SF T 0094-2021 毛发中5F-MDMB-PICA等7种合成大麻素类新精神活性物质的液相色谱-串联质谱检验方法.pdf

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1、 ICS 07.140 CCS C06 SF 中 华 人 民 共 和 国 司 法 行 政 行 业 标 准 SF/T 0094 2021 毛发中5F-MDMB-PICA 等 7 种合成大麻 素类 新精神活 性物质的 液相色谱- 串联质谱 检验 方法 Determination of 7 synthetic cannabinoids including 5F-MDMB-PICA in hair by liquid chromatography- tandem mass spectrometry 2021 - 11 - 17 发布 2021 - 11 - 17 实施 中华人民 共和国 司 法部 发

2、布 SF/T 0094 2021 I 目 次 前言 . II 1 范围 . 1 2 规 范性 引用 文件 . 1 3 术 语和 定义 . 1 4 原理 . 1 5 试 剂、 仪器 和材 料 . 1 6 操 作方 法 . 2 7 分 析结 果评 价 . 5 附录A （ 资料 性） 毛发中 7 种 合成 大麻 素类 新精 神活性 物质 的线 性范 围、 线性方 程、 相关 系数、 检 出 限及定 量限 . 7 SF/T 0094 2021 II 前 言 本文件 按照GB/T 1.1 2020 标 准化 工作 导则 第1 部分： 标准 化文 件的 结构 和起草 规则 的 规 定 起草。 请注意 本文

3、 件的 某些 内容 可能涉 及专 利。 本文 件的 发布机 构不 承担 识别 专利 的责任 。 本文件 由 司 法鉴 定科 学研 究 院提 出。 本文件 由 司 法部 信息 中心 归口。 本文件 起草 单位 ： 司 法鉴 定科学 研究 院。 本文件 主要 起草 人： 向平 、 施妍 、 刘 伟、 沈保 华、 严慧、 卓先 义、 沈敏 、吴 何坚 。 SF/T 0094 2021 1 毛 发中 5F-MDMB-PICA 等 7 种合 成大 麻素类 新精神活 性物质 的液相 色谱- 串联质 谱检验 方法 1 范围 本文件 描述了 毛发 中5F-MDMB-PICA 等7 种合成 大麻 素 类新精 神

4、活性 物质 的液相 色谱-串 联质谱 （LC- MS/MS ）检 验方法 ， 包括 原 理 、试剂 、 仪器 和材 料 、 操作方 法以及 分析 结果 评 价。 本文件 适用于 毛发 中5F-MDMB-PICA 等7 种合成 大麻 素 类新精 神活性 物质 的定性 与定量 分析， 其它 检 材中5F-MDMB-PICA 等7种 合 成大麻 素类 新精 神活 性物 质 的定 性定 量分 析参 照使 用。 2 规范性 引用 文件 下列文 件中 的内 容通 过文 中的规 范性 引用 而构 成本 文件必 不可 少的 条款 。 其 中 ， 注日 期的 引用 文件 ， 仅该日 期对 应的 版本 适用 于本

5、文 件； 不注 日期 的引 用文件 ， 其 最新 版本 （包 括所有 的修 改单 ） 适 用 于 本 文件。 GB/T 6682 分 析实 验室 用 水规格 和试 验方 法 GA/T 122 毒物 分析 名词 术语 3 术语和 定义 GA/T 122 界 定的 术语 和定 义适用 于本 文件 。 4 原理 毛发样 品经清 洗和 冷冻研 磨后， 以甲醇 超声 法提取 ，采用 液相色 谱-串 联质谱 法(LC-MS/MS)进行检 测， 经与 平行 操作 的空 白 样品和 添加 样品 作对 照 ， 以保留 时间 、 特征 离子 对 和离子 对丰 度比 进行 定性 分 析；以 定量 离子 对峰 面积

