DB51 T 2852-2021 普通级实验用猫 微生物学监测.pdf

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1、 ICS 65.020.30 CCS B 44 DB51 四川省地方标准 DB51/T 2852 2021 普通级实 验用猫 微 生物学监 测 Conventional experimental cat Pathogenic surveillance 2021 - 11 - 08 发布 2022 - 01 - 01 实施 四川省市场监督管理局 发布 DB51/T 2852 2021 I 目 次 . II 1 . 1 2 . 1 3 . 1 4 . 1 5 . 2 6 . 3 7 . 4 8 . 5 9 . 5 A PCR . 6 B I PCR . 8 C RT-PCR . 10 D RT-P

2、CR . 12 E RT-PCR . 14 F PCR . 16 G PCR . 17 H RT-PCR . 18 DB51/T 2852 2021 II 前 言 GB/T 1.1 2020 1 DB51/T 2852 2021 1 普 通级实 验用猫 微 生物学 监测 1 范围 2 规范性 引用 文件 GB/T 14926.50 NY/T 541 NY/T 564 3 术语和 定义 实 验用 猫 experimental cat 普 通级 实验 用猫 conventional experimental cat 4 检测要 求 临床观 察 DB51/T 2852 2021 2 检测项 目 1

3、表1 普通级 实验 用猫 微生 物检 测 项目 I 注1 ： 注2 ： 注3 ： 5 检测程 序 1 DB51/T 2852 2021 3 a 2 图1 检测程 序 6 检测方 法 2 表2 普通级 实验 用猫 微生 物检 测方法 GB/T 14926.50 A I GB/T 14926.50 B DB51/T 2852 2021 4 表2 普通 级实 验用 猫微 生 物检测 方法 GB/T 14926.50 C GB/T 14926.50 D E F G H NY/T 564 注： I 70% 7 检测规 则 检测频 率 6 1 采样 7.2.1 方式及 数量 7.2.1.1 6 7.2.1

4、.2 2 表3 普通级 实验 用猫 采样 数量 100 a 10 100 500 20 500 30 a 10 7.2.2 方法 7.2.2.1 7.2.2.2 NY/T 541 7.2.3 送检要 求 DB51/T 2852 2021 5 8 结果判 定 抗体检 查 100% 70% 抗原和 核酸 检查 9 检测结 论 DB51/T 2852 2021 6 A A 附录A （规范 性） 猫泛白 细胞 减少 症病 毒 PCR 检测 方法 A.1 待测样 本DNA 的 提取 与保 存 DNA DNA -70 A.2 PCR 反 应引 物 vp2 - CTGCTACTCAGCCACCAACT -

5、TGGTGGTAAGCCCAATGCTC A.3 对照设 立 A.4 PCR 反 应体 系及 条件 A.4.1 PCR反 应体 系 20L 10 PCR buffer Mg 2+ 2L dNTP 2.5mM 1.6L 10M 1L Taq 5U/L 0.5L DNA 2L A.4.2 PCR反 应条 件 94 5min 94 30s 55 30s 72 1min 35 72 10min A.5 PCR 产物 A.5.1 产物大 小 401bp A.5.2 产物参 考序 列 CGTCTACTCAGCCACCAACTAAAGTTTATAATAATGATTTAACTGCATCATTGATGGTTGC

6、ATTAGATAGTAATAATACTATGCC ATTTACTCCAGCAGCTATGAGATCTGAGACATTGGGTTTTTATCCATGGAAACCAACCATACCAACTCCATGGAGATATTATTTTCAAT GGGATAGAACATTAATACCATCTCATACTGGAACTAGTGGCACACCAACAAATGTATATCATGGTACAGATCCAGATGATGTTCAATTT TATACTATTGAAAATTCTGTACCAGTACACTTACTAAGAACAGGTGATGAATTTGCTACAGGAACATTTTTTTTTGATTGTAAACCATG TAGAC

