GA T 1933-2021 法庭科学 疑似毒品中左旋甲基苯丙胺和右旋甲基苯丙胺检验 液相色谱和液相色谱-质谱法.pdf

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1、ICS 13.310 CCS A 92 GA 中 华 人 民 共 和 国 公 共 安 全 行 业 标 准 GA/T 法庭科学 疑似毒品 中左旋甲 基苯丙胺 和 右旋甲基 苯丙胺检 验 液相色谱 和液相色 谱- 质 谱法 Forensic sciences Examination methods for (S)-methamphetamine and (R)-methamphetamine in suspected drugs LC and LC-MS - 发布 - 实施 中华人民 共和国 公安部 发 布 GA/T I 前 言 本文件 按照GB/T 1.1 2020 标 准化 工作 导则 第1

2、部 分： 标 准化 文件 的结 构和 起草规 则 的规 定起 草。 请 注意 本文 件的 某些 内容 可能涉 及专 利。 本文 件的 发布机 构不 承担 识别 专利 的责任 。 本 文件 由全 国刑 事技 术标 准化技 术 委 员会 毒物 分 析 分技术 委员 会 （SAC/TC 179/SC 1 ） 提 出并 归口 。 本 文件 起草 单位 ： 公 安部 物证鉴 定中 心、 公安 部禁 毒情报 技术 中心 、新 疆自 治区公 安厅 刑侦 总队 、 中国人 民公 安大 学 。 本 文件 主要 起草 人： 赵彦 彪、 杨 虹贤 、 翟 晚枫 、 郑 珲、 张 春水 、 徐 鹏、 李嵬 、 何洪

3、源、 赵阳 、 钱 振 华、常 颖、 李彭 、郑 晓雨 、闻武 、刘 克林 、高 利生 。 GA/T 1 法庭科学 疑 似毒 品中 左旋 甲基苯 丙胺和右 旋甲基 苯丙胺 检验 液相色谱 和液相 色谱- 质 谱法 1 范围 本 文件规 定 了 法 庭 科 学 领 域 疑 似 毒 品 样品 中 左旋甲基苯丙胺和右旋甲基苯丙胺 的 液 相 色 谱- 质谱 （LC-MS ）定 性检 验 方 法 和液相 色谱 （LC ）定 量检 验方法 。 本 文件适用 于 法庭 科 学领域 疑 似 毒品 固体 样品中 左旋 甲 基 苯丙 胺 和右 旋 甲基苯 丙 胺 的定 性 分析 和 定量分 析。 2 规 范性

4、引用 文件 下列文 件中 的内 容通 过文 中的规 范性 引用 而构 成本 文件必 不可 少的 条款 。 其 中 ， 注日 期的 引用 文件 ， 仅该日 期对 应的 版本 适用 于本文 件； 不注 日期 的引 用文件 ， 其 最新 版本 （包 括所有 的修 改单 ） 适 用 于 本 文件。 GB/T 6682 分析 实 验室 用 水规格 和试 验方 法 GB/T 27418 测量 不确 定 度评定 和表示 GA/T 122 毒物 分析 名词 术语 3 术 语和 定义 GA/T 122 界 定的 术语 和定 义适用 于本 文件 。 4 原理 对疑似 毒品 样品 中的 左旋 甲基苯 丙胺 和右 旋

5、甲 基苯 丙胺 （化 合物 信息 参见附录 A ） 进行 提取。 采 用 液相色谱- 质谱检测，以保留时间、质谱特征离子对 和离子 对丰度比作为定性 判断依据；采用液相色谱 检测， 以色 谱峰 面积 作为 定量依 据， 用外 标单 点法 或外标 标准 曲线 法进 行定 量分析 。 5 试 剂和 材料 5.1 试剂 实验用 水应 符 合 GB/T 6682 中规 定的 一级 水。 除 非另 有说明 ， 在 分析 中使 用的 试剂均 为色 谱纯 ， 试 剂包括 ： a ） 甲醇； b） 乙醇； c ） 正己烷 ； d） 异丙醇 ； e ） 三氟乙 酸； f ） 碳酸氢 铵； g） 氨水； GA/T

