SF T 0092-2021 血液中扑草净等20种除草剂的液相色谱-串联质谱检验方法.pdf

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1、 ICS 07.140 CCS C06 SF 中 华 人 民 共 和 国 司 法 行 政 行 业 标 准 SF/T 0092 2021 血液中扑 草净等 20 种除草剂 的液相色 谱- 串联质谱 检验方法 Determination of 20 herbicides including prometryne in blood by liquid chromatography-tandem mass spectrometry 2021 - 11 - 17 发布 2021 - 11 - 17 实施 中华人民 共和国 司 法部 发 布 SF/T 0092 2021 I 目 次 前言 . II 1 范

2、围 . 1 2 规 范性 引用 文件 . 1 3 术 语和 定义 . 1 4 原理 . 1 5 试 剂、 仪器 和材 料 . 1 6 定 性分 析 . 2 7 定 量分 析 . 4 8 分 析结 果评 价 . 5 附录A （资 料性 ） 血 液 中扑草 净 等 20 种除 草剂 的 线性范 围、 线性 方程 、相 关系数 、检 出限 及定 量限 . 7 SF/T 0092 2021 II 前 言 本文件 按照GB/T 1.1 2020 标 准化 工作 导则 第1 部分： 标准 化文 件的 结构 和起草 规则 的 规 定 起草。 请注意 本文 件的 某些 内容 可能涉 及专 利。 本文 件的 发

3、布机 构不 承担 识别 专利 的责任 。 本文件 由 司 法鉴 定科 学研 究 院提 出。 本文件 由 司 法部 信息 中心 归口。 本文件 起草 单位 ： 司 法鉴 定科学 研究 院。 本文件 主要 起草 人： 严慧 、骆如 欣、 向平 、刘 伟、 沈保华 、 施 妍、 卓先 义、 沈敏、 吴何 坚 。 SF/T 0092 2021 1 血 液中扑 草净 等20 种除 草剂的 液相 色谱- 串联 质谱检 验方法 1 范围 本文件 描述 了血 液中 扑草 净等20 种除 草剂 （苯 草醚 、 乳氟 禾草 灵、 特 丁净、 丁草敌 、 双 酰草 胺、 精 吡氟禾 草灵 、 敌 稗、 扑草 净、

4、异 丙隆 、 特 丁通 、 丙 草胺、 二甲 戊灵 、 噻 草酮 、 野麦 畏、 异丙 甲草 胺 、 敌 草隆、 禾草灭 、氟 磺隆、 氟胺磺 隆 和乙 草胺 ）的液 相色谱- 串联 质谱检 验方 法 ，包括 原理、 试剂 、仪 器 和材料 、定性 分析 、 定量 分析以及 分 析结 果评 价。 本文件 适用 于 血液 中 扑草净 等20 种除 草 剂的 定 性定量 分 析 ，其 它 检材 中 扑草净 等20 种除 草 剂的 定 性定量 分析 参照 使用 。 2 规范性 引用 文件 下列 文 件中 的内 容通 过文 中的规 范性 引用 而构 成本 文件必 不可 少的 条款 。 其 中 ， 注日

5、 期的 引用 文件 ， 仅该日 期对 应的 版本 适用 于本文 件； 不注 日期 的引 用文件 ， 其 最新 版本 （包 括所有 的修 改单 ） 适 用 于 本 文件。 GB/T 6682 分 析实 验室 用 水规格 和试 验方 法 GA/T 122 毒物 分析 名词 术语 3 术语和 定义 GA/T 122 界 定的 术语 和定 义适用 于本 文件 。 4 原理 血液中 的 扑草 净等20 种除 草剂 用 有机溶 剂提 取后， 用液相 色谱- 串联质 谱法(LC-MS/MS)进 行检测 ， 经与平 行操 作的 空白 样品 和添加 样品 比较 ， 以保 留 时间 、 特 征离 子 对 和离 子