7、TAACACATACATGGCAAACAAATAGAGCATTGGGCTTACCACCA DB51/T 2852 2021 7 A.6 结果判 定 401bp 401bp 401bp DB51/T 2852 2021 8 B B 附录B （规范 性） 猫疱疹 病 毒I 型PCR 检测 方法 B.1 待测样 本DNA 的 提取 与保 存 DNA DNA -70 B.2 PCR 反 应引 物 tk 5 -3 GCGGATTACACCACCACTCT 5 -3 AAAGGCTAAGGGCGTGTACC B.3 对照设 立 B.4 PCR 反 应体 系及 条件 B.4.1 PCR反 应体 系 20L

8、10 PCR buffer Mg 2+ 2L dNTP 2.5mM 1.6L 10M 1L Taq 5U/L 0.5L DNA 2L B.4.2 PCR反应 条件 94 5min 94 30s 54 30s 72 1min 35 72 5min B.5 PCR 产物 B.5.1 产物大 小 409bp B.5.2 产物参 考序 列 GCGGATTACACCACCACTCTCGATTGGATTGTATTCGGCGAGCTTGGTAATATTAGCAGCCAGAACAGAAATGTTACTCGTAAGC ATCTGCGGGGGTAAACTAGTAACTCCCAAAATTCTCAGACCGCGCTG

9、CGCGATAAATGCCAATATGGGTATTAGAGTGAGCTTCTCCCC CCCTGGTGGTAGAATCTTGGTTATTAAACCCACAGAATCTGTTAATTGTTTCAAACCCTCACGACGTTGAATGTCTTTACTAGTTGTAT CATATTTTTTGAAAAACGACACGTTTTCAGCTCAATTAGAAAACATATACCACCCCCTTCTCCCTCAAATTGTATAGTACATACACAAT CAGGTCGGCGACGACCCAAGTTAACCTCACATGCTAGGTACACGCCCTTAGCCTTT DB51/T 2852 2021 9 B

10、.6 结果判 定 409bp 409bp I 409bp I DB51/T 2852 2021 10 C C 附录C （规范 性） 猫杯状 病 毒RT-PCR 检测 方 法 C.1 病毒RNA 的 提取 RNA RNA -70 C.2 PCR 反 应引 物 5 -3 AACCTGCGCTAACGTGCTT 5 -3 CAGTGACAATACACCCAGAA C.3 对照设 立 C.4 反转录 RNA cDNA C.5 PCR 反 应条 件 95 5min 95 30s 55 40s 72 1min 30 72 2min C.6 PCR 产物 C.6.1 产物大 小 926bp C.6.2 产物

11、参 考序 列 AACCTGCGCTAACGTGCTTAAATACTATGATTGGGATCCCCACATCAGATTGGTTATCAACCCCAATAAATTTCTTCCTATTGGT TTCTGTGATAATCCTCTAATGTGTTGCTACCCAGAATTGCTCCCAGAATTCGGAACTGTGTGGGATTGTGATCAATCCCCACTGCAAAT CTACCTGGAGTCAATCCTTGGTGATGATGAATGGGCTTCAACTTACGATGCCATTGACCCTGTTGTTCCACCAATGCACTGGGACGATG CAGGCAAGATCTTCCAACCTCACCCTG

12、GAGTTCTGATGCATTTTCTAATAAATGAAGTTGCAAAGGGCTGGGATCCAAGTTTGCCATCC TTCCGTTTGGAAGCAGATGACGGATCCATAACCACACCTGAACAGGGTACTGCGGTTGGTGGCGTCATTGCCCAACCCAGCGCTCAAAT GTCGGCAGCTGCAGACATGGCATCTGGTAAGAGTGTTGACTCTGAGTGGGAGGAATTCTTTTCCTTCCATACTAGTGTCAACTGGAGCA CAACTGAAACACAAGGAAAGATTCTGTTCAAACAGTCACTGGGACCCCTTCTCAACC

13、CTTACCTTGAACACTTATCTAAACTCTATGTT GCTTGGTCAGGCTCTATAGATGTTAGGTTTTCTATCTCTGGTTCTGGTGTCTTTGGGGGAAAACTAGCCGCAATAGTTGTCCCACCTGG TGTCGATCCTGTCCAAAGCACTTCCATGCTACAATACCCTCATGTGTTGTTTGATGCTCGACAGGTTGAACCAGTGATCTTTTCTCTCC CTGATCTGAGGAATTCACTATATCACCTCATATCTGATACTGATACTACATCTCTGGTAATAATGGTTTACAATGATCTTATTAACC

