. 1 日的用于确定多次量隐形眼镜护理产品开封后的抛弃日期。C2.2 测试方法C2.2.1 试验微生物=选择消毒效果试验(附录B)中抗力最强的一种细菌与一种酵母菌(白色念珠菌)。C2.2.2 接种日期:试验开始、第2周，拟抛弃日期的25%、50%、75%、100%。C2.2.3 取样日期z第1、2、3、4周，拟抛弃

31、日期的25%、50%、75%、100%.拟抛弃日期后2周。C2. 2. 4 操作程序C2.2. 4.1 每种商每批次取试样50mL于灭菌试管内，加入0.5mL含菌量为108cfu/mL菌悬液，混匀，使最终菌量为106cfu/mL.置于20C25C。如产品对光敏感，应遮光贮存。C2. 2. 4. 2 在上述取样日期，每管吸取1.0 mL试样移入9.0mL中和剂中，混匀。C2. 2. 4. 3 中和10min后，取样液或10倍系列稀释液1.0 mL分别接种营养琼脂培养基(细菌)或沙堡氏琼脂培养基(酵母菌).每管接种两个平皿，于35C37C培养48h(细菌)或72h(酵母菌).进行活菌计数，取平均值

32、。C2. 2. 4. 4 分别以O.03 mol/L PBS与中和剂代替试样，按上述方法加菌进行活菌计数作为阳性对照与中和剂对照;同时分别用1.0 mL O. 03 mol/L PBS与中和剂接种营养琼脂培养基与沙堡氏琼脂培养基以及未接种的上述培养基作阴性对照。C2. 2. 4. 5 在上述再接种日期(2周及以后J.在试样中加入0.5mL含量为105cfu/mL菌悬液，混匀，使最终菌量为10cfu/mL。在再接种前取样进行活菌计数。GB 191922003 口.2.4.6计算每种密的减少率z减少率=堕觉3古照组活菌数一试验组活菌数XIOO%.( Cl ) 阳性对照组活菌数C2.2.5 评价规定

33、a) 月姓对黑无离生长，中和剂对照法离数达到阳性对照活蕾数的%以上，否则应重新测试。b)夜第14天，级革富减少率二三部.90%.酵母离减少率二均在.0%.并廷在以后至抛弃8辈革缀离与酵母茵的活商计数不再增加。11 01 目的GB 19192-2003 附录D(标准的附录)中和剂鉴定试验用于确定所选用中和剂是否适用于拟进行的细菌或酵母菌杀灭试验。02 试验微生物细菌(以下任选一种):大肠杆菌(ATCC8739或8099)金黄色葡萄球菌(ATCC6538)绿胶杆菌(ATCC9027)酵母菌:白色念珠菌(ATCC10231)03 试验分组03.1 悬液定量中和剂鉴定试验03. 1. 1 第1组。吸取

34、试样10.0mL于试管内，置20C25C水浴中5min后，加入0.1mL菌悬液i昆匀。作用至预定时间，吸此样液1.0 mL加于含有9.0 mL o. 03 mol/L PBS的试管中混匀。吸取该最终样液1.0 mL，接种于平皿中，做活菌计数。03. 1. 2 第2组。吸取试样10.0mL于试管内，置20C25C水浴中5min后，加入0.1mL菌悬液j昆匀。作用至预定时间，吸此样液1.0 mL加于含有9.0 mL O. 03 mol/L中和剂溶液的试管中i昆匀，作用10 min.吸取该最终样液1.0mL，接种于平皿中，做活菌计数。如平板生长菌落数超过300个，应以O.03 mol/L PBS对上