6、为依据 ， 采 用内 标法 进行 定量分析 。 5 试剂、 仪器 和材 料 试剂 试验用 水 应 为符合 GB/T 6682 规定 的 一级 水 ， 所用 试剂和 要求 如下 ： a) 甲醇：HPLC 级； b) 乙腈：HPLC 级； c) 甲酸： 98% ， 优级 纯 ； d) 乙酸铵 ：色 谱 纯 ； e) 丙酮： 分析 纯； f) 标准物 质溶 液： 1) 标准物 质储 备溶 液 ： 2-(1-(5-氟戊 基)- 1H -吲哚-3- 甲酰氨 基)-3 ， 3- 二甲 基丁 酸甲酯 （5F- MDMB-PICA）、2-1-(4-氟 丁基)-1H- 吲唑-3-甲 酰氨 基-3，3-二 甲基

7、丁酸 甲酯 （4F-MDMB- BUTINACA）、1-(5- 氟戊 基)-N-(2- 苯基 丙-2-基)-1H- 吲唑-3-甲 酰胺 （5F-CUMYL-PINACA）、 3， 3- 二甲 基-2-1-(4- 戊烯-1-基)-1H- 吲唑-3- 甲酰 氨 基丁 酸丁 酯 （MDMB-4en-PINACA）、 3，3-二 甲基-2-1-(5-氟 戊基) 吲唑-3-甲 酰氨 基 丁 酸甲酯 （5F-ADB）、3 ，3- 二甲基-2- 1-(4- 氟丁 基) 吲哚-3-甲 酰氨基丁 酸甲 酯 （4F-MDMB-BICA ）、1-(4-氰 基丁 基)-N-(2-苯 基丙-2-基)-1H- 吲唑-3-

8、 甲 酰胺 （4CN-CUMYL-BUTINACA ） 对 照品 ， 加 甲醇 配制 成 质量浓 度 为1mg/mL 的标 准物 质储 备 液， 置 于冰 箱中 冷冻 保存 ，有效 期 为12 个月 ； SF/T 0094 2021 2 2) 标准物质 工 作溶 液： 试验 中所用 其 它 浓度 的标 准物质 工作 溶液 均从 符合 5.1 f)1)的 标准 物质储 备溶 液 用 甲醇 逐级 稀释而 得。 密封 ，置 于冰 箱中冷 藏保 存， 有效 期 3 个月。 g) 内标溶 液： 1) 内标储 备溶 液：1mg/mL N-(1- 金 刚烷 基)-1- 戊 基吲 唑-3-甲 酰胺-d9(AP

9、INACA-d9) 标准品 溶 液（或 其它 性质 相近 物） ，置于 冰箱 中冷 冻保 存， 有效 期12 个月 ； 2) 内标工 作溶 液： 试验 中所 用 内标 工作 溶液 从符合 5.1 g)1) 的 内标储 备溶 液用 甲醇稀 释 而 得，浓 度 为1ng/mL 。密 封 ，置于 冰箱 中冷 藏保 存， 有效 期3 个 月。 仪器 和材 料 仪器和 材料 包括 ： a) 液 相色 谱- 串联 质谱 仪： 配 有电喷 雾离 子源(ESI) ； b) 电子天 平： 分度 值0.1mg ； c) 高速离 心机 ； d) 超声波 清洗 仪 ； e) 离心管 ； f) 冷冻研 磨仪 ； g)

10、微量移 液器 ； h) 微孔滤 膜：0.22m。 6 操作方 法 定性分 析 6.1.1 样品前 处理 6.1.1.1 案件样 品 毛发样 品 依 次用 适量 的水 和丙酮 振荡 洗涤 两次 ，晾 干后剪 成约 1mm 段， 称取 毛发样 品 20mg 于 2mL 研磨管 中， 加研 磨珠 适量， 再加入 内标 工作 溶 液 1mL， 冷冻研 磨， 超声 15min 后， 13,000r/min 离心 5min ， 取上清 液， 过 0.22m 微孔滤膜 ， 滤液 直接 供仪 器分 析。 6.1.1.2 空白样 品 取空白 毛发 样 品20mg ， 按照 6.1.1.1 方法 操作 。 6.1

11、.1.3 添加样 品 若案件 样品中 出现 可疑合 成大麻 素类新 精神 活性物 质，则 取空白 毛 发 20mg ， 添加案 件样品 中出 现 的可疑 合成 大麻 素类 新精 神活性 物质 对照 品， 制得 检出限 浓度 的添 加样 品， 按照 6.1.1.1 方法 操作 。 6.1.2 仪器分 析 6.1.2.1 仪器条 件 6.1.2.1.1 液相色 谱条 件 以下 为 液相 色谱 条件 ，可 根据不 同品牌 仪 器实 际情况 进行 调整 。 a) 色谱柱 ：Acquity TM UPLC HSS T3 （100mm 2.1mm 1.8m ）或 其它 等效 柱； 注： Acquity T

