GB T 4789.4-2008 食品卫生微生物学检验.沙门氏菌检验.pdf

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1、ICS 07.100.30 C 53 中华人民圭t_，、和国国家标准2008-05-16发布GB/T 4789.4-2008 代替GB/T4789.4- 2003 食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验Microbiological examination of food hygiene一Examination of Salmonella 中华人民共和国卫生部中国国家标准化管理委员会发布2008-11-01实施GB/T 4789.42008 F.J1j昌了国际分析家学会(AOACINTERNATIONAL) AOAC Official Method 967. 26 , 967.27，967.28;自

2、际标准化组织(ISO)ISO6579 :2002;美国食品药品管理局(FDA)(细菌分析手册5章:艺jp门氏菌(2003年)(Bacteriological Analytical Manual , Chapter 5: Salmonella , 2003)。本标准代替GB/T4789.42003(食品卫生微生物学检验砂门民菌检验。本标准在实菇之日起，GB/丁4789.42003同时度止。GB/T 4789. 4-2003相比主要变化如下:了样品制备过程:了原标准中前增蔷和增菌部卦;了原标准中分离部分;原标准中生化试验部分。的附录A、附录B为规范性由中华人民共和国卫生部提出并归口。资起草单位=中

3、国疾病预防控制中心营养与食品安全班。本标准参加起草单位=吉林省疾病预防控制中心、南南省疾病亲自控制中心、广西壮族吉治区疾病理前控制中b、福建省疾病预防控制中JL、新江省疾病颈防空缸中夺。: :xU秀梅、郭云吕、文u桂华、李秀桂、彦兴广、马群飞、程苏云、回静。本栋准班代替标准的历次殷本发布情况为:一-GI王4789.4-1984，G丑/T4789.4 1994 ,GB/T 4789.4-20030 I 食品卫生微生物学检验沙门氏商梭验1 范围本标准规定了食品中沙门氏菌的检验方法。本标准适用于各类食品和食物中毒样品中珍门的栓撞。2 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下。

4、2. 1 冰箱:20C ,_, 50C。2.2 恒温培养箱:36 oC :f: 1 oC ,42 oC士lOC。2.3 均质器。2.4 振荡器。2.5 电子天平:感量0.1go 2.6 元菌锥形瓶:容量500mL ,250 mLo 2. 7 元菌吸管:1mLC具0.01mL刻度、10mLC具0.1mL 2.8 元菌培养血:直径90mmo 2.9 无菌试管:3 mmX50 mm、10mmX75 mmo 2. 10 2. 11 pH计或pH比色管或精密pH试纸。2. 12 伞自动微生物鉴定系统CVITEK)l)0 3 培养器和试剂3. 1 缓冲蛋白陈水CBPW):见第A.1章。3.2 四硫磺酸纳煌

5、绿CTTB)增菌液:见第A.2章。3.3 亚硝酸盐肮氨酸。C)增菌液z见第A.30 3.4 亚硫酸铅CBS)琼脂:见第A.4章。3.5 HEC Hektoen Enteric )琼脂:见第A.5章。3.6 木糖赖氨酸膜氧腥盐CXLD)琼膛:克第A.60 3. 7 科玛嘉沙门民菌属显色培养基2)。3.8 CTSD琼黯z兑第A.7章。3.9 自1在水、荒基贡试齐:克第A.8章。3. 10 尿素琼黯CpH7.2):晃第A.9章。3. 11 CKCN)培养基z克第A.10章。3.12 赣氨酸肆竣爵试验培养基:克第A.11章。工由法国生物梅里埃公司提供的产品的商品名。结出的认可。如果其他等效产品具有相国

6、的效果，则可使用这盟等效的产品。D 由法国科玛嘉公司提供的产品的商品名。给出这一信可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效的产品。GB/4789.4-2008 吸头。，并不表示对该产品品的认1 GB/T 4789.4-2008 3. 13 糖发酵管:见第A.12章。3. 14 邻硝基酣日-D半乳糖昔(ONPG)培养基:见第A.13章。3. 15 半固体琼脂:见第A.14章。3. 16 丙二酸铀培养基:见第A.15章。3. 17 沙门氏菌0和H诊断血清。3.18 API20E生化鉴定试剂盒或VITEKGNI+生化鉴定卡1)。4 检验程序沙门氏菌检验程序见阁i。, 18 h 24 h

7、图1沙门氏菌检验程序2 反应结果与左侧描述不符GB/4789.4-2008 5 5. 1 草增称取25g(mL)样品放人盛有225mL BPW的无酶均质杯中，以8000 r/min-10 000 r/min均质1 min2 min，成置于盛有225mL BPW的无菌均质袋中，用指击式均震器抬扛1min-2 mino若样品为液态，不需要均庚，振荡混匀。如需要，酣定pH佳，用1mol/mL元菌氢氧化销或盐酸调pH6.8土。.20元菌操作将样品转至500mL锥形瓶中，如使用均质袋，可直接进行培养，于360C士lOC8 h ,._ 18 ho 如为冷冻产品，应在450C以下不超过15min，或20C，