35、述最终样液作适宜稀释后，再次进行活菌计数。03. 1. 3 第3组。吸取中和剂10.0mL于试管内，置20C25C水浴中5min后，加入0.1mL菌悬液混匀。作用10mino吸取该最终样液1.0mL，用中和剂做10倍系列稀释，选适宜稀释度悬液，各取1.0mL，分别接种于平皿中，做活菌计数。03. 1. 4 第4组。吸取中和产物溶液(以1份消毒剂加9份中和剂，作用10min配制而成)10.0mL于试管内，置20C25C水浴中5min后，加入0.1mL菌悬液混匀。作用10min。吸取该最终样液1.0mL，用中和产物溶液做10倍系列稀释，选适宜稀释度悬液，各取1.0mL，分别接种于平皿中，做活菌计数

36、。03. 1. 5 第5组。吸取O.03 mol/L PBS 10. 0 mL于试管内，置20C 25C水浴中5min后，加入0.1 mL菌悬液混匀。作用10mino吸取该最终样液1.0mL，用O.03 mol/L PBS做10倍系列稀释，选适宜稀释度悬液，各取1.0 mL，分别接种于平皿中，做活菌计数。03. 1. 6 第6组。吸取试验所用同批次0.03mol/L PBS 1. 0 mL.接种于平皿中.做活菌培养计数。03. 1. 7 第7组。吸取试验所用同批次中和剂1.0 mL，接种于平皿中，做活菌计数。03. 1. 8 第8组。将未接种的试验用培养基平板直接置温箱内培养。03.2 载体定

37、量中和剂鉴定试验03.2.1 第1组。吸取试样5.0mL于无菌小平皿内，将其置20C25C水浴中5min后，用无菌慑子夹入一菌片(布载体)，并使浸透于试样中。待作用至试验预定的时间，立即用无菌银子取出菌片移人含5. 0 mL o. 03 mol/L PBS试管中，作用10min。将试管振打80次，吸取该最终样液1.0 mL，接种于平GB 19192-2003 E革中，做法草草计数。D3.2.2 第2经e吸取试祥5.0mL于J5窟小平血内，将其量20C25C水浴中5min后，用无茵慑-r夹入一菌i片并使浸透子试样中。待作用试验预定的时间，立即用无商银子取出菌片移人含5.0mL 中和剂试管中，将试

38、管振打80次.作用10mino吸取该段终样液1.0 mL.接种于平皿中，做活菌计数。如平板生长茵落数超过300个，应重新吸取该最终样液。.5mL.用。.03血。I/LPBS徽适当稀释，选适宜手盖章季度悬液，吸取1.0 mL，分到接种子平.DD.中，滋滋皇宫计数。D3.2.3 第3组。吸取中和剂5.0mL予无菌小平皿内，将其置20C25C水浴中5min后，用无商楼子夹入一曹营片，并使浸透于中和剂内，作用10mino立即用无菌慑子取出菌片移入含5.0mL中和剂试管中，将试管振打80次，混匀。吸取该最终样液1.0 mL.用中和剂做10倍系列稀释，选适宜稀释度悬液，吸取1.0 mL.分别接种子平理中.

39、徽f垂直m数。D3.2.4 第4组。吸取中和产物溶液以没有消毒剂的载体置5.0mL中和剂内，作用10min)5. 0 mL 于无菌小平皿内，将其置20C25C水浴中5min后，用无菌慑子夹入一菌片，并使浸透于中和产物中。作用10min，用无菌银子取出菌片，移人含5.0mL中和产物溶液的试管中，将试管振打80次，混匀。吸取该毅终祥滚1.0 mL.用中和产物溶液做10f音系列!稀籍，选适宜草草释度悬液，吸取.告mL，分别接种于五JZ-.DD.中，做活菌计数。D3.2.5 第5组。吸取O.03 mol/L PBS 5. 0 mL于无吕西小平皿内，将其宣20oC25C水浴中5min 后，用元商银子夹人

