GB T 9826-2008 粮油检验.小麦粉破损淀粉测定.α-淀粉酶法.pdf

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1、ICS 67.040 B 20 和国国家标准11: .，.、中华人民粮油检验GB/T 9826-2008 代替GB/T9826-1988 小麦粉破损淀粉测定-淀粉酶法Inspection of grain and oils-Determination of starch damage in f1our-Alpha-amylase method 2008-11-04发布中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会2009-01-01实施发布GB/T 9826-2008 目IJ1=1 本标准修改采用美国谷物化学师协会标准AACC76-30A(1999)(小麦粉破损淀粉测定)(英文

2、版。本标准与AACC76-30A(1999)相比的差异如下:-一用GB/T5490-1985 (粮食、油料及植物油脂检验一般规则附录B中的方法代替AACC 76-30A(1999)中所引用AACC70-75的方法标定硫代硫酸纳溶液。本标准是对GB/T9826-1988(小麦粉破损淀粉测定法-淀粉酶法的修订。本标准代替GB/T9826-19980 本标准与GB/T9826-1988相比的主要变化:一一将-淀粉酶的作用时间由60min调整为15min; 一一规定了-淀粉酶的使用量;一一修改了破损淀粉值的计算公式。本标准的附录A为规范性附录。本标准由国家粮食局提出。本标准由全国粮油标准化技术委员会归

3、口。本标准起草单位:国家粮食局科学研究院。本标准主要起草人z孙长坡、林家永、薛雅琳。本标准所代替标准的历次版本发布情况为z-一-GB/T9826-19880 I 1 范围粮油检验小麦粉破损淀粉测定-淀粉酶法GB/T 9826-2008 本标准规定了-淀粉酶方法测定小麦粉破损淀粉的术语和定义、原理、仪器和用具、试剂、操作步骤、结果计算和重复性。本标准适用于小麦粉破损淀粉的测定。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本

4、。凡是不注目期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 5490 1985 粮食、油料及植物油脂检验一般规则3 术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3. 1 破损淀粉damaged starch 小麦中的淀粉颗粒在研磨过程中受到机械损伤而产生破损的淀粉。4 原理在研磨过程中小麦的淀粉颗粒会受到损伤，破损淀粉含量会影响小麦粉的吸水性和面团揉混特性。本方法用于测定在小麦粉中易于被真菌r淀粉酶水解的破损粉颗粒的质量分数。以水分含量为14%的小麦粉样品计算。5 仪器和用具5. 1 恒温水浴:水温控制在300C土0.1oC。5.2 耐热玻璃试管:25mmX220 mmo 5.3 量筒:25mL、5

5、0mLo 5.4 玻璃漏斗及中速定量元灰滤纸。5.5 天平z感量为0.01g。5.6 移液管或移液器:1mL、5mL.10 mL。5.7 pH计或精密pH试纸:可测pH4.6-4. 8 0 5.8 秒表。5.9 滴定管:10mL (精度为0.1mL)。5.10 锥形瓶:150mLo 5. 11 玻璃棒。1 GB/T 9826-2008 6 试剂除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为蒸馆水。6. 1 乙酸缓冲液:溶解4.1 g元水乙酸锅(CH3COONa)，再加入3.0mL冰乙酸，用水定容至1 000 mL，溶液pH为4.6，._，4.8o6.2 硫酸溶液:将100mL浓硫酸(HZS04)加入到

6、大约700mL水中，用水定容至1000 mL，溶液的浓度为3.68mol/L士0.05mol/Lo 6.3 鸽酸纳溶液:称取12.0g鸽酸纳(NazW04 2Hz 0)溶于水中，并定容至100mLo 6.4 a-淀粉酶制品:由米曲霉(Aspergillusoryzae)制得的真菌酶(活力大于等于10U/mg) ，参见参考文献1J。7 操作步骤7. 1 将乙酸缓冲液(6.1)置于30oc水浴中。称取1.00 g(14%湿基)面粉样品置于150mL锥形瓶(5. 10)中。称取0.050g酶，加入到锥形瓶中，再加入45mL乙酸缓冲液(6.1)。用玻璃棒混匀。从加入溶液(6.1)起，在300C恒温水浴