8、_，50C不超过18h解冻。5.2 增菌轻轻摇动培养过的样品混合物，移取1mL，转种于10mL TIB内，于是20C土lOC培养回头-24ho 同时，另取1mL，转种于10mL SC内，于360C士lOC培养18h ,._, 24 ho 5.3 分离分别用接种环取增菌液1环，是l线接种于一个BS琼脂平板和一个XLD琼脂平板或HE琼脂平板或科玛嘉显色培养基平板。于360C土lOC分别培养18县-24h (XLD琼黯平极、HE琼黯平板、科玛嘉显色培养基平极)或40h-48 h (BS琼脂平板)，观察各个平板上生长的菌落，各个平提上的商落特征兑表10选择性琼脂平板BS HE琼黯XLD琼黯科玛嘉显色培

9、养基5.4 生化试黯1 沙门民商属在不i可选择性琼脂平板上的菌落特征抄门民茵茵落为黑色有金属光泽、棕褐色或灰色，黯蔼周，用;有整菌株形成灰，多数菌落中心黑色或凡乎全黑色;有些菌栋为黄色，中心黑色或几乎企黑色菌落坐粉红色，带或不带黑色中心，有些菌栋可呈现大的智先萍的黑色中心，或呈现金部黑色的蘸落;有些留株为黄色菌落，带或不带黑色中合5.4.1 自选择性琼脂平较上分别挑取两个以上典型或可疑蔷落，接种三糖铁琼蹄，先在斜因是j线，再于底层穿剌;接种针不要灭菌，直接接种赖氨酸脱竣酶试验培养基秸营养琼脂平板，于360C士lOC培养18县，._24h，必要时可廷长至48在玉器铁琼脂和赖氨酸脱竣酶试验培养基内

10、，砂门氏商阔的反应结果见表20表2ZP门民菌属在三糖铁琼脂和赖氨酸膜竣酶试验培养基内的反应结果赖氨酸1m接酶试验培费基初步到新斜在吉底层十十(-)十(一十可疑艺专门民菌属十十一十一可疑抄门十十+(一十() + 可疑校门十十十/一十/才在砂门注:十阳性，一前性;十()多数阳性，少数阴性;十I-E性或阴性。3 G/T 4789.4-2008 表2说明，在三糖铁琼脂内斜面产酸，底层产酸，同时赖氨酸脱竣酶试验阴性的菌株可以排除。其他的反应结果均有沙门氏菌属的可能，同时也均有不是沙门氏菌属的可能。5.4.2 接种三糖铁琼脂和赖氨酸脱竣酶试验培养基的同时，可直接接种蛋白陈水(供做就基质试验)、尿素琼脂(p

11、H7.2)、氧化饵(KCN)培养基，也可在初步判断结果后从营养琼脂平板上挑取可疑菌落接种。于36aC:i:1ac培养18h,_, 24 h，必要时可延长至48h，按表3判定结果。将己挑菌落的平板储存于2aC，_，5aC或室温至少保留24h，以备必要时复查。表3沙门氏菌属生化反应初步鉴别表pH7.2尿素反应序号硫化氢(H2S) 赖氨酸脱竣酶Al + + +/一A2 A3 5.4.2. 1 反应序号常，按表4可判定3项中有1项异+ 注:+表示阳5.4.2.2 反应序号但需要结合血清学I5.4.2.3 反应序号句:门氏菌为赖氨酸脱竣酶5.4.2.4 必要时按表5结果均为阳性，口一加函一附I一+一十V

12、一+一+M + 丙二酸盐氧化押(KCN)注:+表示阳性;一表示阴性。5.4.3 如选择API20E生化鉴定试剂盒或VITEK全自动微生物鉴定系统，可根据5.4.1的初步判断结果，从营养琼脂平板上挑取可疑菌落，用生理盐水制备成浊度适当的菌悬液，使用API20E生化鉴定试剂盒或VITEK全自动微生物鉴定系统进行鉴定。+ + + + ONPG + + 4 GB/4789.4-2008 5.5 血清学鉴定5.5. 1 抗原的准备一般采用1.2%-1.5%琼脂培拌物作为玻片疑集试验用的抗原。血清不凝集时，将菌株接种在琼肆量较高的(如2%-3%)培养基上再检查;如果是由于Vi抗原的存在国阻止了。凝集反应时