12、M UPLC HSS T3 柱为 美国waters 公司产品的商品名 称，给出这一信息是为了方便 本文件 的使用者，并 不是表示对该产品的认可。如果 其它等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b) 流动相 ： 流动 相A 为 20mmol/L 乙 酸铵 缓冲 溶液 （ 含 0.1% 甲 酸和5%乙 腈） ， 流动 相 B 为 乙腈 ； 采用梯 度洗 脱， 洗脱 程序 见表1 ； c) 流速：300 L/min （或 适宜 流速） ； d) 柱温： 室温 ； SF/T 0094 2021 3 e) 进样量 ：5L 。 表1 梯度洗 脱程 序 时间 min 流动相 A % 流动相 B %

13、 0 50 50 1 50 50 6 90 10 9 90 10 9.1 50 50 10 50 50 6.1.2.1.2 质谱条 件 以下为 质谱 条件 ，可 根据 不同品牌 仪 器实 际情况 进 行调整 。 a) 离子源 ：电 喷雾 电离-正 离 子模式(ESI+) ； b) 检测方 式： 多反 应监 测(MRM ）； c) 离子源 电压(IS) ：5500V ； d) 碰撞气(CAD) 、 气帘 气(CUR) 、 雾 化气(GS1) 、 辅助 气(GS2) 均 为高 纯氮 气 ， 使 用 前调节 各气 流流 量以使 质谱 灵敏 度达 到检 测要求 ； e) 去簇电 压(DP) 、 碰撞

14、能量(CE) 应 优化 至最 佳灵 敏度 。 在符合 6.1.2.1.1 和 6.1.2.1.2 的 液相 色谱 条件 和 质谱条 件下 ，7 种合 成大 麻素类 新精 神活 性物 质、 内 标的 质谱 参数 和 保 留时间 见 表2。 表2 7 种合 成大 麻素 类新 精神 活性物 质、 内标 的质 谱参 数和保 留时 间 中文名 英文名 简称 母离子 m/z 子离子 m/z 去 簇 电 压 V 碰 撞 能 量 ev 保留时间 min 2-(1-(5- 氟戊基)- 1H - 吲哚-3- 甲酰 氨基)-3,3- 二甲基 丁酸甲酯 Methyl 2-(1-(5- fluoropentyl)-1H

15、 - indole-3- carboxamido)-3,3- dimethylbutanoate 5F-MDMB-PICA 377.2 232.2 a 50 25 4.46 144.0 50 55 2-1-(4- 氟丁基)- 1H- 吲唑-3- 甲酰氨 基-3,3- 二甲基丁 酸甲酯 Methyl 2-(1-(4- fluorobutyl)-1H- indazole-3- carboxamido)-3,3- dimethylbutanoate 4F-MDMB- BUTINACA 364.1 219 a 60 34 4.71 304 60 20 1-(5- 氟戊基)-N- (2- 苯基丙-2-

16、基)- 1H- 吲唑-3- 甲酰胺 1-(5-Fluoropentyl)-N- (2-phenylpropan-2- yl)-1H-indazole-3- carboxamide 5F-CUMYL-PINACA 368.2 233.1 a 40 25 5.38 213.1 40 40 3,3- 二甲基-2-1- (4- 戊烯-1- 基)- 1H- 吲唑-3- 甲酰氨 基 丁酸丁酯 Methyl 3,3-dimethyl- 2-(1-(pent-4-en-1- yl)-1H-indazole-3- carboxamido)butanoate MDMB-4en-PINACA 358.5 213.1

17、 a 45 31 5.84 298.2 45 20 3,3- 二甲基-2-1- (5- 氟戊基) 吲唑- 3- 甲酰 氨基 丁酸 甲酯 N-(1-Methoxy-3,3- dimethyl-1-oxobutan- 2-yl)-1-(5- fluoropentyl)-1H- indazole-3- carboxamide 5F-ADB 378.2 233.1 a 70 31 5.16 145.0 70 57 SF/T 0094 2021 4 表 2（ 续） 3,3- 二甲基-2-1- (4- 氟丁基) 吲哚- 3- 甲酰氨基 丁酸 甲酯 Methyl 2-(1-(4- fluorobutyl)-

