DB22 T 3316-2021 滞育松毛虫赤眼蜂生产技术规程.pdf

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1、 ICS 65.020 CCS B 15 DB22 吉林省地方标准 DB 22/T 33162021 滞育松毛虫赤眼蜂生产技术规程 Code of practice for production of diapause Trichogramma dendrolimi 2021 - 11 - 26发布 2021 - 12 - 15实施 吉林省市场监督管理厅 发布 DB22/T 33162021 I 前 言 本文件按照 GB/T 1.12020 标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则的 规定起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件

2、由吉林省农业农村厅提出并归口。 本文件起草单位：吉林农业大学。 本文件主要起草人：张俊杰、杜文梅、阮长春、张雪。 DB22/T 33162021 1 滞育松毛虫赤眼蜂生产技术规程 1 范围 本文件确立了滞育松毛虫赤眼蜂（Trichogramma dendrolimi Ishii）生产的程序，规定了前期准 备、赤眼蜂繁育、精选与储存等阶段的操作指示，描述了记录档案等追溯方法。 本文件适用于利用柞蚕卵繁育的滞育松毛虫赤眼蜂工厂化生产。 2 规范性引用文件 本文件没有规范性引用文件。 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 滞育诱导 diapause induction 利用持续低温诱

3、导松毛虫赤眼蜂稳定进入滞育状态的一个过程。 3.2 滞育持续期 diapause maintenance 赤眼蜂进入稳定滞育到解除滞育前的阶段。 3.3 滞育解除 diapause termination 通过条件控制，使赤眼蜂结束滞育期，继续发育至羽化出蜂的过程。 4 滞育赤眼蜂生产程序 滞育松毛虫赤眼蜂生产分为 3 个阶段。程序流程图如图 1 所示： 图1 滞育松毛虫赤眼蜂工厂化生产流程 5 生产前准备 DB22/T 33162021 2 5.1 厂房及规模 按照 150 亿头滞育松毛虫赤眼蜂生产规模应包括： a) 蜂种繁育室不低于 20 m 2 ； b) 暖茧车间不低于 300 m 2

4、； c) 采卵室不低于 50 m 2 ； d) 洗卵室不低于 20 m 2 ； e) 消毒及晾干室不低于 25 m 2 ； f) 接种室不低于 10 m 2 ； g) 暗室不低于 50 m 2 ； h) 发育室不低于 50 m 2 ； i) 保鲜冷藏室不低于 100 m 2 ； j) 物品保存库不低于 20 m 2 。 5.2 设备 低温生化培养箱、药品保存箱、搅拌器、脱水机、烘干机、柞蚕卵色选机、空调、排风机、电暖气、 加湿器、温湿度自控仪、电脑及打印机、发育盘架、手推运输车。 5.3 常用药品及材料 5.3.1 25 g/L 30 g/L 苯扎溴铵溶液（新洁尔灭消毒液）。 5.3.2 孔径

5、为 0.15 mm 的纱网。 5.3.3 孔径为 2.00 mm 的纱网。 5.4 蜂种 5.4.1 蜂种采集 生产前 1 年的 7 月下旬至 8 月初，在自然条件下未放蜂玉米田采集玉米螟卵块，以半山区近水 边为宜。 5.4.2 蜂种纯化 采集的玉米螟卵块带回室内发育培养，将寄生变黑的卵块单独装入试管，羽化出蜂后引单头雌蜂， 放入装有 100 粒米蛾卵的试管（10 mm 70 mm）转接寄生。发育条件为（251）、RH（755）%、 光照 16 h、 黑暗 8 h。 5.4.3 松毛虫赤眼蜂鉴定 根据雄性赤眼蜂外生殖器的形态特征进行种类鉴定，参照附录 A 执行。 5.4.4 蜂种滞育保存 鉴定

