GB T 21533-2008 蜂蜜中淀粉糖浆的测定.离子色谱法.pdf

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1、ICS 6718010X 31 圆雪,tl华人民共和国国家标准GBT 2 1 533-2008蜂蜜中淀粉糖浆的测定 离子色谱法Determination of starch srupy in honey-Ion chromatography20080409发布 2008-09-01实施宰姒I垂I民BI棵紫瓣訾糌瞥鐾发布中 家标准化管理委员会仪1”刖 嚣GBT 21533-2008本标准的附录A为资料性附录。本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出。本标准由中华全国供销合作总社归口。本标准起草单位：大连市产品质量监督检验所。本标准主要起草人：滔炜、王春燕、郑顺利、于利军、牟世芬、张明、

2、李鹏、董广彬、李海燕、姜俊。本标准为首次发布。I1范围蜂蜜中淀粉糖浆的测定 离子色谱法GBT 21533-2008本标准规定了蜂蜜中果葡糖浆、麦芽糖浆、异麦芽糖浆、饴糖浆等淀粉糖浆的测定方法。本标准适用于蜂蜜中淀粉糖浆的测定。本标准检出限：5淀粉糖浆。2原理蜂蜜中不含五糖(DP5)以上的寡糖，而各种淀粉糖浆中均含五糖(DP5)以上的寡糖，使用凝胶体积排阻法去除样品中果糖、葡萄糖，将寡糖富集后直接经阴离子交换色谱一电化学检测器检测，将五糖(DP5)以上寡糖的存在作为蜂蜜中淀粉糖浆的判定指标。3试剂和材料除非另有说明，所用试剂为分析纯，所用水为182 MElcm的高纯水。31 聚丙烯酰胺凝胶微球，

3、粒径45 pm90 pm，分级分离的相对分子质量范围1001 800，按使用说明书进行水化和脱气。注：可使用Bio-Gel(自P_2 Gel型聚丙烯酰胺凝胶或同等性能的凝胶材料。32凝胶层析柱：将聚丙烯酰胺凝胶(31)湿法装入15 crnXl5 cm空柱管中，装入的凝胶高度为10 cm，上端保持1 cm以上的水层，避免干涸。33层析柱架。34麦芽糖标准储备液：分别称取色谱纯麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖、麦芽七糖标准物质各100 mg，用水分别溶解定容至10 mL，配制成浓度为1 mgmL的储备液，于棕色瓶中4下储存。35麦芽糖标准混合使用液：吸取一定量的麦芽糖标准储备液(34

4、)，按表1用水配制麦芽糖标准混合使用液，在4下保存不超过30 d。该溶液用于样品色谱图中寡糖保留时间的定位。表1 麦芽糖标准混合使用液的配制标准物质 麦芽糖 麦芽三糖 麦芽四糖 麦芽五糖 麦芽六糖 麦芽七糖储备液吸取量mL 010 O20 O30 040 050 100定容体积mI。 10混合使用液浓度(*gmL) 10 20 30 40 50 10036 50氢氧化钠储备液：符合离子色谱使用纯度。37无水乙酸钠：符合离子色谱使用纯度。38 045 tam样品滤膜：水性。4仪器41离子色谱仪：配电化学检测器。42分析天平：感量01 mg。5试样制备51称取混匀的蜂蜜20 g作为试样，用水溶解后

5、定容至20 mL，用045 pm水性滤膜过滤，滤液1GBT 21533-2008备用。52将准备好的聚丙烯酰胺凝胶层析柱(32)中的水放尽，至下端无水珠滴下时，将样品滤液(51)20mL沿柱壁慢慢加入层析柱中，恰好流至凝胶上方无液时，加入30mL水冲洗柱壁，又至凝胶上方无液时，再加入50 mL水冲洗凝胶柱。注意每次在层析柱上方加液(或水)的时机，应是前次加液(或水)的层析柱体上端液体恰好流尽、下端恰好无液体滴出。弃去上述三次共100mL流出液后，于层析柱下方接上一支2 mL具塞塑料离心管，从柱上方加入2 mL水，收集这2 mL流出液至离心管中，盖紧离心管塞，摇匀后作为待测样品溶液，24 h之内