6、 对丰度 比进 行 定 性分 析 ； 以 定量离 子 对 峰面 积为 依据 ， 采用 内标 法进 行定量 分 析。 5 试剂 、 仪器 和材 料 试剂 试验用 水应符合 GB/T 6682 规定 的一 级水 ，所 用试 剂 和要 求如 下 ： a) 乙腈：HPLC 级 ； b) 乙醚： 分析 纯 ； c) 甲酸： 优级 纯 ； d) 甲醇：HPLC 级 ； e) 标准物 质溶 液： 1) 标准物 质储 备溶 液： 苯草 醚、 乳 氟禾 草灵 、 特丁 净 、 丁草 敌、 双酰 草胺、 精 吡氟禾 草灵 、 敌稗 、 扑 草净 、 异 丙隆 、 特丁通 、 丙草 胺、 二甲 戊 灵、 噻草 酮、

7、 野麦 畏、 异 丙甲草 胺 、 敌 草隆、 禾草 灭、 氟磺 隆、 氟胺磺 隆 和 乙草 胺标 准物 质 溶液 ，质 量浓 度均 为 100g/mL ； 置 于冰箱 中冷 冻保 存， 有效 期为 12 个月 ； 2) 标准物 质工 作溶 液： 试验 中所用 其他 浓度 的标 准物 质工作 溶液 均由 符合 5.1 e) 1)的 标准 物质储 备溶 液 用 甲醇 稀释 而得。 密封 ，置 于冰 箱中 冷藏保 存， 有效 期 为 3 个 月。 f) 内标SKF525A 标 准溶 液： SF/T 0092 2021 2 1) 1.0mg/mL SKF525A 标 准储 备 溶液： 精密 称取SKF

8、525A10mg 于 10mL 容量 瓶中， 加入 适量甲 醇 溶 解并定 容至 刻度 ，配 制 成1.0mg/mL SKF525A 标准 储备 溶液。 密封 ，置 于冰 箱中 冷冻保 存 ， 有效期 为 12 个 月； 2) 5g/mL SKF525A 标 准工 作溶 液：移 取 1.0mg/mLSKF525A 标准储 备溶 液适 量至 容量 瓶中， 加 入 甲醇稀 释， 混匀 ，配 制 成5g/mL 的SKF525A 标 准工 作 溶液。 密封 ，置 于冰 箱中 冷藏保 存， 有效期 为3 个月 。 仪器 和 材料 仪器和 材料 包括 ： a) 液相色 谱- 串联 质谱 仪： 配 有电喷

9、雾离 子源 ； b) 旋涡混 合器 ； c) 离心机 ； d) 电子天 平： 分度 值0.1mg ； e) 恒温水 浴锅 ； f) 10mL 具塞 离心 管； g) 移液器 。 6 定性分析 样品 前 处理 6.1.1 案件样品 取血液0.5mL置于10mL 具 塞 离心管 中 ， 加入5g/mL SKF525A 标准 工作 溶液10L，用 乙醚3mL 涡 旋混 合 提 取 ， 在2500r/min 下 离心3min ， 将 有机 层转 移至 另一 离 心管中 ， 于60C 水 浴中 挥发 至近干 ， 残留 物用200L 甲醇复 溶， 供仪 器分 析 。 6.1.2 空白样品 取空白 血液0.

10、5mL置于10mL 具塞离 心管 中 ， 加入5g/mL SKF525A 标准 工作 溶液10L ， 然后 按照6.1.1 的 方法操 作 。 6.1.3 添加样品 若案件 样品 中出 现附 录A 中 可疑除 草剂 ， 取 空白 血液0.5mL ， 添加 案件 样品 中出 现的可 疑除 草剂 对照 品，然 后按照6.1.1 的方 法 操作 。 仪器检测 6.2.1 液相色 谱- 串联 质谱 参考 条件 液相色 谱- 串联 质谱 参考 条 件如下 ，应 用时 可根 据不 同品牌 仪器 的实 际情 况进 行调整 。 a) 色谱柱 ：Waters Acquity UPLC BEH C18 液相 色谱