6、纯化的松毛虫赤眼蜂，经 3 代 5 代筛选繁殖，建立实验种群后保存使用： a) 将纯化的松毛虫赤眼蜂蜂种在 (251) 、RH (755)% 条件下，按蜂卵（柞蚕卵）比 2:1 接 种 24 h 后去除种蜂； b) 接蜂后发育 36 h 46 h到幼虫中期，置入 12 、RH (755)% 的条件下，滞育诱导 30 d， 赤眼蜂滞育； DB22/T 33162021 3 c) 将滞育持续期的赤眼蜂置入(31) 、RH (755)% 的条件下，进行滞育解除 60 d 90 d； d) 经 10 48 h、15 24 h 过渡后，按光照 16 h，(251) 、RH (755)%；黑暗 8 h，(

7、20 1) 、RH (755)%，变温发育至出蜂。 5.5 柞蚕茧 5.5.1 备茧 5.5.1.1 备茧时期 在生产前一年的 11 月 12 月份开始按预定计划备茧。 5.5.1.2 茧质要求 5.5.1.2.1 健康雌茧率 90%； 5.5.1.2.2 雄茧率 7%； 5.5.1.2.3 死伤茧率 3%； 5.5.1.2.4 割口茧率 8%； 5.5.1.2.5 发育蛹和嫩蛹 5%； 5.5.1.2.6 茧层率 10%，无薄皮茧、瘪茧； 5.5.1.2.7 茧干燥，未在 -3 以下低温储存。 5.5.1.3 备茧数量 按每繁 150 亿头松毛虫赤眼蜂用茧 15000 kg计算。 5.5.2

8、 蚕茧保存 5.5.2.1 保存温度 (31) 、RH (605)%。 5.5.2.2 适当通风换气，保持空气含氧量。 5.5.2.3 防止接触有毒有害物质。 5.5.2.4 储存时间不低于 45 d。 6 工厂化生产 6.1 灭菌消毒 在生产前 1 周，将所有繁蜂车间及繁蜂工具，进行集中消毒。消毒方法为如下： a) 首先对消毒对象进行清水或 0.5% 1% 氢氧化钠、1% 的漂白粉水冲洗； b) 用生石灰或石灰水对繁蜂车间喷刷覆盖； c) 将繁蜂工具等置于繁蜂车间内，用毒消散或硫磺等熏蒸消毒。保持室温 24 以上，RH 75% 以 上，时间 24 h。 6.2 蜂种复壮与扩繁 6.2.1 复

9、壮 根据生产计划，定期对松毛虫赤眼蜂蜂种，以米蛾卵和柞蚕卵交替繁育复壮： a) 接蜂比例：米蛾卵蜂卵比 1：200，柞蚕卵蜂卵比 1:1； DB22/T 33162021 4 b) 接蜂时间： 24 h； c) 发育条件：(251) 、RH (755)%、光照 16 h、黑暗 8 h； d) 复壮周期：30 d。 6.2.2 扩繁 以柞蚕卵为寄主，将蜂种扩繁 2 代 3 代： a) 接蜂比例： 1：30 （蜂种寄生柞蚕卵：新鲜卵）； b) 接蜂时间：24 h； c) 接蜂条件：全黑暗，(251) 、RH (755)%； d) 发育条件:同 6.2.1 c)； e) 将末 1 代蜂种发育至幼虫中

10、后期置于 (31) 、RH (755)% 条件下冷藏，冷藏时间 15 d。 6.3 寄主卵 6.3.1 暖茧发蛾 暖茧室保持 18 22 ，RH (705)% ，20 d 25 d 后柞蚕茧羽化出蛾。 6.3.2 收蛾 在柞蚕蛾羽化期内，随时采收刚羽化（展翅前）雄蛾，避免交尾，次日清晨人工收雌蛾，用于当天 繁蜂或储存在 (31) 的冷库中备用。 6.3.3 剖腹取卵 用人工方法将柞蚕雌蛾腹部与头胸部分离，剖腹取卵。 6.3.4 洗卵 用搅拌器将卵与蛾腹内杂物搅拌分离，漂净杂物，然后反复用清水冲洗至卵粒无杂质。 6.3.5 卵面消毒 将清洗干净的新鲜卵用 0.1% 的苯扎溴铵溶液浸泡 10 mi