6、测定。层析柱中加入50 mL水冲洗，至全部流出后，该柱直接用于处理下一个样品。53将纯蜂蜜作为阴性对照品，蜂蜜中掺人5市售果葡糖浆、蜂蜜中掺人5市售麦芽糖浆的样品作为阳性对照品，按照51和52进行操作。6测定61离子色谱条件611 色谱柱：CarboPacw”PA200 3 mm250 mm(带CarboPacTMPA200 3 mm50 mill保护柱)或相当性能的分离柱，柱温30。612流动相：A：100水；B：200 mmolL氢氧化钠，200 mmolL乙酸钠。梯度洗脱条件见表2。表2梯度洗脱条件流动相时间rain 流速(mLmin) 曲 线A BO 04 90 10 线性5 04 9

7、0 10 线性20 04 70 30 线性30 04 70 30 线性40 04 90 10 线性60 04 90 10 线性613检测器：电化学检测器；Au工作电极；AgAgCl参比电极。检测池温度30。糖检测波形参见表3。表3糖检测波形时间s 电位V 积分 时间s 电位v 积分ooo +o10 o42 2ooo20 +o10 开始 o43 +o60o40 +o10 结束 o44 o10o41 2oo o50 一o10614进样量：20 pL。62样品测定依次将麦芽糖标准混合使用液(35)、纯蜂蜜阴性对照品(53)、含5果葡糖浆的蜂蜜(53)和含5麦芽糖浆的蜂蜜等阳性对照品(53)的寡糖收集

8、液注入离子色谱仪中，观察离子色谱图，当谱图与附录A中参考谱图基本吻合时，方可进行实测样品的测试。7结果判定分析比较纯蜂蜜阴性对照样品和含5糖浆的蜂蜜阳性对照样品的寡糖谱图，找到两者之间有明2GBT 21533-2008显差异的“指纹区”，并以此作为纯蜜中掺入淀粉糖浆的判定指标。任一掺入果葡糖浆的蜂蜜样品，在麦芽五糖至麦芽六糖之间和麦芽六糖至麦芽七糖之间有两个典型的“指纹峰”P1和P2，根据这两个峰的出现可判断蜂蜜中掺入果葡糖浆。任一掺人麦芽糖浆的蜂蜜样品，在麦芽五糖至麦芽六糖之间、麦芽六糖至麦芽七糖之间以及麦芽七糖之后，有三个典型的“指纹峰簇”P1、P2和P3，根据这三个峰簇的出现可判断蜂蜜中

9、掺人麦芽糖浆(包括高麦芽糖浆、异麦芽糖浆和饴糖糖浆)。除了描述出的基本特点外，不同工艺条件下生产的糖浆还可见到其他出峰位置有其他峰形特征的微量寡糖峰，但不影响“指纹区”的基本特征和判定。麦芽糖标准混合使用液、纯蜂蜜、含5果葡糖浆的蜂蜜、含5麦芽糖浆的蜂蜜的寡糖离子色谱图参见图A1、图A2、图A3、图A4。GBT 21533-2008附录A(资料性附录)蜂蜜中淀粉糖浆测定的相关色谱图图A1 麦芽糖标准混合使用液定位谱图糖26 17一磐到28 0 30 0 32 0 35412 7麦芽糖标；2槐花纯蜜；3枣花纯蜜；图A24荆条纯蜜；5油菜纯蜜；6椴树纯蜜。麦芽糖定位图与纯洋槐、枣花、椴树、荆条、油菜蜜的寡糖谱图GBT 21533-200812 7麦芽糖标； 4油菜纯蜜+果葡3#5；2椴树纯蜜+果葡1#5； 5洋槐纯蜜+果葡4#5；3-荆条纯蜜+果葡2#5； 6枣花纯蜜+果葡5#5。图A3麦芽糖定位图与含5果葡糖浆的洋槐、枣花、椴树、荆条、油菜蜜的寡糖谱图127麦芽糖标； 4油菜纯蜜+麦芽糖浆3#5；z椴树纯蜜+麦芽糖浆1#5； 5洋槐纯蜜+麦芽糖浆4#5；3荆条纯蜜+麦芽糖浆2#5； 6枣花纯蜜+麦芽糖浆5#5“。图A4 麦芽糖定位图与含5麦芽糖浆的洋槐、枣花、椴树、荆条、油菜蜜的寡糖谱图5