13、，可挑取酶苔于1mL生理盐水中做成浓菌液，于酒精灯火焰上煮沸。H抗原发育不良时，将菌株接种在O.55 % -0. 65 %半器体琼脂平板的中月，长时，在其边援部分取菌检查;或将菌株通过装有O.3 ,-.;0. 4 %半固体琼届的小瑛管1次-2次，自远端取菌培养后再栓查。5.5.2 多价蔷体拉原(0)鉴定在玻片上划出两个约1cmX2 cm的区域，挑取1环待测菌，各放1/2环于玻片上的每一区域上部，在其中一个区域下部加1漓多价菌体(0)拉血清，在另区域下部加入1滴生理盐水，作为对照。再用无酶的接种环或针分射将两个区域内的菌落研成乳状液。将玻片倾斜摇动混合1min，并对着黑暗背景进行观察，任何程度的

14、凝集现象皆为阳性反应。5.5.3 多价鞭正在按照(H)鉴定爵王5.205.5.4 血语学分型选做项自5.5.4. 1 0抗原韵鉴定A，-，F多铃。蛊清做进并凝集试验，同时围生理盐水做对照。在生理盐水中自凝者为粗糙形菌株，不能分型。被A，-，F多役。血清凝集者，依次用04;03、010;07; 08;09; 02和011因子盘清做凝集试验。根据试验结果，判定。群。被03、010蛊清凝集的菌株，再用010、015、034、019单因子虽清做凝集试验，判定立1、四、E3、归各亚群，每一个0抗原成分的最后确定均应提掘。单因子盘清的检查结果，没有0单因子监清的要用商个0复合因子血清进行核对。不被Ar-.

15、_，F多价。血清凝集者，先用9种多价。蛊清捡查，如有其中一种盘清凝集，员:用这种血清所包括的0群血清逐一栓查，以确定。群。每种多价。直清所包括的O厨子如下:0多价1A , B, C , D , E , F (并组括6，14群0多价213 , 16 , 17 , 18 , 21群0多合328 , 30 , 35 , 38 , 39 0多价440 , 41, 42 , 43群0多价544 , 45 , 47 , 48 0多合6白，日，52 , 53群0多价7町，56，57，58群0多价859，仰，61, 62群0多恰9邸，町，邸，67群5.5.4.2 H抗服的鉴定A，_，F各0群的常旦菌型，依次用

16、表所述H因子蛊清检查第1相和第2柏的H抗原。表6A-F群常见菌型H抗原褒。群第1相第2相A a 无B g ,f ,s 无B i，七，d2 5 GB/T 4789.4一2008表6(续)。群第1辑第2捂C1 k,v ,r ,c 5,Z15 C2 b,d,r 2,5 的d 无D(产气的)g ,m , p ,q 元E1 h,v g ,s ,t 无E4 1 :每不常见的酶嚣，先用8种多价H血清栓查，如有其中一种或两种蛊清凝集，则再用这一种或两种血清所包括的各种日的子血清逐一检查，以第1相和第2项的日抗原。8种多价H血清所包括的H因子如下:H多价1a , b ,c , d ,i H多份2eh, enx,

17、 enZlS ，烛，gms，gpu，gp，剖，mt，gzSl日多价3k , r , y , z , zlQ ,lv,lw , lz13 ，lzz8，队在H多价41,2;1 , 5;1 , 6;1 , 7;z6 H多街5Z4旬，句句，Z4 Z32 , Z29 , Z3S , Z36 , Z38 日多价6Z39 , Z41 , Z42 , Z44 日多价7Z52忽53, ZS4 , ZSS H多价8ZS6 Z57 ，缸，Z61, Z62 每一千H抗原成分的最后确定均应根握H单因子血清的控查结果，没有H单因个H复合因子盘清进行核对。的要用两栓出第1柜H抗原市未检出第2相H抗原的或检出第2相H抗琼而呆

18、栓出第1相H抗原的，在琼脂斜面上移种1代，._，2代后再检查。如钙只检出一个相的H抗原，要用位相变异的方法检查其另一千相。单相菌不必做位柜变异检查。位相变异试撞方法如下:小玻管法:将半团体管每管约1mL2 mL)在酒精灯上熔化并冷至500C，取巳知相的H因血清O.05 mL-O. 1 mL，加入于熔化的半固体内，混匀后，用毛细吸管吸取分装子供位相变异试验的小玻管内，侠凝固后，用接种针挑取待检菌，接种于一端。将小菠管平放在平皿内，并在其旁放一团湿棉花，以防琼届中水分蒸发而干缩，每天检查结果，待另一相细菌解离后，可以从另一端提取细进行检查。培养基内监清的浓度应有适当的出例，过高时细菌不能生长，过低