6、 2 h） 二乙胺； i ） 碳 酸氢 铵- 氨 水缓 冲液 （ 以配 制1000mL 为例 ）： 称取碳 酸氢 铵395.0mg ，加 入900mL 水稀 释 ； 取氨水 ， 滴入 上述 碳酸 氢 铵溶液 中 ， 调 节pH 11 ； 用 水定容 至1000mL 容量 瓶中 ， 摇 匀 。 用真空 抽滤泵 过滤 ，超 声波 清洗 器超声 ，即 可使 用； j ） 定 量 用 流动 相 （ 以配 制1000mL 为例）： 量取 二乙胺0.5mL ， 三氟 乙 酸1.0mL ，异 丙 醇80mL ， 用正己 烷 定 容至1000mL 容 量瓶中 ，摇 匀， 超声 波清 洗器超 声， 即可 使用

7、； k） 定性提 取溶 剂 （ 以配 制1000mL 为例 ） ： 量取300mL 碳 酸 氢铵- 氨 水缓 冲液 ， 用 甲醇 定容至1000mL 容量瓶 中， 摇匀 ， 超 声波 清洗器 超声 ，即 可使 用； l ） 定 量提取 溶剂 （ 以配 制1000mL为例 ） ：量取200mL 甲 醇和300mL 乙醇 ，用 定量 用流动 相定容 至1000mL 容 量瓶 中， 摇匀 ， 超声 波清 洗器 超声 ，即 可使用 ； m ） 标准溶 液： 1）标 准物 质储 备液 ：1.0mg/mL 左旋 甲基 苯丙 胺 、1.0mg/mL 右旋 甲基 苯丙 胺 标 准物质 储备 液 ， 04 冷藏

8、 保存 ，有 效期12 个月 ； 2）标 准工 作溶 液按 实验 需 求分为 以下 四类： 定 性用 标准 工作 溶液 ： 移取 左 旋甲 基苯 丙胺 、 右 旋甲基 苯丙 胺 标 准物 质 储 备液 各 适量 ， 用定性 提取 溶剂 稀释 ， 分 别配制 成100ng/mL 的左 旋 甲基苯 丙胺 、 右旋 甲基 苯 丙胺标准 工作溶 液。04 冷 藏保 存 ，有 效期1个月 ； 定 性质 控标 准工 作溶 液： 移取 左旋 甲基 苯丙 胺 、右 旋甲 基苯 丙胺 标准 物 质 储备 液各适 量，用 定性 提取 溶剂 稀释 ， 分别 配制 成1ng/mL 的 左 旋甲基 苯丙 胺 、 右旋

9、甲基 苯丙胺 标 准工作 溶液 。0 4 冷藏 保存 ， 有效 期1 个月 ； 外 标单 点法 定量 用标 准工作 溶液 ： 移取 左旋 甲 基苯丙 胺 、右 旋甲 基苯 丙 胺 标准 物质 储 备液各 适量 ， 用 定量 提取 溶剂稀释，配 制 成0.1mg/mL 的 左旋 甲基 苯丙胺 、 右 旋 甲基苯 丙胺标 准工 作溶 液。04 冷藏 保存 ，有 效期1个月 ； 外标 标 准曲 线法 定量 用标准 工作 溶液 ： 移取 左 旋甲基 苯丙 胺 、右 旋甲 基 苯丙胺 标准 物 质 储备液 各适量， 使用定 量提取溶 剂 稀释， 配制成 浓度为0.001mg/mL0.2mg/mL 范围

10、的 左旋 甲基 苯丙 胺 、 右旋 甲基苯 丙胺 标准 工作 溶液 ，至少 配制5个 浓度 。 5.2 材料 材料包 括： a) 具 盖离 心管 ； b) 容 量瓶 ； c) 有机 系 微孔 滤膜 ：0.22 m ； d) 水 系微 孔滤 膜：0.22 m 。 6 仪 器和 设备 仪器和 设备 包括 ： a ） 液相色 谱仪 （LC ）： 配有 二极管 阵列 （DAD ）或 紫 外检测 器（UV）； b） 液相色 谱- 质 谱仪 （LC-MS ）：配 电喷 雾离 子源 ，具备MRM 检测 模式 ； c ） 电子天 平： 定性 检验 实际 分度值d 0.1mg ，定 量检 验 实际分 度值d 0