7、(5.1)中准确保温15min。7.2 保温后，加入3.0mL硫酸溶液(6.2)和2.0mL鸽酸铀溶液(6.3)。充分混合，静置2min，然后经滤纸过滤，弃去最初U8，._，10滴滤液。7.3 立即吸取5.0mL滤液于试管中，并按照附录A测定还原糖的含量。7.4 按7.1,._, 7. 3在不加面粉的条件下，测定试剂的空白。样品(7.3)中消耗硫代硫酸纳溶液体积减去空白实验(7.的消耗的硫代硫酸铀溶液体积就是还原糖氧化0.1mol/L铁氧化饵消耗的体积，并可在附录A的表A.1中查得消耗的铁氧化饵溶液体积换算成的麦芽糖的毫克数(m)。8 结果计算按式(1)计算试样的破损淀粉值(P)，数值以%计:

8、1. 64 X 5 X m p = .L. V : /, = 0.082 X m 100 . ( 1 ) 式中:m 由附录A得到的10g淀粉中麦芽糖毫克数，单位为毫克(mg); 5一一样品稀释倍数;1. 64-61%的淀粉转化为麦芽糖，所以乘以0.61的倒数1.64。9 重复性在相同条件下，两次测定结果之差不得超过平均值的5%，测定结果保留小数点后两位。2 附录A(规范性附录)还原糖与非还原糖的测定A.l 范围本附录适用于测定小麦粉或淀粉中的还原糖和非还原糖的含量。A.2 仪器和用具A. 2.1 磨口带塞锥形瓶:100mL或125mLo A.2.2 量筒:50mL、25mLo A.2.3 移液

9、器管):1mL、5mLo A.2.4 玻璃漏斗。A.2.5 耐热试管:直径2cm，高20cm。A.2.6 水浴锅:沸水浴。A.2.7 铁丝笼:放置试管。A.2.8 微量滴定管:10mL(最小刻度为0.02mL)。A.2.9 分析天平:分度值0.0001 go A.3 试剂A.3.1 乙靡z体积分数为95%。GB/T 9826-2008 A.3.2 乙酸缓冲液:溶解3mL的冰乙酸，加入4.1g的元水乙酸销和4.5mL的浓硫酸(凡S04，密度为1.84 g/mL) ，然后定容至1000 mL。A.3.3 鸽酸销溶液z称取12.0g鸽酸销(Na2W04 2H20)溶于水中，并定容至100mL。A.

10、3. 4 O. 1 mol/L碱性铁氧化饵溶液z称取32.9g干燥铁氧化饵K3Fe(CN)6J与44.0g元水碳酸锅(Na2C03)用水定容至1000 mL，贮于棕色瓶中避光保存。铁氧化饵溶液标定:准确量取10.0mL的铁氧化饵溶液，并加入25mL乙酸盐溶液和1mL淀粉-腆化饵溶液。用0.1mol/L的硫代硫酸铀溶液滴定至溶液蓝色完全消失。0.1mol/L硫代硫酸铀溶液的消耗量为10.0mL。A.3.5 乙酸盐溶液z称取70g氯化饵(KCl)和40g硫酸钵(ZnS04 7H20)于水中完全溶解后，并缓慢加入200mL冰乙酸，定容至1000 mL。A.3.6 可溶性淀粉-腆化饵溶液z用少量冷水调

11、和2g的可溶性淀粉，然后慢慢加入沸腾的水中(小于50 mL)。溶液冷却后，加入50g腆化饵(KI)，用蒸馆水定容至100mL，并加入1滴饱和的氢氧化锅(NaOH)溶液。A. 3. 7 o. 1 mOl/L硫代硫酸铀溶液z称取24.82g硫代硫酸销(Na2S203 5比0)和3.8g四珊酸铀(Na2B407 10H20)用水定容至1000 mL，贮于棕色瓶避光保存，按GB/T5490-1985的附录B进行标定。注:在每天测定样品时，应做相应的空白试验以测定铁氧化饵试剂的变化，并校正试剂中还原性杂质。首先把45 mL的乙酸纳溶液和3mL的HZS04溶液、2mL的鸽酸铀溶液混合均匀。再取5mL以上混

