DB34 T 1390-2026 动物疫病监测样品采集技术规范.pdf

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1、 ICS 11.220 CCS B 41 34 安徽省地方标准 DB34/T 13902026 代替 DB34/T 1390-2011 动物疫病监测样品采集技术规范 Technical regulations for samples collection for animal disease surveillance2026-04-30 发布2026-05-30 实施安徽省市场监督管理局发 布 DB34/T 13902026 I 前言 本文件按照 GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件代替 DB34/T 13902011动物疫病监测样品（

2、血清、棉拭子）采集技术规范，与 DB34/T 13902011 相比，除结构调整和编辑性修改外，主要技术变化如下：a)更改了采样要求的有关内容（见第 4 章和 2011 版 4.1、5.1、6.1）；b)更改了器具和试剂、记录和防护材料的有关内容（见 5.1、5.2 和 2011 版 4.2、4.3）；c)删除了 5.2.3、5.3.2 的有关内容（见 2011 版第 5 章）；d)更改了血清样品采集的相关内容（见 6.1.1、6.1.3 和 2011 版 5.2）；e)增加了全血样品采集的相关内容（见 6.1.2）；f)增加了保存液分装、眼拭子、肛拭子采集的方法（见 6.2.1、6.2.2.

3、1、6.2.2.3）；g)更改了双拭子、鼻拭子、粪便样品采集的相关内容（见 6.2.2.2、6.2.2.4、6.2.2.5 和 2011版 5.3.1.1、5.3.1.2、5.3.1.3）；h)增加了组织样品、体液样品和环境样品采集的有关内容（见 6.3、6.4、6.5）；i)删除了样品保存和运输有关内容（见 2011 版 6.2、6.3、6.4）；j)增加了样品登记的有关要求（见第 7 章）；k)增加了处理废弃物的相关内容（见第 8 章）；l)更改了样品保存液的配制方法（见附录 A 和 2011 版附录 A）；m)更改了动物疫病监测采样单（见附录 B 和 2011 版附录 B）；n)删除了集

4、中监测采样汇总表（见 2011 年版附录 C）。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由安徽省动物疫病预防与控制中心提出。本文件由安徽省农业农村厅归口。本文件起草单位：安徽省动物疫病预防与控制中心、滁州市动物疫病预防与控制中心、泾县畜牧兽医水产服务中心（泾县动物卫生监督所）、青阳县畜牧兽医发展中心。本文件主要起草人：刘华、杨庆琳、王维、管松青、黄晓慧、季晶晶、陈春苗、丁小伍、吴育发、柴震震、刘畅、史茹楠、段倩倩、范亚楠、陈曦、王倩、何雯雯、沈艳、周迎春、王军、王立、伍唯、童维武、何长生、朱良强。本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为：2011 年首次

5、发布为 DB34/T 13902011，2026 年第一次修订。DB34/T 13902026 1 动物疫病监测样品采集技术规范 1 范围 本文件规定了动物疫病监测样品的采样要求、采样前准备、样品采集、样品登记与处理废弃物等技术要求。本文件适用于动物疫病监测样品的采集技术操作。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 45101 动物炭疽诊断技术 NY/T 541 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范 NY/T 767 高致

6、病性禽流感 消毒技术规范 NY/T 768 高致病性禽流感 人员防护技术规范 NY/T 4139 兽医流行病学调查与监测抽样技术 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。4 采样要求 样品数量要求和抽样方法按照 NY/T 4139 的规定执行。采样人员应具备一定专业技术知识，熟悉采样器具的使用，掌握正确的釆样方法。采样时按 NY/T 767 规定的要求做好人员消毒工作，按 NY/T 768 规定的要求做好人员防护工作。怀疑炭疽时，按照 GB/T 45101 的规定采血进行血液抹片镜检，排除炭疽后方可解剖采样。同种动物采样，应按照养殖、屠宰、交易、无害化环节顺序进行，其中，养殖环节应先到

7、养殖场，后到散养户。采样过程应注意无菌操作，同时要做好包括保定器等在内的工具消毒，避免交叉污染。不同类型样品采集后应分开包装。样品置于保温容器中运输，保温容器必须密封、清洁、无异味，防止渗漏和交叉污染。5 采样前准备 采样器材 5.1.1 血液采集器材 DB34/T 13902026 2 采样箱、不同规格一次性兽用采血盛血器或真空采血管、抗凝真空采血管、镊子、75酒精棉球、碘伏棉球、无菌干棉球、不同规格塑料离心管（如 1.5、2、5 mL EP管等）、带盖塑料试管（10、15、50 mL等）、试管架、针头盒等。5.1.2 拭子采集器材 无菌植绒拭子或棉拭子、剪刀、预装保存液的塑料离心管及适当规