11、 柱 （2.1mm 100mm 1.7 m ）或 其它等 效柱 ； 注： Waters Acquity UPLC BEH C18 液相色谱柱为Waters 公司产品 的商品名称，给出这一信息是为了方便本文件的 使用者，并不是表示对该产品的认可。如果其它等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b) 流动相 ：A 相为0.1% 甲酸 溶液，B 相 为乙 腈； 流动 相梯度 洗脱 程序 见 表1； c) 流速 为0.3mL/min ； d) 进样量 为5 L ； e) 离子源 ：电 喷雾 电离- 正离 子模式 （ESI+ ） ； f) 检测 方 式： 多反 应监 测（MRM ）； g) 离子

12、源 电压 （IS ）：5500V ； h) 碰撞气(CAD) 、 气帘 气(CUR) 、 雾 化气(GS1) 和辅 助气(GS2) 均 为高 纯氮 气， 使用 前调节 各气 流流 量以使 质谱 灵敏 度达 到检 测要求 ； SF/T 0092 2021 3 i) 去簇电 压(DP) 和 碰撞 能量(CE) 等 电压 值应 优化 至最 佳 灵敏度 ； j) 20 种 除草 剂和 内标 的定 性 离子对 、定 量离 子对 和保 留时间 见 表2。 表1 流动相 梯度 洗脱 程序 时间 min 流动相 A % 流动相 B % 0 80 20 4 50 50 6 30 70 10 5 95 11 5

13、95 11.1 80 20 15 80 20 表2 20 种 除草 剂 和 内标 的LC-MS/MS 参数 中文名 英文名 保留时间 min 母离子 m/z 子离子 m/z 碰撞 能量 eV 去簇电压 V 乙草胺 Acetochlor 6.43 207.2 72.0 a 30 60 165.1 35 60 敌稗 Propanil 5.32 218.0 162.1 a 30 60 127.0 25 60 丁草敌 Butylate 8.03 218.1 57.0 a 35 60 190.1 15 60 特丁通 Terbumeton 3.07 226.2 170.1 a 25 60 114.0 34

14、 60 敌草隆 Diuron 4.55 233.0 160.0 a 30 60 72.0 35 60 双酰草胺 Carbetamide 3.07 237.1 192.1 a 11 60 118.1 18 60 扑草净 Prometryn 4.38 242.0 158.1 a 33 60 200.0 25 60 特丁净 Terbutryn 4.47 242.1 186.1 a 25 60 91.0 34 60 苯草醚 Aclonifen 6.84 265.1 248.0 a 20 60 182.0 35 60 异丙隆 Isoproturon 4.44 270.2 72.0 a 35 60 165

15、.1 19 60 二甲戊灵 Pendimethalin 8.55 282.1 194.0 a 30 60 211.8 25 60 异丙甲草胺 Metolachlor 6.35 284.0 252.0 a 20 60 176.0 30 60 野麦畏 Triallate 8.90 306.0 86.0 a 40 60 145.0 35 60 丙草胺 Pretilachlor 7.63 312.1 252.3 a 29 60 176.4 45 60 禾草灭 Alloxydim 6.87 324.0 178.0 a 30 60 234.0 25 60 噻草酮 Cycloxydim 7.75 326.0

16、 180.0 a 30 60 280.0 25 60 SKF525A （内标 ） SKF525A 6.20 354.3 209.3 a 25 60 167.3 37 60 精吡氟禾草灵 Fluazifop-P- butyl 8.20 383.9 327.9 a 23 60 282.0 29 60 SF/T 0092 2021 4 表 2（ 续） 氟磺隆 Prosulfuron 5.52 420.0 141.0 a 30 60 166.8 35 60 乳氟禾草灵 Lactofen 8.25 479.1 344.0 a 31 60 223.0 35 60 氟胺磺隆 Triflusulfuron-

17、methyl 5.92 493.2 96.0 a 40 60 264.0 30 60 a 为定量离子对 。 6.2.2 进样 分别吸 取案 件样 品、 空白 样品和 添加 样品 提取 液， 按 照6.2.1 规定 的条 件进 样 分析。 6.2.3 记录 记录案 件样 品、 空白 样品 和添加 样品 中可 疑色 谱峰 的保留 时间 、特 征离 子对 和离子 对丰 度比 。 6.2.4 定性判 断依 据 以保留 时间 、特 征离 子 对 和离子 对丰 度比 作为 定性 判断依 据。 如 果 案 件样 品 中出 现 目标物 的 两 对定 性 离子 对 的特征 色 谱 峰， 保 留时 间 与添加 样