18、1H- indol-3- ylcarbonylamino)- 3,3-dimethylbutanoate 4F-MDMB-BICA 363.2 218.2 a 52 20 4.01 144.2 52 55 1-(4- 氰基丁基)- N-(2- 苯基丙-2- 基)-1H- 吲唑-3- 甲 酰胺 1-(4-Cyanobutyl)-N- (2-phenylpropan-2- yl)-1H-indazole-3- carboxamide 4CN-CUMYL- BUTINACA 361.2 226.1 a 60 28 4.12 243.1 60 17 N-(1- 金刚烷基)- 1- 戊基吲唑-3- 甲

19、酰胺-d9 N-(1-Adamantyl)-1- pentyl-1H-indazole-3- carboxamide-d9 APINACA-d9 375.3 135.0 a 50 30 8.63 107.1 50 67 a 为定量离子对。 6.1.2.2 进样 分别 吸 取案 件样 品、 空白 样品和 添加 样品 提取 液， 按 6.1.2.1 条件 进样 分析 。 6.1.3 记录 记录案 件样 品 、 空 白样 品 和添加 样品 中可 疑色 谱峰 的保留 时间 、 特征 离子 对 和离子 对丰 度比 。 方法 检出限 参见 附 录 A。 6.1.4 定性判 断依 据 以保留 时间 、质 谱

20、特 征碎 片离子 峰和 相对 丰度 比作 为定性 判断 依据 。 如 果 案 件样 品 中出 现 目标物 的 两 对定 性 离子 对 的色谱 峰 ， 保留 时 间与 添 加样品 中 相 应 目标物 的色 谱峰保 留时 间比 较 ，相 对 误差在2.5% 内 ，且 定性 离 子对丰 度比 与浓 度相 近添 加样品 的离 子对 丰度 比之 相对误 差不 超过 表 3 规定 的范围 ，则 可判 定案 件样 品中存 在该 种目 标物 。 表3 离子对 丰度 比的 最大 允许 相对误 差 单位为百分数 （% ） 离子对丰度比 50 20 50 1020 10 允许的相对误差 20 25 30 50 定量

21、分 析 6.2.1 分析方 法 采用内 标- 工作 曲线 法或 内 标-单 点校 正法 定量 分析 。 6.2.2 样品前 处理 取案件 样品 毛发 20mg 两 份 ，余下 样品 前处 理按 照6.1.1.1 方法 。 另取空 白毛发 若 干份 ， 添 加适量 目标 物 ， 制 得系 列 质量分 数 或 单点 质量 分数 的添加 样品 ， 与案 件样 品平行 操作 。 案件样 品中 目标 物的 质量 分数 应 在工 作曲 线的 线性 范围内 。 配 制单 点 质 量分 数 的添 加样 品时 ， 案 件 样品中 目标 物 质 量分 数应 在该 质 量分 数 的50% 内。 6.2.3 仪器分

22、析 6.2.3.1 仪器条 件 仪器 条 件符 合6.1.2.1 的 规定。 6.2.3.2 进样 SF/T 0094 2021 5 分别将 案件 样品 、系 列 质 量分数 的添 加样 品或 单点 质量分 数 添 加样 品， 按 6.1.2.1 条件 进样 分析 。 6.2.4 记录与 计算 6.2.4.1 记录 记录案 件样 品、 系列 质量 分数 的 添加 样品 或单 点 质 量分数 添加 样品 中目 标物 及内标 的峰 面积 值， 然 后计算 含量 。 6.2.4.2 内标- 工作 曲线 法 在系列 质量 分数 的添 加样 品中， 以目 标物 与内 标的 峰面积 比(Y)为 纵坐 标、