8、格的塑料离心管盒等。5.1.3 组织样品采集器材 手术刀或解剖刀、组织剪、组织镊、酒精灯、75酒精棉、无齿镊、样品容器（适当规格的塑料离心管、无菌自封袋、采样杯等）、扁桃体采样器、食道咽部分泌物（OP液）采样杯等。5.1.4 其他液体样品采集器材 适当规格的一次性无菌注射器、适当规格的塑料离心管及离心管盒，10、15 或 50 mL 带盖塑料试管及试管架等。5.1.5 其他用品 丁腈手套或乳胶手套、一次性防护服、防护口罩、防护帽、鞋套或胶靴、护目镜或面罩等防护用品；不干胶标签、签字笔、防水记号笔、采样单、封条、记录本、自封袋等；冷藏容器（如保温箱、保温桶、泡沫盒等）、冰袋；保定工具等。样品保存

9、液 根据所采样品种类和要求，准备不同类型并适量分装的保存液，常用的有：0.01 molL-1 pH 7.27.4 等渗磷酸盐缓冲液（PBS）（配制方法符合附录A 的规定）、拭子用抗生素PBS（配制方法符合附录A 的规定）、pH 7.6 30甘油磷酸盐缓冲液（配制方法符合附录A 的规定）和生理盐水。6 样品采集 血液样品 6.1.1 采血方法 采样前对采样部位进行消毒。采集家禽血样时，使用 5 mL 一次性兽用采血盛血器，心脏或翅静脉采血法，每只禽采血 1.52.5 mL；采集猪血样时，使用 10 mL 一次性兽用采血盛血器，仔猪或中等大小的猪可用前腔静脉采血法，成年猪可用耳静脉采血法，每头猪采

10、血 35 mL；采集牛血样时，使用12号针头穿刺颈静脉、尾静脉或乳静脉，连接一次性兽用采血盛血器或真空采血管，每头采血 35 mL；采集羊血样时，使用 10 mL 一次性兽用采血盛血器，颈静脉采血法，每头采血 35 mL。各类动物血样采集方法按照 NY/T 541 的规定进行，并在采样器具上清晰记录样品编号。6.1.2 全血样品 根据检测需要，按照 NY/T 541 的规定选择不同种类的抗凝剂。抽血完毕后，应立即注入抗凝真空采血管或事先加有抗凝剂的塑料离心管中，充分混合。6.1.3 血清样品 DB34/T 13902026 3 6.1.3.1 抽血时，不宜将一次性采血盛血器抽满；抽血完毕后，将

11、内芯活塞抽至最大量程，以便析出血清，避免剧烈震荡，防止溶血。6.1.3.2 用于血清分离的血液样品采集完毕后，不宜冻结，宜在室温下（1525）倾斜 30静置24 h，或在恒温培养箱 2037环境下静置 1 h，也可 8000 rpm 离心 4 min 或 10003000 rpm离心 1015 min，取上层血清移入适当规格的塑料离心管内。6.1.3.3 每份血清不少于 1 mL，无溶血，4保存待用或-20左右冻结保存。拭子与粪便样品 6.2.1 保存液分装 眼拭子、鼻拭子保存液可以选用 0.01 molL-1 pH 7.27.4 等渗PBS液、含有常规浓度抗生素的PBS液或 pH 7.6 的

12、 30甘油磷酸盐缓冲液；粪便、肛拭子、咽喉泄殖腔双拭子选用含 5 倍浓度抗生素的PBS液或 pH 7.6 的 30甘油磷酸盐缓冲液。采样前将保存液分装至适当规格的塑料离心管中，每管加 1/2 体积。现分现用，或冷冻保存。6.2.2 采集方法 6.2.2.1 眼拭子 用无菌植绒拭子或棉拭子擦拭眼结膜表面或眼角，沾取组织或分泌物后，将样品端置于适当规格的预加保存液的塑料离心管中，折断或剪下，盖上管盖，用防水记号笔作好标记。6.2.2.2 畜类鼻拭子 将无菌植绒拭子或长柄棉拭子一端插入鼻腔约 23 cm 旋转，沾取分泌液，将样品端置于适当规格的预加保存液的塑料离心管中，折断或剪下，盖上管盖，用防水记