19、时间一相如菌的动力不能挣缸。一般按原血清1: 200 ,._, 1 : 800的量加入。小鲁j管法:将商端开口的小玻管(下端开口要留一个棋口，不要平齐)放在半固体管内，小菠管的上端应离出于培养基的表面，灭酶后备用。辑用时在酒精灯上加热熔化，冷至500C，提取因1耳，加入小套管中的半固体内，略如撞动，使其氓匀，侠凝固后，将待检菌株接种于小套管中的半由体表层内，每天检查结果，待另相细菌解离后，可从套管外的半国体表面取菌检查，或转种1%软琼黯斜面，于3rc培养后再教凝集试载。简易平较法:将0.7%-0.8%半固体琼脂平板烘干表丽水分，挑取自子血清1环，滴在半固体平板表露，放置片刻，待蛊清吸收到琼脂内

20、，在血清部位的中央点种待检菌栋，培养后，在形成蔓延生长的菌苔边缘取菌检查。巳GB/4789.4-2008 5.5.4.3 Vi抗原的鉴定Vi因子血清检查。巴知具有Vi抗康的菌型有:伤寒抄门氏菌，丙型商伤寒沙门民菌，都柏林防门氏菌。5.5.在4菌型的判定根据血清学分型鉴定的结果，按照附录B或有关沙门民菌属抗累表判定茜型。5.6 结果报告综合以上生化试拴和血清学鉴定的结果，报告25在样品中栓出或未拉出沙门民菌属。7 G/T 4789.4-2008 A.1 援;中蛋白肆水(PW)A. 1.1 成分蛋白膜氯化铀磷酸氢工销(含12个结晶7j()磷酸工氢愣蒸简水A. 1.2 制备将各成分加人蒸馆求中，提混

21、均匀，灭菌121.C, 15 min A.2 四辅醋酸铀煌绿(宫TB)增菌液A. 2.1 基础液附录A(摆范性器录培养基和试剂10.0 g 5.0 g 9.0 g 1. 5g 1 000.0 mL 10 m巾，如热煮沸自陈10.0 g 民膏5.0 g 氯化锅3.0 g 嵌酸钙45.0 g 蒸锚水1 000.0 mL 除碳酸钙外，将各成分加入蒸馆水中，搅混均匀，静置约10min , 饵，调至pH7.0土0.1，高压灭菌1210C, 20 min A.2.2 硫代硫酸锦溶液硫代硫酸制(含5个结晶水)50.0 g 蒸锚水加至100.0mL 高压灭菌1210C, 20 mino A. 2. 3 棋濡攘

22、棋片20.0 g 腆化饵25.0 g 燕锚水加至100.0mL ，调至pH7.2土0.1，高压，再加入碳酸;再礁化饵充分溶解于少量的蒸馒水中，再投人腆片，振摇玻题至棋片全部溶解为止，然后加蒸锚水至规定的总量，贮存于棕色瓶内，寨紧瓶盖备用。A. 2. 4 0.5%煌绿水榕滚煌绿0.5 g 蒸馒水100.0 mL 搭解后，存放暗处，不少于1d，使其自然灭匾。A.2.5 牛距盐溶液牛瞿盐10.0 g 蒸馆水100.0 mL 加热煮沸至完全洛解，高压灭菌121.C, 20 m凶。8 GB/4789.4-2008 A. 2.6 制备基础液900.0 mL 硫代硫酸纳溶液100.0 mL 腆溶液20.0

23、mL 煌绿水溶液2.0 mL 牛胆盐溶液50.0 mL 临用前，按上列顺序，以元菌操作依次加入基础液中，每加入一种成分，均应摇匀后再加入另一种成分。A.3 亚晒酸盐肮氨酸。C)增菌液A. 3.1 成分蛋白豚乳糖磷酸氢二铀(含12个结晶水)亚晒酸氢铀L-脱氨酸蒸馆水A. 3. 2 制备5.0 g 4.0 g 10.0 g 4.0 g o. 01 g 1 000.0 mL 除亚晒酸氢铀和L-肮氨酸外，将各成分加入蒸馆水中，搅混均匀，静置约10min，加热煮沸5min 至完全溶解，冷至550C以下，以元菌操作加入亚晒酸氢铀和1g/L L-肮氨酸溶液10mL(称取O. 1 g L-肮氨酸，加1mol/

24、L氢氧化铀溶液15mL，使溶解，再加元菌蒸馆水至100mL即成，如为DL肮氨酸，用量应加倍)。摇匀，调至pH7.O:!:O. 10 A.4 亚硫酸铅(BS)琼脂A. 4.1 成分蛋白豚牛肉膏葡萄糖硫酸亚铁磷酸氢二铀煌绿拧棱酸钻饺亚硫酸铀琼脂蒸馆水A. 4. 2 制备10.0 g 5.0 g 5.0 g 0.3 g 4.0g 0.025 g或5.0g/L水溶液5.0mL 2.0 g 6.0 g 18.0 g 1 000.0 mL 将前三种成分加入300mL蒸馆水(制作基础液)，硫酸亚铁和磷酸氢二锅分别加入20mL和30 mL蒸馆水中，拧橡酸锁镀和亚硫酸纳分别加入另一20mL和30mL蒸馆水中，琼