11、.01mg ； d） 离心机 ； e ） 振荡器 ； GA/T 3 f ） 真空抽 滤泵 ； g） 超声波 清洗 器； h） 移液器 或移 液管 。 7 操 作方 法 7.1 定性 分析 7.1.1 样 品制 备 样品充 分均 质化 ， 根 据实 际需求 ，称 取 10mg100mg 于具 盖离 心管 中， 加入 10mL 定 性提 取溶 剂 ， 密封并 振 荡 5min ， 以不 低 于 4000r/min 离心 5min ， 取上清 液， 用定 性提 取溶 剂 稀释 ， 稀 释液 经 0.22 m 的水系 微孔 滤膜 过滤 ，滤 液作为 样品 溶液 ， 供 LC-MS 分析 。 7.1.2

12、 仪 器检 测 7.1.2.1 液相 色谱- 质谱 仪条件 以下为 参考 条件 ，可 根据 不同品 牌仪 器和 不同 样品 等实际 情况 进行 调整 ： a ） 色谱柱 ：LUXAMP （3.0 m ，4.6mm 100mm ）或 其他等 效柱 ； 注： LUXAMP 柱为 Phenomenex 公司产品的商品名称，给 出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示 对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b） 柱温：30 C ； c ） 流动相 ：A ： 碳酸 氢铵- 氨 水缓冲 液 ，B ：甲醇 ； d） 洗脱： 梯度 洗脱 程序 见 表 1； 表 1 梯度

13、 洗脱 程序 时间 min 流动相 A 流动相 B 0 30% 70% 12 30% 70% 12.5 0% 100% 15.5 0% 100% 16.5 30% 70% 20 30% 70% e ） 流速：0.4mL/min ； f ） 进样量 ：5L ； g） 离子源 ：电 喷雾 离子 源； h） 检测模 式 ： 正离 子模 式； i ） 毛细管 电压 ：5000V ； j ） 干燥气 ：10L/min ； k） 干燥气 温度 ：350C ； GA/T 4 l ） 雾化气 ：45psi; m ） 左旋甲 基苯 丙胺 和右 旋甲 基苯丙 胺 的 离子 对 和 碎裂 电压 （Fragmento

14、r ） 、 碰 撞 能量 （CE ） ： 见表 2 。 表 2 质谱 参考 条 件 名称 母离子 m/z 子离子 m/z 碎裂电压 V 碰撞能量 eV 左旋甲基苯丙胺 150.1 91.1 100 15 119.1 8 右旋甲基苯丙胺 150.1 91.1 100 15 119.1 8 7.1.2.2 进样 分别吸 取 样 品空 白 （ 定性 提取溶 剂 ） 、 样品 溶液、 标准溶液 空 白 （ 定性 提取 溶剂）和 定 性用 标准 工 作溶液 ， 按7.1.2.1 条件 进 样分析 。 或 根据 实际 需求 ， 再 分 别吸 取标 准溶 液空 白 （ 定 性提 取溶 剂 ） 和 定 性 质

15、控标 准工 作溶 液， 按7.1.2.1条件 进 行分 析。 7.2 定量 分析 7.2.1 外 标单 点法 7.2.1.1 含量 预分 析 根据实 际需 求， 称取 10mg100mg 样 品置 于具 盖离 心 管中， 加入 10mL 定 量提 取溶剂 ， 密 封并 振荡 10min ，以 不低 于 4000r/min 离心 5min ，取 上清 液作 为样品 溶液 ， 供 LC 分析 。或根 据实 际需 要， 将上 清液用 定量 提取 溶剂 稀释 ， 稀释 液作 为样 品溶 液， 供 LC 分 析。 采用 外标 单 点法定 量用 标准 工作 溶液 作 为定量 参照 。 当上清 液中 目标