13、号笔作好标记。6.2.2.3 肛拭子 按照 NY/T 541 的规定执行。6.2.2.4 禽类咽喉泄殖腔双拭子 使用无菌植绒拭子或棉拭子，一支插入喉头口及上颚裂处，旋转 35 次刮取咽喉分泌液，另一支插入泄殖腔约 1.52 cm，旋转 23 圈后沾取粪便。将两支拭子样品端插入同一个适当规格的预加保存液的塑料离心管中，折断或剪下，盖上管盖，用防水记号笔做好标记。6.2.2.5 粪便拭子 用无菌植绒拭子或棉拭子沾取新鲜粪便样品 12 g，置于适当规格的预加保存液的塑料离心管中，折断或剪下，盖上管盖，用防水记号笔做好标记。组织样品 6.3.1 病变皮肤组织 可选取新鲜的结痂或水泡皮，使用清水对采集部

14、位进行冲洗，剪取 35 g 痂皮或水泡皮，置于适当规格的预加 30甘油磷酸盐缓冲液的塑料离心管中。6.3.2 家畜淋巴结 DB34/T 13902026 4 家畜屠宰线上采集颌下淋巴结；无害化处理场所内的死亡动物，在排除炭疽后，采集颌下淋巴结或腹股沟淋巴结。每份淋巴结采集前，应消毒刀具，防止交叉污染。宜剥离包裹淋巴结的脂肪层，置于无菌自封袋中，一样一袋。6.3.3 猪扁桃体 先用开口器打开猪的口腔，将扁桃体采样枪的采样钩紧贴扁桃体，快速扣动扳机取出组织，置于适当规格的预加 30甘油磷酸盐缓冲液的塑料离心管中。6.3.4 脑组织 牛羊脑组织、犬脑组织采集方法按照 NY/T 541 的规定执行，样

15、品置于专用采样杯中。6.3.5 其他组织 按照 NY/T 541 的规定执行。体液样品 6.4.1 水泡液 选取未破裂的水泡，用无菌注射器或其他器具吸取不少于 1 mL 的水泡液，注入适当规格的预加30甘油磷酸盐缓冲液的塑料离心管中。6.4.2 OP 液 按照 NY/T 541 的规定执行。6.4.3 乳汁 先用消毒药水洗净乳房，最初所挤的 34 把乳汁弃去，然后再采集 10 mL 左右乳汁于 15 mL 带盖塑料试管中。进行血清学检验的乳汁不宜冻结、加热或强烈震动。6.4.4 其他体液样品 按照 NY/T 541 的规定执行。环境样品 6.5.1 环境拭子 6.5.1.1 采集位置 养殖场环

16、境拭子样品通常采集生产区地面、墙面、下水漏缝板、通风口等；屠宰场通常采集待宰圈和生产区的下水漏缝板、血槽、劈半工具等处；交易市场通常采集肉案、下水漏缝板、家禽笼具、废弃物堆积点等；无害化处理场通常采集生产区和冷库的地面、墙面等。此外，运输动物的车辆通常采集脚踏板、轮胎夹缝等位置。6.5.1.2 采集方法 用生理盐水浸湿无菌棉拭子或植绒拭子后，在环境（物品）表面按“Z”字形轨迹画线，边画边旋转拭子接触面，连续数次，画线区域尽可能覆盖环境（物品）界面，采集完成后，将样品端置于适当规DB34/T 13902026 5 格的预加保存液（含抗生素PBS，沾有粪便的，抗生素浓度提高 5 倍）的塑料离心管中

17、剪下或折断，盖上管盖，用防水记号笔作好标记。6.5.2 环境污水 从饲槽、排水沟、低洼积水坑等处采集 2040 mL 污水，置于 50 mL 带盖塑料试管中。7 样品登记 编号 编号时，不同动物种类以英文字母区分，猪A、羊B、牛C、鸡D、鸭E、鹅F、犬G、马H、驴I、其他J。同一类型的多份样品，每份样品容器外按“A01,A02,A03、B01,B02,B03、C01,C02,C03”格式进行标记，样品的编号应具有唯一性。包装 同一采样点的同一类型样品要置于同一个自封塑料袋中，用防水记号笔或不干胶标签在自封袋外标记采样点名称（如：某市某县某乡某村散养户、某市某县某养殖场/交易市场/屠宰场/无害