25、脂加入600mL蒸馆水中。然后分别搅拌均匀，静置约30min，加热煮沸至完全溶解。冷至800C左右时，先将硫酸亚铁和磷酸氢二纳混匀，倒入基础液中，混匀。将拧攘酸锁镀和亚硫酸铀混匀，倒入基础液中，再混匀。调至pH7. 5:!:0. 1，随即倾入琼脂液中，混合均匀，冷至500C，._，550C。加入煌绿溶液，充分混匀后立即倾注平皿，每皿约20mL。注:本培养基不需要高压灭菌，在制备过程中不宜过分加热，避免降低其选择性，贮于室温暗处，超过48h会降低其选择性，本培养基宜于当天制备，第二天使用。9 GB/茧，4789.4-2008 A.5 HE (Hektoen主nteric)琼黯A.5.1 成分肉膏

26、乳糖蘑墙之长杨索氟化锅琼膛蒸镇水0.4%漠蘑香草盼蓝溶被Andrade指示剂申攘乙液A.5.2制3.0 g 12.0 g 12.0 g 2.0 g 20.0 g 5.0 g 18.0 o g 1 000.0 mL 16.0 mL 20.0 mL 20.0 mL 20.0 mL 将前面七种成分溶解于400mL蒸锚水内作为基础滚z将琼脂加入于600mL蒸铺水内，如热溶解。如人甲接和乙液于基础液内，调蓝pH7.5士O.1。再加入捂示粥，并与琼脂按合并，待冷罕500C-550C 倾注平血。注:，在最i备过程中不宜过分加热，避免降保其选择哇。(甲液的配器:硫代硫般铀蒸语水乙液的配黯:去氧朋酸铀Andra

27、de捂呆jflJ: 酸性复红34.0 g 4.0 g 100.0 mL 10.0 g 100.0 mL 0.5 g 1 mol/L氮氧先锅溶液16.0 mL 蒸锚水100.0 mL 将复红洛解于蒸馆水中，如人氢氧化铀溶渎。数小时后如1 mL,., 2 A.6 术辑辑氨酸脱辍担盐(XLD)现脂A. 6.1 成分10 酵母膏L-赖氨酸木籍乳糖荒糟去氧胆酸铀拧撵雪交铁按硫代硫酸锅氯化锅3.0 g 5.0 g 3.75 g 7.5 g 7.5 g 2.5 g 0.8 g 6.8 g s喻。g提色不点，氢氧化俐溶液琼脂盼红蒸馆水A. 6. 2 制备15.0 g 0.08 g 1 000.0 mL GB/

28、T 4789.4-2008 将上述成分(盼红除外)溶解于1000 mL蒸馆水，加热溶解。调至pH7.4土o.2。再加入指示剂，待冷至500C，._，550C倾注平皿。注:本培养基不需要高压灭菌，在制备过程中不宜过分加热，避免降低其选择性，贮于室温暗处。本培养基宜于当天制备，第二天使用。A.7 三糖铁(TSI)琼脂A. 7.1 成分蛋白陈牛肉膏乳糖煎糖葡萄糖硫酸亚铁镀(含6个结晶水)盼红氯化铀硫代硫酸纳琼脂蒸馆水A. 7. 2 制备20.0 g 3.0 g 10.0 g 10.0 g 1. 0g 0.5 g 0.025 g或5.0g/L溶液5.0mL 5.0 g 0.5 g 12.0 g 1 0

29、00.0 mL 除酣红和琼脂外，将其他成分加入400mL蒸馆水中，搅拌均匀，静置约10min，加热煮沸至完全溶解，调至pH7.4士0.1。另将琼脂加入600mL蒸馆水中，搅拌均匀，静置约10min，加热煮沸至完全溶解。将上述两溶液混合均匀后，再加入盼红指示剂，混匀，分装试管，每管约2mL ,._, 4 mL，高压灭菌1210C 10 min或1150C15 min，灭菌后置成高层斜面，呈桶红色。A.8 蛋白陈水、蘸基质试剂A. 8.1 蛋白陈水蛋白陈(或膜蛋白陈)20.0 g 氯化铀5.0 g 蒸馆水1 000.0 mL 按上述成分配制，分装小试管，1210C高压灭菌15min。A.8.2 蘸

30、基质试剂A. 8. 2.1 柯凡克试剂:将5g对二甲氨基甲酶溶解于75mL戊醇中，然后缓慢加入浓盐酸25mL。A. 8.2.2 欧一波试剂:将1g对二甲氨基苯甲醒溶解于95mL 95%乙醇内。然后缓慢加入浓盐酸20 mL。A. 8. 3 试验方法挑取小量培养物接种，在360C士lOC培养1d ,._, 2 d，必要时可培养4d ,._, 5 d。加入柯凡克试剂约0.5 mL，轻摇试管，阳性者于试剂层呈深红色;或加入欧-波试剂约0.5mL，沿管壁流下，覆盖于培养液表面，阳性者于液面接触处呈玫瑰红色。注:蛋白陈中应含有丰富的色氯酸。自陈买来后，应先用已知菌种鉴定后方可使用。11 GB/古4789.