40、一菌片，并使浸透于O.03 mol/L PBS中。作用10min.立即用元前银子取出菌片移入含5.0mL O. 03 mol/L PBS的试辛苦中，将试管振fT80次，混匀。吸取该最终样割草1.0mL.用号.03molL PBS做10倍系列稀释，远远3军事普森度悬液.吸取1.0mL.分别接矜于平践中，做法离计数。D3.2.6 第6组。吸取试验所用同批次O.03 mol/L PBS 1. 0 mL.接种子平血中，做滔随计数。D3. 2. 7 第7组。吸取试验所用同批次中和剂1.0 mL.接种于平皿中，做活菌计数。D3.2.8 第8组。将未接种的试验用培养基平板直接最激箱内培养。D4 评价裁定试验

41、结枭符合以下全部条件，所测中和剂可判为合格ga)第1组元试验菌，或仅有极少数试验茵茵落生长;七)第2组有较第1级为多，但较第3、4、5组为少的试验茵茵落生长，并符合表Dl事要求者3表D1牛和茹j鉴定试验合格标准中对第1经与第2忽窗落数部要求卡一一一一j 第1组平板平均菌落数第2到且早板平均菌落数5 L一一一一X (X+5l Y (Y十O.5Yl注1，X指在110之间的菌落数.Y为大于10的菌落数。注2，对仰菌作用不明l消毒剂所用中和剂的鉴定试验中，当第1组与第2组酶落数相近，难以达到本表要求时，可根据具体情况另行作出到黯郭评价。c)第3、4、5组有精似最试验菌生长，并在1X 105 cfu/m

42、L(片) 1 X 10 cfu/mL(片)之间，其组问菌落数误竣率按式(Dl)计算，其值应不超过15%，级问菌落数误主辈革辑=.5.二旦回颤这平均数一各锁商落平均数)的绝对值之和XI00%(Dl ) 3X三组!海半均菌落数出第68经无离生长。否则，说哥哥试剂或培养葵辛苦污染，全部试验应换禾污染试剂或培养蒸重做。e)连续三次试验取得合格评价。13 GB 19192-2003 D5 注意事项14 a)试验所分各组均有其特定意义，不得任意删减;b)严守无阁操作，保持试液和器材的元酶，注意更换吸臂，以防止沾染影响试验的准确性$0在计算微生物浓度时，须考虑其稀蒋倍数2d)第2级妇在预定对i鸿无声草生长，

43、可适当缩短作用对间，但最短不得少于3080GB 19192-2003 附录E(标准的附录试剂和培养基配方E1 0.03 mol/L PBS(pH7.2) 磷酸氢二纳(Na，HPO，.无水)2.83 g 磷酸二氢饵(KH，PO，)1. 36 g 蒸馆水加至1 000 mL E2 革兰氏染色液第1液z结晶紫溶液结晶紫乙静饱和溶液100 mL 结晶紫4 g8 g 95%乙醇100 mL 1%草酸镀溶液80 mL 第2液t卢戈氏腆液殃化告甲2 g 腆1 g 蒸馆水200 mL 第3液z脱色剂(1) 95%乙醇100 mL (2)丙嗣乙醇溶液95%乙醇70 mL 丙酣30 mL 第4液z稀释石碳酸复红液

44、碱性复红乙醇饱和溶液10 mL 碱性复红5 g10 g 5%石碳酸溶液90 mL 蒸馆水900 mL E3 营养琼脂培养基蛋白陈10 g 牛肉膏5 g 氯化纳5 g 琼脂20 g 蒸馆水1000 mL E4 沙堡氏琼脂培养基葡萄糖40 g 蛋白陈10 g 琼脂20 g GB 19192-2003 蒸馆水1000 mL E5 无钙镶PBS(pH7.2-7. 4) 磷酸二氢梆(KH，PO，)0.20 g 磷酸氢二销(Na2HPO, 12H,0) 2.89 g 氯化御(KCD0.20 g 氯化纳(NaCD双蒸水E6 小牛血清8.00 g 1000 mL 将过滤除菌后的小牛血清，放入560C恒温水浴中，保温30mn灭活补体。处理后分装，保存于一200C备用。E7 马铃薯葡萄糖琼脂培养基马铃薯葡萄糖琼脂蒸馆水200 g 20日20 g 1 000 mL