12、合液(代替5mL 的样品滤液)，加人10mL的铁氧化饵溶液和1mL的淀粉-腆化饵溶液，该步骤与还原糖的测定同时进行，最终使溶液的蓝色完全消失所用的硫代硫酸纳溶液的量为10mL。如果硫代硫酸铀溶液的用量在10mL士0.05 mL，铁氧化饵溶液仍可使用，但在还原糖含量计算时应该进行适当的校正。3 GB/T 9826-2008 A.4 操作步骤A. 4.1 准备样品提取A. 4. 1. 1 提取样品液z称取5.675g的小麦粉至100mL或125mL的锥形瓶(三角瓶)中，振荡锥形瓶使样品处于同一侧，用5mL的乙醇湿润面粉。振荡锥形瓶使湿润面粉位于上方，然后加入50mL的乙酸盐缓冲液，直到将缓冲液全部

13、加入后再让缓冲液与面粉接触。振荡锥形瓶，将湿润面粉变成悬浊液，立即加入2mL的鸽酸销溶液并再一次彻底混匀。A. 4. 1. 2 立即过滤，并弃去最初的8.-.10滴滤液。A.4.2 还原糖测定A. 4. 2.1 氧化:吸取5mL样品滤液至试管中。向试管中准确加入10mL的铁氧化饵溶液，混合均匀，然后将试管浸入剧烈沸腾的水浴锅中，试管中的液面应低于沸水液面3cm4 cm。试管在沸水锅中准确煮沸20min。注:样品提取物的过滤处理与沸水浴处理的时间间隔不要超过15min20 min。进一步延迟可能引起藤糖在酸溶液中的分解而导致测定错误。A.4.2.2 滴定:取出试管立即用流水冷却。冷却后将试管中溶

14、液倒入容积为100mL或125mL的锥形瓶中，并用25mL乙酸盐溶液洗涤试管，并将洗涤液也加入锥形瓶。混匀后加人1mL的淀粉-腆化饵溶液，并彻底混匀。然后用0.1mol/L的硫代硫酸锅溶液滴定至溶液蓝色完全消失，并记录下消耗的硫代硫酸锅溶液体积(V1)。A.4.2.3 空白试验:吸取空白液5mL代替样品液，同样按照A.4. 2. l.-.A. 4.2.2步骤操作，并记录消耗的硫代硫酸纳溶液体积(Vo)。A. 4. 3 非还原糖的测定A. 4. 3.1 吸取5mL已澄清的样品滤液至试管中，然后浸入水浴锅中煮沸15mino A. 4. 3.2 用流水冷却试管并准确加入10mL的铁氧化饵溶液，按照A

15、.4. 2还原糖测定方法用硫代硫酸纳溶液滴定。A.5 结果计算A. 5.1 还原糖含量的计算A.5. 1. 1 还原糖含量先按式(A.1)计算出氧化样品液中还原糖所需0.1mol/L铁氧化饵溶液体积(V) ，再根据此体积查表A.1，即可查得样品中含还原糖(以麦芽糖计算)的毫克数(mg)。按式(A.1)计算:V = V1 - Vo 式中:V 氧化样品液中还原糖所需的0.1mol/L铁氧化饵溶液体积，单位为毫升(mL); V1一一滴定样品液用去0.1mol/L铁氧化饵溶液的体积，单位为毫升(mL);Vo -滴定空白液用去0.1mol/L铁氧化饵溶液的体积，单位为毫升(mL)。A.5. 1. 2 o

16、. 1 mol/L铁氧化御的体积与还原糖含量对照可查表A.1oA.5.2 非还原糖含量的计算.( A.1 ) A. 5. 2.1 非还原糖含量先按式(A.2)计算出氧化样品液中非还原糖所需0.1mol/L铁氧化何溶液体积(V3)，再根据此体积查附表A.l，即可查得试样中含非还原糖(以庶糖计算的毫克数(mg)。按式(A.2)计算:V3 = V2 - V1 .( A.2 ) 式中zV3一一氧化样品液中非还原糖所需0.1mol/L铁氧化饵溶液体积，单位为毫升(mL); 4 GB/T 9826-2008 V2二-滴定样品液(还原糖和非还原糖)用去0.1mol/L铁氧化何溶液的体积，单位为毫升(mL);