18、化处理厂、某市某县某野禽栖息地、某市某县某宠物医院等）、样品类型、份数、编号范围等信息。填写采样单 采样单（参见附录B）要逐项填写。填写之前须仔细阅读表格及下面的相关注解和说明。应完整、清楚、工整填写，不宜使用省略或简易符号替代，不宜随意修改采样单。采样单填完后，采样人员和被采样单位代表需共同核对信息无误后签字确认。送样时，应将采样单随样品一起送到实验室。8 处理废弃物 解剖后的动物尸体、无法达到检测要求的样品等，应按照农业农村部的有关规定做无害化处理，并详细记录。采样后的器材，一次性使用的，应进行无害化处理；污染的可重复使用的，应清洗消毒后带回实验室进一步处理。DB34/T 13902026

19、 6 附录A （规范性）样品保存液的配制 A.1 0.01 molL-1 pH 7.27.4 等渗磷酸盐缓冲液（PBS）氯化钠（NaCl）8.00 g 磷酸二氢钾（KH2PO4）0.27 g 磷酸氢二钠（Na2HPO4）/十二水磷酸氢二钠（Na2HPO412H2O）1.42 g/3.58 g 氯化钾（KCl）0.20 g 调配方法：将上列试剂按次序加入定量容器中，加 800 mL 蒸馏水溶解后，用HCl溶液或NaOH溶液校正 pH 至 7.27.4，最后定容到 1 L。高温高压灭菌后，室温保存。A.2 拭子用抗生素 PBS（病毒保存液）A.2.1 取上述PBS液，按要求加入下列抗生素：青霉素（

20、2000 IUmL-1）、链霉素（2 mgmL-1）、丁胺卡那霉素（1000 IUmL-1）、制霉菌素（1000 IUmL-1）。A.2.2 粪便、肛拭子和咽喉泄殖腔双拭子所用的PBS，抗生素浓度提高 5 倍，即青霉素 10000 IUmL-1、链霉素 10 mgmL-1、丁胺卡那霉素 5000 IUmL-1、制霉菌素 5000 IUmL-1。A.2.3 加入抗生素后应调 pH 至 7.27.4。A.3 pH 7.6 30甘油磷酸盐缓冲液 甘油 30.00 mL 氯化钠（NaCl）4.20 g 磷酸二氢钾（KH2PO4）1.00 g 磷酸氢二钾（K2HPO4)3.10 g 0.02酚红 1.5

21、0 mL 蒸馏水 加至 100 mL 调配方法：加热溶化，校正pH为 7.6，100 kPa，15 min 灭菌，4保存备用。DB34/T 13902026 7 附录B （资料性）动物疫病监测采样单 表B.1 动物疫病监测采样单 采样点名称 地址 县 乡（镇）村 经度 纬度 动物 用途 蛋用 种用 肉用 兼用 奶用 宠物 其他 动物 代次 祖代及以上 父母代 商品代 其 他 存 栏 量/当 日屠宰、运输、交易、处理或接诊量（单位：只/头/羽/匹）屠宰场/市场/无害化处理厂动物来源 本县 外地：省 县 场点类型 规模养殖场 自然村散户 屠宰场 农贸市场 野禽栖息地 活畜禽交易市场 宠物医院 无害

22、化处理厂/点 其他 动物种类 样品名称*日龄（d）数量（份）样品起止编号*注：*1.血液（全血/抗凝血、血清），2.眼拭子，3.鼻拭子，4.肛拭子，5.咽喉-泄殖腔拭子，6.粪便拭子，7.组织（病变皮肤组织、淋巴结、扁桃体、脑、其他组织 ），8.水泡液，9.O-P液，10.乳汁，11.环境样品，12.环境污水，13.其他*A猪，B羊，C牛，D鸡，E鸭，F鹅，G犬，H马，I驴，J其他 。编号时加字母以区分，如A01-A10。被 采样 动物 免疫 状况 免疫病种 疫苗名称 生产厂家 免疫次数 末次免疫时间 采样人员（签名）联系电话：采样单位（盖章）年 月 日 被采样单位代表（签名）联系电话：被采样单位（盖章）年 月 日 说明：此单一式三份，第一联采样单位保存，第二联交检测单位随样品封存，第三联交被采样单位保存。