18、 品 中相 应 标准 物 质的色 谱峰 保留 时间 相比 较， 相 对误 差在 2. 5% 内 ， 且定性 离子 对丰 度比 与浓度 相近 添加 样品 的离 子 对 丰度比 之相 对误 差不 超过 表 3 规 定的 范围 ，则 可判定 案件 样品 中存在 这种 目标 物。 表3 离子对 丰度 比的 最大 允许 相对误 差 单位为百分数（% ） 离子对丰度比 50 20 50 10 20 10 允许的相对误差 20 25 30 50 7 定量分析 分析方法 采用内 标- 工作曲 线 法 或内 标- 单点校正 法进 行 定 量分 析。 样品前 处理 取案件 血液0.5mL 两 份， 加入5g/mL

19、 SKF 525A 标准工作 溶液10L， 然后 按照6.1.1 的规定 操作 。 另取空 白血 液样 品若 干份 ， 添 加适 量除 草剂 ， 制得 系 列浓度 或单 点浓 度的 添加 样品 ， 与 案件 样品 平 行操作 。 案件样 品中 除草 剂的 浓度 应在工 作曲 线的 线性 范围 内。 配 制单 点浓 度的 添加 样品时 ， 案 件样 品中 除 草剂质 量浓 度应 在该 质量 浓度的 50%内。 仪器分析 7.3.1 仪器条件 仪器条 件应 符合6.2.1 的 规定 。 7.3.2 进样 分别将 空白 样品 、 案件 样 品、 系列 浓度 的添 加样 品 或单点 浓度 添加 样品

20、， 按 照6.2.1 规定 的条 件进 样 分析。 记录 与 计算 7.4.1 记录 SF/T 0092 2021 5 记录案 件样品 、系 列浓度 的添加 样品或 单点 浓度添 加样品 中 目标 物 及 内标定 量离子 对的峰 面积 值 。 7.4.2 内标- 工作 曲线 法 在系列 质量 浓度 的添 加样 品中， 以 目 标物 与内 标的 峰面积 比 （Y ） 为纵 坐标， 目标物 质量 浓度 （C ） 为横坐 标进 行线 性回 归， 得线性 方程 。 根据案件 样 品中 目标 物 与 内标的 峰面 积比 ，按 公式(1) 计算 出案 件样 品中 目标 物 的质量 浓度 。 b a Y C

21、 . (1) 式中： C 案 件样 品中 目标 物的 质量浓 度 ， 单位 为 纳 克每 毫升(ng/mL) ； Y 案件 样品 中目 标物 与 内标的 峰面 积比 ； 线 性方 程的 截距 ； 线 性方 程的 斜率 。 7.4.3 内标- 单点 校正 法 根据案 件样品 和添 加样品 中 目标 物 与内 标的 峰面积 比，按 公式（2）计 算出 案 件样品 中 目标 物 的 质 量浓度 。 A c A C . (2) 式中： C 案 件样 品中 目标 物的 质量浓 度 ， 单位 为 纳 克每 毫升(ng/mL) ； A 案 件样 品中目 标物 与 内标的 峰面 积比 ； A 添加 样品 中目

22、 标物 与 内标 的峰 面积 比； c 添加 样品 中目 标物 的 质量浓 度 ， 单位 为 纳 克每 毫升(ng/mL) 。 7.4.4 计算相 对相 差 案件样 品平 行测 定两 份， 双样相 对相 差按 公式(3)计算 。 0 0 2 1 100 C C - C RD . (2) 式中： RD 相对 相差 （%） ； C 1 、C 2 两份 案件 样品 平行定 量测 定的 质量 浓度 ，单位 为 纳 克每 毫升(ng/mL) ； C 两 份案 件样 品中 平行 定量测 定 质 量浓 度 的 平均 值(C 1+C 2)/2 ， 单位 为 纳 克 每毫升(ng/mL) 。 8 分析结 果评