31、4-2008A.9 尿素璋黯(pH7.2)1. 0g 5.0 g 葡萄糖1. 0g 磷酸二氧梆2.0 g 乳糠1. 0g 0.4%黯红3.0 mL 20.0 g 蒸馆水100.0 mL A. 9. 2 制备将擦尿素和琼脂以外的成分配好，并校正pH，j口人琼脂，却热溶化后分装，1210C高压灭菌15mino 冷至500C,._, 550C ，加入经除薛过捷的尿素溶滚。尿素的最终浓度为2%，最终pH应为7.2土0.10分装内，放或斜阳备用。A.9.3 试验方法提取琼脂啃拌物接莉，在360C土lOC培养24h，现蔡结果。酶阳性者由于产碱而使培养基变为红色。A.10 髓化解茧CN)A. 10. 1 成

32、分蛋白菇、10.0 g 氧化结5.0 g 磷酸二氧锅蒸锯水0.225 g 5.64 g 1 000.0 mL 20.0 mL 以外的成分配好后分哉，1210C高压灭菌15mino放在冰箱内使其充分冷却。每100 mL培养基加入丘5%氟化伺溶液2.0mL(最后被度为1: 10 000)，分装于元菌试管内，每管约4 mL，立刻用元前橡皮塞塞絮，放在40C沫若内，至少可保存两个月。问时，将不如氧化仰的培养基作为对照培养基，分族试管备用。A. 10.3 试瞌方法将琼脂培养物接种于蛋白蓝7(内成为稀释菌液，挽联1环接种于氯化抨(KCN)。并另挑取1环接种于对照培养基。在360C土c2 d结嚣不生长为阴性

33、抨击)。1 d,._ 2 d，现察结果。如注:，使用时应小心，切勿沾染，。夏天分装培养基应在冰箱口不严，氧化梆避革开分解，产生氮氧酸气体迭出，以致那物浓度薛链，组试验时对每一环节都摆特别注意。A. 11 载氨酸脱梭酶试撞培养基A. 11. 1 成分蛋白陈12 5.0 g 即为阳性不持最j)，试验失败的要震，因面造或假拥性反应。酵母浸膏葡萄糖蒸馆水1.6%澳甲盼紫-乙醇溶液L-赖氨酸或DL-赖氨酸A. 11. 2 制备3.0 g 1. 0g 1 000.0 mL 1. 0 mL 0.5 g/ 100 mL或1.0 g/100 mL GB/T 4789.4-2008 除赖氨酸以外的成分加热溶解后，

34、分装每瓶100mL，分别加入赖氨酸。L-赖氨酸按0.5%加入，DL-赖氨酸按1%加入。再行校正pH至咧喃椰毡野力日赖氨酸。分装于元菌的小试管内，每管A.12 糖发酵管A. 12. 1 成分牛肉膏蛋白陈氯化铀磷酸氢二0.2%澳蒸馆水A. 12.2.2 其他各种糖类分别配好装小试管。注:煎糖不纯，加热后院监商解者.应采用过滤法除菌。A. 12.3 试验方法、三.;从琼脂斜面上挑取小队剖30 d。A.13 邻硝基酣-D半乳糖昔(ONPA. 13. 1 成分邻硝基盼-D半乳糖昔(ONPG)0.01 mol/L磷酸锅缓冲液(pH7.5)1%蛋白陈水(pH7.5)A. 13.2 制备60.0 mg 10.

35、0 mL 30.0 mL ，变为黄色。对照信应为灭菌15min。另将基内，以元菌操作分d。迟缓反应需观察14d .-._, 将ONPG溶于缓冲液内，加入蛋白陈水，以过滤法除菌，分装于元菌的小试管内，每管0.5mL，用橡皮塞塞紧。A. 13.3 试验方法自琼脂斜面上挑取培养物1满环接种于360C:!:lOC培养1h .-._, 3 h和24h观察结果。如果。-半乳GB/4789.4-2008 糖昔酶产生，则于1h ,._, 3 h变黄色，如元此酶则24h不变色。A.14 半固体琼脂A. 14. 1 成分牛肉膏蛋白豚氯化铀琼脂蒸馆水A. 14.2 制备0.3 g 1. 0g O. 5 g O. 3