14、CC TATGCAAATGAAGCTAACTCTTCTGGGTGTATTGTCACTG DB51/T 2852 2021 11 C.7 结果判 定 926bp 926bp 926bp DB51/T 2852 2021 12 D D 附录D （规范 性） 猫狂犬 病病 毒巢 式 RT-PCR 检测方 法 D.1 病毒RNA 的 提取 RNA RNA -70 D.2 PCR 反 应引 物 D.2.1 第一次 反应 引物 5 -3 GTGTAACACCTCTACAATGG 5 -3 ACAGTCTCYTCNGCCATCT D.2.2 第二次 反应 引物 5 -3 CAAGATGTGYGCYAAYTG

15、GAG 5 -3 AGCCCTGGTTCGAACATTCT Y=C/T N=A/C/G/T D.3 对照设 立 D.4 反转录 RNA cDNA D.5 PCR 反 应条 件 D.5.1 第一次PCR 反应 条件 cDNA PCR 95 5min 95 30s 56 30s 72 30s 30 72 2min D.5.2 第二次PCR 反应 的条 件 PCR PCR 95 5min 95 30s 56 30s 72 30s 30 72 2min D.6 PCR 产物 D.6.1 产物大 小 239bp DB51/T 2852 2021 13 D.6.2 产物参 考序 列 CAAGATGTGCG

16、CTAACTGGAGTACCATCCCGAACTTTAGATTCTTAGCTGGAACCTACGACATGTTTTTCTCTCGGATTGAGCAT TTGTACTCAGCTATAAGAGTGGGCACAGTTGTCACTGCTTATGAAGACTGCTCAGGGTTGGTATCGTTCACAGGGTTCATAAAGCAAAT AAATCTCACCGCGAGAGAGGCAATCCTATATTTCTTCCACAAGAACTTTGAGGAAGAAATAAGAA D.7 结果判 定 239bp 239bp 239bp DB51/T 2852 2021 14 附录E （规范 性） 猫白血 病病 毒巢

17、式 RT-PCR 检测方 法 E.1 病毒RNA 的 提取 RNA RNA -70 E.2 PCR 反 应引 物 E.2.1 第一次 反应 引物 5 -3 ACAGCAGAAGTTTCAAGGCC 5 -3 GACCAGTGATCAAGGGTGAG E.2.2 第二次 反应 引物 5 -3 GCTCCCCAGTTGACCAGAGT 5 -3 GCTTCGGTACCAAACCGAAA E.3 对照设 立 E.4 反转录 RNA cDNA E.5 PCR 反 应条 件 E.5.1 第一次 反应 条件 cDNA PCR 95 5min 95 45s 58 30s 72 1min 35 72 7min

18、 E.5.2 第二次 反应 条件 PCR PCR 95 5min 95 45s 58 30s 72 1min 35 72 7min E.6 PCR 产物 E.6.1 产物大 小 601bp E.6.2 产物参 考序 列 DB51/T 2852 2021 15 GCTCCCCAGTTGACCAGAGTTCGACCTTCCGCCTCATTTAAACTAACCAATCCCCATGCCTCTCGCTTCTGTACGCGCGCTTTCT GCTATAAAACGAGCCATCAGCCCCCAACGGGCGCGCAAGTCTTTGCTGAGACTTGACCGCCCCGGGTACCCGTGTACGAATAAA

19、CCTCT TGCCGATTGCATCTGACTCGTGGTCTCGGTGTTCCGTGGGCGCGGGGCCTCATCGCCGAGGAAGACCCAGTTCGGGGGTCTTTCATTTG GGGGCTCGTCCGGGATAGAGACCCCCAACCCCCGGGACCACCGACCCACCATCAGGAGGTAAGCTGGCCGGCGACCATATCTGTTGTCC TTGTATAAGTGTCTCTGTCAATTGATCTGATTTTGGCGGTGGGATCGAAGGAGCTGACGAGCTCGTACTTCGCCCCCGCAACCCTGGAA GACGTTCCACGGGTGTCTGATGTC