16、物的 浓度 过高时 ， 将上 清液 用 定 量提 取溶剂 稀释 ， 稀释 液作 为样 品溶液 ， 供 LC-DAD 或 LC-UV 分析 。 按照公 式（1） 计算 样品 中 目标物 的 预 分析 百分 含量 。 ( ) 3 02 + = 100% C A V V V A V m 0 1 2 （1 ） 式中： 样 品中 目标 物的 百分 含 量， 用百 分比 （% ）表示 ； C 0 外 标单 点法 定量 用 标 准工作 溶液 中目 标物 的浓 度，单 位为 毫克 每毫 升 （mg/mL ）； A 样品溶 液中 目标 物的 色谱 峰面积 值； A 0 外 标单 点法 定量 用 标 准工作 溶液

17、 中目 标物 的色 谱峰面 积值 ； V 1 样 品初 次定 容体 积， 单位为 毫升 （mL ）； V 2 从 V 1 中移 取的 体积 ， 单位为 毫升 （mL ） ； V 3 将 V 2 稀释 时加 入 定 量 提取溶 剂 的 体积 ，单 位为 毫升 （mL ） ； m 样品 的 称 量重 量 ， 单 位为毫 克 （mg ） 。 GA/T 5 7.2.1.2 准确 定量 7.2.1.2.1 称 量重 量的 计 算 根据 预 分析 中 目 标物 含量 测定结 果 ， 选 择合 适的 定 容体积 、 稀释 倍数 （ 样品 提 取操作 参数 参见 附录 B 中表 B.1） ， 并按 照公 式

18、（2） 计 算出 样品 称量 重量 （m ） ， 使样 品溶 液中 目标 物的浓 度在 所用 标准 工 作 溶液浓 度的 （100 30 ）% 范围内 。 0 C V D m = （2 ） 式中 ： m 称量 重量 ，单 位为 毫 克（mg ） ； C 0 外 标单 点法 定量 用 标 准工作 溶液 中目 标物 的浓 度， 单 位为 毫克 每毫 升 （mg/mL ） ； V 初次 定容 体 积， 单位 为 毫升（mL ） ； D 稀释 倍数 ； 样 品中 目标 物的 预分 析百分 含 量 ，用 百分 比（% ）表 示 。 7.2.1.2.2 样 品制 备 根据 7.2.1.2.1 计 算结 果

19、， 平 行称取 样 品 2 份 于具 盖离 心管中 （需 要对 定量 结果 进 行不确 定度 评定 时 ， 至少平 行称取 6 份） 。 根 据 预分析 含量 结果 ， 加 入相 应 初次定 容体 积的 定量 提取 溶剂 ， 密封 并振 荡 10min ， 以不低 于 4000r/min 离心 5min ， 取上清 液 作 为样 品溶 液， 供 LC 分析； 当样 品溶 液需要 稀释 时， 按 照 稀 释倍数 进行 稀释 定容 ，稀 释液作 为样 品溶 液， 供 LC 分析 。 7.2.1.2.3 仪 器检 测 7.2.1.2.3.1 液相 色谱 仪 条件 以下为 参考 条件 ，可 根据 不同

20、品 牌仪 器和 不同 样品 等实际 情况 进行 调整 ： a ） 检 测器 ：二 极管 阵列 或 可变波 长紫 外检 测器 ； b） 色 谱柱 ：CHIRALCEL_OZ-H （5m ，4.6mm 250mm ）或其他 等 效柱 ； 注：CHIRALCEL_OZ-H 柱为 Daicel 公司产品的商品名称， 给出这一信息是为了方便本标准的使用者， 并不是表示 对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 c ） 柱 温：35C ； d） 流 动相 ：A ： 定量用 流 动相 ，B ：异 丙醇 ； e ） 洗 脱： 梯度 洗脱 程序 见 表 3 ； 表 3 梯度 洗脱

21、程序 时间 min 流动相 A 流动相 B 0 100% 0% 15 100% 0% 16 0% 100% 21 0% 100% 22 100% 0% 30 100% 0% GA/T 6 f ） 流速 ：1.0mL/min ； g） 进 样量 ：10L ； h） 检 测波 长：214nm ，带 宽：4nm 。 7.2.1.2.3.2 进样 分别吸 取样 品空 白 （ 定量 提取溶 剂 ） 、 样品 溶液、 标准溶液 空 白 （ 定量 提取 溶剂 ） 和外 标单 点法 定 量用标 准工 作溶 液 ， 按7.2.1.2.3.1 条件 进 样 分析 。 当 称取2 份样 品时 ，每 份样 品 进样2