36、5 ,._, 0. 4 g 100.0 mL 按以上成分配好，煮沸使溶解，并校正pH至7.4士O.1。分装小试管。1210C高压灭菌15min。直立凝固备用。注:供动力观察、菌种保存、H抗原位相变异试验等用。A.15 丙二酸铀培养基A. 15. 1 成分酵母浸膏硫酸钱磷酸氢二饵磷酸二氢饵氯化铀丙二酸铀0.2%澳黯香草酣蓝溶液蒸馆水A. 15.2 制备1. 0g 2.0 g O. 6 g 0.4 g 2.0 g 3.0 g 12.0 mL 1 000.0 mL 先将酵母浸膏和盐类溶解于水，校正pH至6.8:I:0.1后再加入指示剂，分装试管，1210C高压灭菌15 min。A. 15.3 试验方

37、法用新鲜的琼脂培养物接种，于36 oC :I: 1 oC培养48h，观察结果。阳性者由绿色变为蓝色。14 GB/T 4789.4-2008 B.l 常见沙门氏菌抗原常见沙门氏菌抗原见表B.l。菌名附录B(规范性附录)常见沙门氏菌抗原在飞三飞ll 甲型副伤寒沙门氏隘-fsJmlyphi A . , (1)-:h.1 2 、a乙型副伤寒沙悔!f土豆血斗二可ul 飞飞 /4叫2伯里沙门氏菌s.归ry圣保罗沙门氏菌四、|丘sai叫，1tH 川4.5|12M A 里定沙门氏菌、CI.:r. rt:ading 11,r lJ，4臼H211 l e,h 彻斯特沙门氏菌e , n 德尔卑沙门氏菌f , g 阿

38、贡纳沙门氏菌f ,g , s 埃森沙门氏菌g , m 加利福尼亚沙门氏菌g , m , t 金斯敦沙门氏菌s. kingsto lJ ,4,5J , 12 , 27J g , s , t 布达佩斯沙门氏菌S. budest lJ ,4, 12 ,27J g , t 鼠伤寒沙门氏菌S. typhimurium lJ ,4,5J ,12 拉古什沙门氏菌S. Lagos lJ ,4, 5J ,12 布雷登尼沙门氏菌S. bredeney lJ ,4, 12 ,27J l,v 基尔瓦沙门氏菌ES. kilE 4,12 l , w 海德尔堡沙门氏菌S. heidelberg lJ ,4 , 15J ,

39、12 r 印地安纳沙门氏菌S. indiana lJ ,4, 12 z 第2相1, 5J 1, 2 1,7 e , n , x , 1,2 1,5 e , n , x l, w Z6 1,2 1,2 1,5 e , n , x 1 ,2J 1,2J Z67 J 口，2J1,2 1,5 1, 7 e , n , x 1, 2 1,7 15 GB/T 4789.4-2008 表应1(搂)H抗原黯名E主名。抗原第1 才智第2相斯坦利维拉校门氏菌d缸anleyvill在Z4 ,Z23 口，2J伊图里沙门民黯Zl号1,5 C1 群句时奥斯陆沙门S.oslo 6,7,14J a 已，n，x爱丁保沙门氏菌S

40、. edinburg 6,7, b 1,5 布噩方丹沙门氏菌豆S. bloemfontein直6,7 n ,xJ :Z12 口S.partyphi C 6,7, C 1,5 霍霍乱抄门S. choleraesuis 6,7 C 1,5 猪伤寒艺jp门民茜S. typhisuis 6,7 C 1,5 罗米他沙门S.lomita 6,7 e,h 1,5 布伦登卢普沙门S. baendeu乡6,7, e,h 已，nZ15里森、沙门S. riss在n6,7,14J f ,g 的更抄门氏菌S. montevideo 6,7, g，胎，pJ，s口，2里吉尔沙门氏黯S. riggl 6,7 g 1 S. o

41、raneburg 6,7, 红1，t2 ,5 啥彝是杯沙、民菌S.ori比如erin6,7 1 1 ,5 卜一汤卡逊抄门民菌S. thompso究6,7, k 1,5 康科德沙门民离S. concord 6,7 l ,v 1 ,2 伊鲁/i思主专门民躏S. irumu 6,7 1, v 1,5 姆卡巴沙门员离S.m是amba6,7 l ,v 1,6 波恩t门民菌S犀bonn6,7 1,v e,n ,x 被茨坦沙门民菌S. potsdam 6,7, 1, v 巴，nZ15将f旦黯克抄门民商S.gda枕边6,7,14J 1,v Z6 维尔, v.，.-lJ叩r 1,2 主1,5 巴布亚沙门氏菌S.