20、TGGAGCCTCTAGTGGGACAGCCATTGGGGCTCATCTGTTTGGGGTCTCACCTGAATACAGGGTGT TGATCGGAGACGAGGGAGCCGGACCCTCAAAGTCTCTTTCTGAGGTTTCATTTTCGGTTTGGTACCGAAGC E.7 结果判 定 601bp 601bp 601bp DB51/T 2852 2021 16 E E 附录F （规范 性） 沙门氏 菌荧 光定量 PCR 检 测方法 F.1 样本DNA 的 提取 与保 存 DNA DNA DNA -70 F.2 荧光PCR 引 物及 探针 5 -3 :GCCAAGCCTAAAACCAGT

21、AAAGG 5 -3 :GTCCTAGCGACGTTCCTTCTTTT 5 -3 :FAM-CAGCCGCTCAGTATTG-NFQ F.3 对照设 立 F.4 荧光PCR 反 应体 系及 条件 F.4.1 荧光PCR 反 应体 系 20L 2 Mix buffer 10L 1L DNA 2L F.4.2 荧光PCR 反 应条 件 95 10min 95 15s 60 1min 40 F.5 结果判 定 Ct 35 Ct Ct 35 Ct 35 DB51/T 2852 2021 17 F F 附录G （规范 性） 皮肤病 原真 菌多 重 PCR 检 测方法 G.1 样本DNA 的 提取 与保

22、存 DNA DNA DNA -70 G.2 PCR 反 应引 物 表 G.1 PCR 反 应引 物 - bp TAGGGCCAAACGTCCGTCA ITS1 ITS2 146 GGTCCAGCGTTTAGCCACTAA GACAATCAACTCCCTGGAT ITS1 ITS2 390 GTCCTAGAGGCGTTGGTT TGCGGAAGGATCATTAACG ITS1 ITS2 290 CTCGCTCAGACGGTATGT G.3 对照设 立 G.4 PCR 反 应体 系及 条件 G.4.1 PCR反 应体 系 20L 10 PCR buffer Mg2+ 2L dNTP 2.5mM 1

23、.6L 10M 0.5L Taq 5U/L 0.5L DNA1L G.4.2 PCR反 应条 件 94 3min 94 30s 60 30s 72 45s 35 72 7min G.5 PCR 产物 146bp 290bp 390bp G.6 结果判 定 146bp 290bp 390bp DB51/T 2852 2021 18 G G 附录H （规范 性） 猫传染 性腹 膜炎 病 毒 RT-PCR 检 测方 法 H.1 病毒RNA 的 提取 RNA RNA -70 H.2 PCR 反 应引 物 5 -3 GTGATGCTATCATGACTAG 5 -3 CACCATTACAACCTTCTAA

24、 H.3 对照设 立 H.4 反转录 RNA cDNA H.5 PCR 反 应条 件 cDNA PCR 95 5min 95 30s 48 35s 72 45s 30 72 5min H.6 PCR 产物 H.6.1 产物大 小 417bp H.6.2 产物参 考序 列 GTGATGCTATCATGACTAGGTGTCTTGCTATATATGATTGTTTTGTCAAACGTGTAGATTGGTCCATTGTGTACCCTTTTATTGA AAATGAAGAGAAGATCAATAAAGCTGGTCGCATTGTACAATCACATGTCATGAGAGCTGCTCTTAAAGTTTTCAACCCTGCTGCAATTC ACGATGTTGGTAATCCAAAAGGTATTCGTTGTGCTGCGACACCCATACCGTGGTTTTGTTATGACCGTGATCCTATTAATAACAATGTT AGATGTCTGGAGTATGATTACATGGTACATGGACAAATGAATGGTTTAATGTTGTTTTGGAATTGTAACGTAGACATGTACCCAGAGTT CTCAATTGTCTGTAGATTTGATACTCGGACCCGCTCAAAATTGTCATTAGAAGGTTGTAATGGTG H.7 结果判 定 417bp 417bp 417bp