23、 目 标物 质 量分 数(C)为横 坐标进 行线 性回 归， 得线 性方程 。 根据各 样品 中目 标物 及内 标的峰 面积 值， 按式(1) 计 算出案 件样 品中 目标 物的 质量分 数 。 b a Y C . (1) 式中： C 案 件样 品中 目标 物的 质量分 数 ， 单位 为 纳 克每 毫克(ng/mg) ； Y 案件 样品 中目 标物 与 内标的 峰面 积比 ； a 线性 方程 的截 距； b 线性 方程 的斜 率。 6.2.4.3 内标- 单点 校正 法 根 据案件 样品和添 加样品中 目标物 与 内标定 量离子对 的峰面 积值，按 式(2) 计算 出案件 样品中目 标 物的质

24、 量分 数 。 A c A C . (1) 式中： C 案 件样 品中 目标 物的 质量分 数 ， 单位 为 纳 克每 毫克(ng/mg) ； A 案 件样 品中目 标物 与 内标的 峰面 积比 ； A 添加 样品 中目 标物 与 内标 的峰 面积 比； c 添加 样品 中目 标物 的 质量分 数 ， 单位 为 纳 克每 毫克(ng/mg) 。 6.2.5 计算相 对相 差 案件样 品同 时平 行测 定两 份，双 样相 对相 差按 公式(3) 计算 ： 0 0 2 1 100 C C - C RD . (2) 式中： RD 相对 相差 （% ）； C 1 、C 2 两份 案件 样品 平行定 量

25、测 定的 质量 分数 ，单位 为 纳 克每 毫克(ng/mg) ； C 两 份案 件样 品中 平行 定量测 定 质 量分 数 的 平均 值(C 1+C 2)/2 ， 单位 为 纳 克 每毫克(ng/mg) 。 7 分析结 果评 价 定性分 析结 果评 价 7.1.1 阴性结 果评 价 阴性 结 果评 价包 括： SF/T 0094 2021 6 a) 如果 案 件样 品 中 仅检 出内 标，未 检出 7 种合 成大 麻 素类新 精神 活性 物质 成分 ，则阴 性结 果 可 靠； b) 如果 案 件样 品 中 未检 出内 标，则 阴性 结果 不可 靠 ， 应按 6.1 重 新检 验。 7.1.2

26、 阳性结 果评 价 阳性 结 果评 价包 括： a) 如果案 件样 品中 检出 合成 大麻素 类新 精神 活性 物质 成分且 空白 样品 无干 扰， 则阳性 结果 可靠 ； b) 如 果 案件 样 品中 检出 合 成大 麻 素类 新 精神 活性 物 质成 分 且空 白 样品 亦呈 阳 性， 则 阳性 结 果 不 可靠， 应按 6.1 重新 检验 。 定量分 析结 果评 价 两份案 件样 品的 相对 相差 不超过20% 时， 结果 按两 份 案件样 品的 平均 值计 算， 否则 应 重新 测定 。 SF/T 0094 2021 7 A A 附录A （资料 性） 毛发 中7 种 合成 大麻 素类

27、新精神 活性 物质 的线 性范 围、线 性方 程、 相关 系数 、检出 限及 定量 限 毛发 中7 种 合成 大麻 素类 新精神 活性 物质 的线 性范 围、 线性 方程 、 相关 系数 、 检出限 及定 量限 见表 A.1。 表A.1 毛发 中 7 种 合成 大麻 素类 新精神 活性 物质 的 线 性范 围、线 性方 程、 相关 系数 、检出 限及 定量 限 目标物 线性范围 ng/mg 线性方程 相关系数 r 检出限 ng/mg 定量限 ng/mg 5F-MDMB-PICA 0.02-2 y=0.07073x+0.01786 0.999 0.01 0.02 4F-MDMB-BUTINACA

28、 0.02-2 y=0.09150 x+0.02797 0.998 0.01 0.02 5F-CUMYL-PINACA 0.02-2 y=0.04302x+0.04891 0.995 0.01 0.02 MDMB-4en-PINACA 0.02-2 y=0.06242x+0.00146 0.996 0.01 0.02 5F-ADB 0.02-2 y=0.09588x+0.01569 0.996 0.01 0.02 4F-MDMB-BICA 0.02-2 y=0.03944x+0.00867 0.996 0.01 0.02 4CN-CUMYL- BUTINACA 0.05-2 y=0.02293x+0.04946 0.996 0.02 0.05