23、价 定性 结 果评 价 8.1.1 阴性结 果评 价 阴性 结 果评 价包 括： a) 如果案 件样 品中 仅检 出内 标，未 检出 附录 A 中 除草 剂成分 ，则 阴性 结果 可靠 ； b) 如果案 件样 品中 未检 出内 标，则 阴性 结果 不可 靠。 8.1.2 阳性结 果评 价 阳性 结 果评 价包 括： a) 如果案 件样 品中 检出 附 录A 中除 草剂 成分 且空 白样 品无干 扰， 则阳 性结 果可 靠； b) 如果案 件样 品中 检出 除草 剂成分 且空 白样 品亦 呈阳 性，则 阳性 结果 不可 靠。 SF/T 0092 2021 6 定量分 析结 果评 价 两份案 件样

24、 品的 相对 相差 不超过20% （ 腐败 检材 不超 过30% ） 时， 结果 按两 份案 件样品 含量 的平 均 值 计算， 否则 应重 新测 定。 SF/T 0092 2021 7 附录A （资料 性） 血液中 扑草 净 等 20 种除 草 剂的线 性范 围、 线性 方程 、相关 系数 、检 出限 及定 量限 血液中 扑草 净等20种 除草 剂的线 性范 围、 线性 方程 、相关 系数 、检 出限 及定 量限见 表A.1 。 表A.1 血液中 扑草 净 等 20 种除 草 剂的线 性范 围、 线性 方程 、相关 系数 、检 出限 及定 量限 化合物 英文名 线性范围 ng/mL 线性方程

25、 相关系数 r 检出限 ng/mL 定量限 ng/mL 乙草胺 Acetochlor 1-200 y=0.00355x+0.00068 0.9966 0.5 1 敌稗 Propanil 0.5-200 y=0.00259x+0.0000817 0.9981 0.1 0.5 丁草敌 Butylate 2-100 y=0.0019X-0.00156 0.9969 1 2 特丁通 Terbumeton 0.5-200 y=0.23x-0.0443 0.9987 0.1 0.5 敌草隆 Diuron 1-200 y=0.000484x-0.000019 0.9972 0.5 1 双酰草胺 Carbet

26、amide 1-200 y=0.0147x+0.00308 0.9960 0.5 1 扑草净 Prometryn 0.5-200 y=0.129x+0.00881 0.9974 0.1 0.5 特丁净 Terbutryn 0.5-200 y=0.218x-0.024 0.9978 0.1 0.5 苯草醚 Aclonifen 0.5-200 y=0.00226x-0.00035 0.9987 0.1 0.5 异丙隆 Isoproturon 0.5-100 y=0.0472x+0.00804 0.9953 0.1 0.5 二甲戊灵 Pendimethalin 1-200 y=0.0005x-0.0

27、00167 0.9981 0.5 1 异丙甲草胺 Metolachlor 0.5-200 y=0.0702x+0.0131 0.9977 0.1 0.5 野麦畏 Triallate 1-200 y=0.00377X-0.00301 0.9975 0.5 1 丙草胺 Pretilachlor 0.5-200 y=0.0535x+0.0041 0.9979 0.1 0.5 禾草灭 Alloxydim 0.5-200 y=0.00374x-0.000506 0.9974 0.1 0.5 噻草酮 Cycloxydim 0.5-200 y=0.00548x-0.000504 0.9928 0.1 0.5 精吡氟禾草灵 Fluazifop-P-buthyl 0.5-100 y=0.0213x-0.00301 0.9976 0.1 0.5 氟磺隆 Prosulfuron 0.5-200 y=0.0106X+0.000168 0.9962 0.1 0.5 乳氟禾草灵 Lactofen 2-200 y=0.000614x-0.000498 0.9942 1 2 氟胺磺隆 Triflusulfuron-methyl 1-200 y=0.000706X-0.0000663 0.9972 0.5 1