42、全乡uan6,7 r e,nZ15 回累利祀!y门S. bareilly 6,7, y 1,5 哈特撞撞沙门民茜S.htford 6,7 y e,n ,x 主河岛、沙门S.mikawsima 6,7, 14J y e, nZ15 1 姆班达卡沙门民菌S. mbandaka 6,7, Zl白窍，口，Z15 昂纳西沙门S. tenessee 口，2，7JC2 群习志即抄门S. narashino 6.8 a e,n ,x 名古屋沙门民菌S.nagoya 6,8 b 1,5 16 GB/T 478立4-2008表黯.1 (续日菌名原名。原第1相2相加瓦后沙门S.gtuni 6,8 七已，口，x慕黑沙

43、门氏菌S. muenche 6,8 d 1,2 门民菌S. manhattan 6,8 d 1,5 组法特沙门氏黯S. newport 6,8,20J e ,h 1,2 科特布新珍门氏菌S. kottbus 6,8 e ,h 1,5 亲昂威主lr门氏菌S. tshiogwe 6,8 e ,h 仑，只，Z15 林登堡沙口民茵S. lindenburg 6,8 1 1,2 塔科拉油、沙门S. tkoradi 6,8 1 1,5 民菌S. bonriensis 6,8 1 e ,n , x 京j齐菲尔德沙门民菌S. litchfield 6,8 1, v 1,2 病牛校门Sbovismobificn

44、s 6,8,20J 主，1,5 查理抄门氏菌S. chailey 6,8 Z4 , Z23 仓，n，z!5C3 群己力之多沙门S.bardo 8 巴，h1,2 依麦克拴门民菌S. eme是8 ,20J g，恕，s肯塔基抄门氏菌S.是entucky8,20J 1 Z6 C4 群布伦务委卢普沙门民茜S. braenderup 6,7,14J 已，he , nZ15 14十变种var. 14 + 路撒冷抄门民商S.jeruslem 6,7, Z10 l ,w D 群她台沙门氏商S. sedai ,9,12 a 1,5 n S. typhi 9,12 , d 沙门S. tarshyne 9,12 d

45、1,6 伊斯特本投门S. eastbourne ,9,12 已，h1,5 以色列抄门氏商S. isr，el 9,12 巴，he ,nZ!5 肠炎沙门S. eteritidis ,9,12 g ,m 有科丹沙门氏菌S. blegdam 9,12 g ,m,q 艺jr门民菌五SlmonellII ,9,12 g ,msJ ,t 1,5 都柏林沙门氏菌S. dublin ,9,12 , ViJ 兹，p芙蓉抄n民薯S. se盯nban9,12 1 1,5 门S.乡anama,9,12 1,v 1,5 戈丁根沙门民噩S. goetting在n9,12 1, v e ,nZI5 爪哇安纳、沙门S. jav

46、i lJ ,9,12 L , ZZ8 1,5 17 GB/T 4789.4-2008 B. 1 (续菌名原名。抗原日第1相i第2相鸡m雏沙门民蕾S. gallinrum户ullorum,9,12 E1群奥言IL福科抄门瓦伊勒沙门民菌明斯特钞门民菌鸭艺jy门在黯纽兰沙门火鸡抄门民菌门民菌西翰普顿沙门民菌阿姆德尔克斯抄门氏蘑黯罗歇尔艺门氏黯l即加沙门民菌门民菌S.okefoko 3,10 C Z5 S.刀ejle3,1015J 3, ,34J e ,h 1,2 S. muenster e ,h 1. 5 S.an比切3, ,34J 仑，h1,6 S. newlnds 3,1015 3,1015J1

47、5 e ,h e，忌，xS. meleagridis e ,h 1,w S也regent3 ,10 f ,g ,sJ 1 ,6J S. westhmpto泛3 , ,34J g ,s ,t S. amounderness 3 ,10 1 ,5 S.我在飞rrochelle3 ,10 k S. nchanga 3,1015J 1,v S. sinstorf 3 ,10 1,v 伦敦校门吉韦主专门S.london 3 , 1,v 1 ,6 S. gi7.沱3,101515, 1, vdJ 1,7 门氏菌门民蕾乌盖利妙门民商S.uzizi 3 ,10 1, v 仑，nZ15S.uganda 3 ,

48、1, Z13 1 ,5 S. ughelli 3 ,10 主1 , 5 韦门氏菌S. weltevreden 3 主Z5 克勒霄威尔沙门Scleken飞主Jell3 ,10 z l ,w 列民菌S. lexizgton 3,1015J15 ,34J ZlO 1,5 E是群萨奥沙门卡拉巳为之沙门|山夫登堡沙门氏菌门民茜塔克松尼抄门武菌索恩保艺专门民商S. sao 1,3,19 e , h e , nZ15 S. calaba 1,3,19 e ,h l ,w S. s在zft在我，berg1,3,19 1,2 S. stratford 1,3,19 S. taksony 1,3,19 Z6 S. schoeneber豆1,3,19 z e ,nZ15 F 昌门氏菌S. chandns 11 d xJ 寸i唱门一抄一门沙一蝇一沙丁一赫一嘉柏一里一层阿一布一威S.berdeen 11 1,2 S. brijbhumi 11 1,5 S. veneziana 11 e，犯，x18 GB/4789.42号08表B.1 (结过拉原商名原名。原第1桔第2