11、n。 6.3.6 脱水晾卵 消毒后的新鲜卵用纱网袋装好， 用脱水机进行初步脱水， 然后用烘干机烘干， 温度不超过 25 28 。 6.3.7 清除绿卵 烘干的新鲜卵用色选机等专用设备清除绿卵后，再用于接蜂，绿卵率 4%。 6.4 接蜂 蜂种卵与新鲜柞蚕卵按 1:25 1:30 比例进行接蜂。当蜂种羽化 25% 30% 时，将种蜂卵均匀 撒在接蜂盘中，铺上孔径为 2 mm 的纱网，再将新鲜卵平铺到纱网上，送入 (251 )、RH (755)% 的暗室内产卵寄生，36 h 48 h 后，去除蜂种，标明日期送入发育室发育。 6.5 培养发育 DB22/T 33162021 5 接蜂后的寄生卵分批次送

12、入 ( 251) 、RH (755)% ，自然光照条件下的发育室，继续发育 12 h 24 h，镜检至幼虫中后期。 6.6 滞育诱导 将发育到幼虫中后期的松毛虫赤眼蜂，在 10 12 、RH (755)% 的全暗条件下，平铺在 卵盘内，卵厚 3 cm 4 cm，每天翻动两次，诱导 25 d 30 d后，赤眼蜂滞育。 6.7 滞育解除 诱导滞育结束后即进入到滞育持续期，将滞育的赤眼蜂转入 (31) 、RH (755)% 的黑暗条件 下滞育解除，时间 70 d 90 d。 6.8 变温发育 滞育解除后的赤眼蜂采用分步渐变加温的方式进行发育： a) 在 (101) 、RH (755)% 全暗条件下加

13、温 48 h； b) 在（151）、RH (755)% 全暗条件下加温 24 h； c) 在日间25 下 16 h、夜间20 下 8 h，RH (755)% 室内条件下发育至蛹后期。 7 精选与储存 7.1 精选 将发育至蛹后期的赤眼蜂寄生卵，用绿卵色选机去除未寄生卵、劣质卵、绿卵及其它杂质。 7.2 储存 将精选后的赤眼蜂转入 (31) 、RH (755)% 的保鲜冷藏室储存备用，储存时间 7 d。 8 记录档案 建立滞育松毛虫赤眼蜂工厂化生产档案，对整个生产过程进行详实记录，保存 2 年以上，做到可 追溯： a) 每天的温湿度记录； b) 每批次滞育赤眼蜂的生产日期； c) 每批次滞育赤眼

14、蜂的滞育率和解除滞育率； d) 每批次滞育赤眼蜂的加温日期。 DB22/T 33162021 6 A A 附 录 A （资料性） 松毛虫赤眼蜂形态学鉴定方法 A.1 制作鉴定玻片 将用浓度 75% 95% 酒精浸泡的雄性赤眼蜂标本按下列方法制作为玻片： a) 在 5% 的 KOH 溶液中浸泡 8 h 15 h，并用水清洗干净，置于载玻片上； b) 在解剖镜下，用昆虫针挑取雄蜂的外生殖器，清除其他组织，盖好盖玻片； c) 在显微镜下观察并测量阳基背突、腹中突及 D 值。 A.2 观察测量并鉴定 在显微镜下观察赤眼蜂雄性外生殖器并测量其阳基背突、腹中突及 D 值，符合下列特征的属于雄 性松毛虫赤眼蜂： a) 阳基背突有明显宽圆形的侧叶，末端达 D 值的 3/4 ； b) 腹中突的长度约等于 D 值的 3/5 3/4 ； c) 钩爪末端伸达 D 值的 3/4。 图A.1 松毛虫赤眼蜂雄性外生殖器-阳基 _