17、V1二一一滴定样品液(还原糖)用去0.1mol/L铁氧化饵溶液的体积，单位为毫升(mL)。A. 5. 2. 2 O. 1 mol/L铁氧化御的体积与非还原糖含量对照可查表A.l。表A.l铁氨化饵-麦芽糖-黯糖的转换数据表被还原的每10g淀粉中每10g淀粉中被还原的每10g淀粉中每10g淀粉中0.1 mol/L的含有的麦芽糖含有的震糖0.1 mol/L的含有的麦芽糖含有的藤糖铁氧化御的体积/的量/的量/铁氧化饵的体积/的量/的量/mL mg mg mL mg mg O. 10 5 5 3.00 151 143 0.20 10 10 3.10 156 148 0.30 15 15 3.20 161

18、 152 0.40 20 20 3.30 166 157 0.50 25 24 3.40 171 161 0.60 31 29 3.50 176 166 0.70 36 34 3.60 182 171 0.80 41 38 3. 70 188 176 0.90 46 43 3.80 195 181 1. 00 51 48 3.90 201 185 1. 10 56 52 4.00 207 190 1. 20 60 57 4. 10 213 195 1. 30 65 62 4.20 218 200 1. 40 71 67 4.30 225 204 1. 50 76 71 4.40 231 209

19、 1. 60 80 76 4.50 237 214 1. 70 85 81 4.60 244 218 1. 80 90 86 4. 70 251 223 1. 90 96 91 4.80 257 228 2.00 101 95 4.90 264 233 2.10 106 100 5.00 270 238 2.20 111 104 5.10 276 242 2.30 116 109 5.20 282 247 2.40 121 114 5.30 288 251 2.50 126 119 5.40 295 256 2.60 130 123 5.50 302 261 2. 70 135 128 5.6

20、0 308 266 2.80 140 133 5. 70 315 270 2.90 145 138 5.80 322 275 5 GB/T 9826-2008 表A.l(续)被还原的每10g淀粉中每10g淀粉中被还原的每10g淀粉中每10g淀粉中0.1 mol/L的含有的麦芽糖含有的煎糖0.1 mol/L的含有的麦芽糖含有的蘸糖铁氧化饵的体积/的量/的量/铁氧化饵的体积/的量/的量/mL mg mg mL mg mg 5.90 328 280 7.30 418 347 6.00 334 285 7.40 425 352 6.10 341 290 7.50 431 357 6.20 347 29

21、4 7.60 438 362 6.30 353 299 7.70 445 367 6.40 360 304 7.80 451 372 6.50 367 309 7.90 458 377 6.60 373 313 8.00 465 382 6. 70 379 318 8. 10 472 387 6.80 385 323 8.20 478 392 6.90 392 328 8.30 485 397 7.00 398 333 8.40 492 402 7.10 406 337 8.50 499 407 7.20 412 342 注:本表中数据由0.5g面粉中测定的数据换算成10g面粉中的含量获得的。

22、6 GB/T 9826一2008参考文献lJ Beernfield P.1995. Amylase,alpha and beta. Methods Enzymol, 1 :149. 2J Blish M. J. and Sandstedt R. M. 1993. An improved method for the estimation of flour dia static value. Cereal Chem, 10: 189. 3J Donelson J. R. and Yamazaki W. T. 1962. Note on a rapid method for the estimat

23、ion of dam aged starch in soft wheat flours. Cereal Chem, 39: 460. 4J Donelson J. R. and Yamazaki W. T. 1968. Enzymatic determination of starch in wheat frac tions. Cereal Chem, 45 : 177. 5J AOAC International 1995. Official methods of analysis of AOAC international, 16th ed. Method, 939.03. The Asscotion, Arlington, V A. OON|NH阁。华人民共和国家标准粮油检验小麦粉破损淀粉测定-淀粉酶法GB/T 9826一2008国中骨中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销4等印张O.75 字数14千字2009年1月第一次印刷开本880X12301/16 2009年1月第一版* 定价14.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533书号:155066 1-35470 GB/T 9826-2008