22、3 针。 7.2.1.2.4 计 算含 量 按照公 式（1） 计算 样品 中 目标物 百分 含量 。 7.2.2 外标 标 准曲 线 法 7.2.2.1 标准 工作 曲线 绘 制 采用5.1 中 配制的外标标准曲线法 定量用标准工作溶液及标 准溶液空白 （ 定量提取溶 剂 ） 分别绘制 成线性 范围 为0.001mg/mL 0.2mg/mL 的左 旋甲 基苯 丙胺、 右旋 甲基 苯丙 胺 标 准工作 曲线 。 7.2.2.2 样品 制备 根据实际 需求， 平行 称取 样品2份各20mg200mg 于 具盖离心 管中， 加入10mL 定量提取 溶剂， 密封 并振荡10min ， 以不 低于400

23、0r/min 离心5min ， 将上 清 液用定 量提 取溶 剂稀 释10 倍， 稀 释液 用 有 机系 微孔 滤膜过 滤， 滤液 作为 样品 溶液， 供LC 分析 。 7.2.2.3 仪器 检测 7.2.2.3.1 液 相色 谱仪 条 件 同7.2.1.2.3.1 。 7.2.2.3.2 进样 分别吸 取样品 空白 （ 定量 提取溶 剂 ） 、样 品溶 液， 按7.2.2.3.1 条 件进 样分 析 ， 每 份样品 平行 进样23 针。 7.2.2.4 计算 含量 以 外标 标准 曲线 法定 量用 标准工 作溶 液 中 目标 物的 峰面积 值为 纵坐 标、 外标 标 准曲线 法定 量用 标

24、准 工作溶 液 中 目标 物的 浓度 为横坐 标进 行线 性回 归， 得到线 性 方 程。 根据 样品 溶液 中 目标 物的 峰面 积值 ， 按公式 （3 ）计 算出 样品 中 目标物 的百分 含量 。 100% Y - b V = am （ ） （3 ） 式中： 样 品中 目标 物 的 百分 含量， 用百 分比 （% ）表 示； Y 样 品溶 液 中 目标 物 峰 面积 值 的平 均值 ； b 线 性方 程的 截距 ； V 样品 溶液 的定容 体积 ， 单位为 毫升 （mL）； a 线性 方程 的斜 率; GA/T 7 m 样品 的称 量重 量， 单 位为毫 克（mg）。 8 结果 评 价与

25、 表述 8.1 定性 结果 评价 阳性结 果评 价： 在相 同条 件下 进 行测 定时 ， 样 品溶液 中目 标物 与浓 度接 近的 定性用 标准 工作 溶液 中 的目标 物相 比 ， 色 谱峰 保 留时间 一致 （ 相对 误差 在 2.5% 之 内） 、 定 性离 子对 （至 少两 对） 一致 ， 且离 子对 丰 度比相 对偏 差不超 过表4规 定的 范围 ， 样品 空 白无干 扰， 则 可判 断样品 中检出 目标物 。 左 旋甲 基 苯丙胺 和右 旋甲 基苯 丙胺 的MRM 色谱 图参 见附 录C 。 表 4 离子 对丰 度比 的最 大允许 相对 偏差 范围 离子 对丰度比 50% 20%

26、 50% 10% 20% 1 0 % 最大允许相对偏差 20% 25% 30% 50% 阴性结 果评 价： 样品 溶液 中未检 出目 标物 特征 离 子 对， 定 性质 控标 准工 作溶 液中检 出目 标物 特征 离 子对， 标准 溶液 空白 无干 扰，则 可判 断样 品中 未检 出目标 物。 8.2 定量 结果 评价 8.2.1 相 对相 差检 验 平行称 取2 份样 品时 ， 测 定 数据按 照公 式（4） 计算 相 对相差 （RD ）。 12 100% - RD = （4 ） 式中： RD 相 对相 差， 用百 分比 （% ） 表示 ； 1 、 2 两份 样品 平行 定 量测定 的含 量

27、数 值； 两份 样品 平行 定量 测定 的含量 平均 值 ； 当 RD 10 % 时 ，数 据有 效 ； 当 RD 10% 时 ，需 要重 新检验 。 8.2.2 异 常值 检验 平行称 取6 份样 品时 ，测 定 数据按 照公 式（5） 进行Grubbs 可 疑值 判别 。 i0 i - G= s （5 ） 式中 ： i 可疑 值； 0 6 个 （5 个） 数据 的平 均值； s 6 个 （5 个） 数据 的单 次测定 标准 差； G i Grubbs 统 计值 。 当测定 次数n=6时，G 6 （95 ）=1.822 ； 当测 定次 数n=5时，G 5 （95 ）=1.672 。 G iG

28、 n （95 ） 时 ，数 据有 效 ，G i G n （95 ） 时， 应剔 除该 数 据 ，但 只能 剔除1个 数据 ， 否则本 次测 定无 效 ， 需要重 新检 验。 GA/T 8 8.2.3 定量 结 果计 算 平行称 取 2 份样 品时 ， 以 2 份样 品含 量测 定的 平均 值作为 定量 结果 。 平行称 取 6 份样 品时 ， 以 6 份（5 份 ） 样 品含 量测 定 的平均 值作 为定量 结 果。 8.3 结果 表述 阳性结 果应 表述 为： 从样 品中检 出 左 旋甲 基苯 丙胺/ 右旋甲 基苯 丙胺 成分 。含 量用百 分比 表示 。 阴性结 果应 表述 为： 从样 品

29、中未 检出 左旋 甲基 苯丙 胺/ 右旋 甲基 苯丙 胺 成 分。 8.4 测量 不确 定度 的评 定 与表述 如需提 供测 量不 确定 度， 定量结 果的 不确 定度 评定 与表述 按 GB/T 27418 执行。 GA/T 9 附 录A （资料 性 ） 化合物 信息 左 旋甲 基苯 丙胺 和 右 旋甲基 苯丙 胺 相 关信 息见 表 A.1 。 中文名称 英文名称 化学式 结构式 CAS 号 左旋甲基苯丙胺 S-(+)-Methamphetamine C10H15N CH 3 NHCH 3 537-46-2 右旋甲基苯丙胺 R-(-)-Methamphetamine C10H15N CH

30、3 NHCH 3 33817-09-3 GA/T 10 附录 B （资料 性 ） 外标单 点法 样品 提取 操作 参数 外标 单 点 法样 品提 取操 作参考 参数 见 表 B.1。 表B.1 外 标单 点法 样品 提取操 作参 考参 数 预分析含量 初次定容体积 mL 稀释倍数 外标单点法定量用 标准工作溶液浓度 mg/mL 50% 100% 20 21 0.1 30% 50% 20 11 0.1 10% 30% 10 11 0.1 5% 10% 30 - 0.1 2% 5% 20 - 0.1 1% 2% 10 - 0.1 0.1% 1% 10 - 0.01 GA/T 11 附录 C （资料

31、 性 ） 左旋甲 基苯 丙胺 和右 旋甲 基苯丙 胺 相 关谱 图 C.1 左旋 甲基 苯 丙 胺和 右 旋甲基 苯丙 胺 的 液相 色谱 图见图 C.1 图 C.2 。 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 min 0 50 100 150 200 250 mV 检测器 A:214nm 10.628 图C.1 左 旋甲 基苯 丙胺 液相色 谱图 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 min 0 50 100 150 200 mV 检测器 A:214nm 11.318 图C.2 右 旋甲 基苯 丙胺 液相色 谱图 C.2 左旋 甲基 苯丙 胺和 右 旋甲基 苯丙 胺 的 MRM 色 谱图 见 图 C.3 图 C.4 。 GA/T 12 图C.3 左 旋甲 基苯 丙胺MRM 色 谱图 图C.4 右 旋甲 基苯 丙胺MRM 色 谱图