GA T 1903-2021 法庭科学 生物检材中吗啡等29种毒品及代谢物筛选 液相色谱-质谱法.pdf
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1、 29 HHP ICS 13.310 CCS A 92 中 华 人 民 共 和 国 公 共 安 全 行 业 标 准 GA GA/T 法庭科学 生物检材 中吗啡等29 种 毒品 及代谢物 筛选 液相 色谱- 质谱 法 Forensic sciences Screening methods for 29 drugs and metabolites including morphine in biological samples LC-MS - 发布 - - 实施 中 华 人 民 共 和 国 公 安 部 发布 GA/T I 前 言 本文件 按 照 GB/T 1.1 2020 标 准化 工作 导则 第
2、 1 部分: 标准 化文 件的 结构 和起草 规则 的 规定 起草。 请注意 本文 件的 某些 内容 可能涉 及专 利 。 本文 件的 发布机 构不 承担 识别 专利 的责任 。 本 文件 由全 国刑 事技 术标 准化技 术委 员会 毒物 分析 分技术 委员 会 (SAC/TC 179/SC 1 ) 提 出并归口。 本 文件 起草 单位 : 公 安部 物证鉴 定中 心 、 江苏 省南 京市公 安局 禁毒 支队 、 广 西壮族 自治 区公 安厅 刑 事侦查 总队 、 广 东省 公安 厅刑事 技术 中心 、 深 圳市 公 安局 刑 警 支队 、 重 庆市 公安局 物证 鉴定 中心 、 上 海 市公
3、安 局物 证鉴 定中 心 、 中国人 民公 安大 学 、 济 宁 市公安 局刑 事科 学技 术研 究所 、 杭 州市 公安 局刑 事 科 学技术 研究 所 。 本 文件 主要 起草 人: 常靖 、 宋歌 、 王 瑞花 、 张 忠辉 、 黄克 建、 裴茂 清、 李树 辉、贺剑 锋 、石 银涛 、 梁晨、 王爱 华、 张云 峰、 于忠山 、 王 继芬 、刘晓 锋 、张亮 、汪 蓉、 曲筱 静、 应剑波 、洪 亮 。 GA/T 1 法庭科学 生 物检 材中吗啡 等 29 种 毒品 及代 谢物筛选 液相色谱- 质谱 法 1 范围 本 文件 规定 了 法 庭科 学 生 物检材(血 液、尿 液) 中吗啡
4、等 29 种 毒品 的液相 色谱- 质谱筛 选方 法。 本 文件 适用 于 法 庭科 学 生 物检材(血 液、 尿液) 中29 种 毒品 的定 性分 析 。 其 他 检材可 参照 使用 。 2 规范 性引 用文 件 下列文 件中 的内 容通 过文 中的规 范性 引用 而构 成本 文件必 不可 少的 条款 。 其 中 , 注日 期的 引用 文件, 仅该日 期对 应的 版本 适用 于本文 件; 不注 日期 的引 用文件 , 其 最新 版本 (包 括所有 的修 改单 ) 适 用于 本 文件。 GB/T 6682 分析 实验室 用 水规格 和试 验方 法 GA/T 122 毒 物分 析名 词术 语 3
5、 术语 和定 义 、 缩略 语 3.1 术 语和 定义 GA/T 122 界 定的 术语 和定 义适用 于本 文件 。 3.2 缩 略语 下列缩 略语 适用 于本 文件 。 LC-TQ/MS : 液 相 色 谱- 三 重 四 极 杆 质 谱 (liquid chromatography-triple quadrupole tandem mass spectrometry ) LC-HRMS : 液相 色谱- 高 分辨质 谱 (Liquid chromatography-high resolution mass spectrum ) 4 原理 以空白 样品 和 添 加样 品作 对照, 按平 行操
6、 作的 要求 , 对生 物检 材样品 中29 种 毒品 ( 详见 附录A ) 进 行提取 、 净化 及浓 缩 , 采用 液相色谱- 三 重四 极串 联质谱 (LC-TQ/MS ) 和液 相色 谱- 高分 辨质 谱(LC-HRMS) 检测。 5 试剂 和材 料 5.1 试剂 实验用 水应 符合GB/T 6682 中规定 的一 级水 。除 非另 有说明 ,在 分析 中使 用的 试剂均 为色谱 纯 ,试 剂包括 : a) 甲醇; b) 乙腈; c) 5mmol/L 甲酸 铵溶 液 (pH 值 3) : 称 取甲 酸 铵 0.315g , 加 水溶 解 后 , 再加 入 800L 甲酸 , 用水GA/
7、T 2 定容 至 1000mL ,混匀 ; d) 0.1% 氨 水溶 液 : 准确 移取 浓氨水 (质量 分数为 25%28% )0.5mL ,加 水溶 解定 容至 1000mL , 混匀。 e) 标准溶 液: 1) 1.0mg/mL 标准储备 液 : 根据标准物质纯度和盐型换算后,分别用乙腈 配制 29 种 毒 品 1.0mg/mL 标准 溶液 , 或 采 用市售 标准 溶液 ,密 封,-18以 下保 存 , 有效 期 12 个月; 2) 0.01mg/mL 单一 标准 工作 溶液: 准确 移 取 29 种毒 品 标准储备 液, 分 别用 乙腈 配制成 浓度 为 0.01mg/mL 单 一标
8、 准工 作溶液 , 密封 ,04 保存 , 有效 期 3 个月 ; 实 验 中所用 其他 浓度的 单一 标准 工作 溶液 均由 0.01mg/mL 标准 工作 溶液稀 释得 到 ; 3) 串联质 谱 质 控标 准 工 作溶液 (10ng/mL ) : 准确 移取 9 种 ( 吗啡 、 甲 基苯 丙胺 、 甲卡西 酮、 美沙酮 、可 卡因 、四 氢大 麻酸、 地芬 诺酯 、舒 芬太 尼、BZP )毒 品的 单一 标 准工作 溶液 , 用乙腈/ 水 ( 体积 比 1:1 ) 配 制成 浓度 为 10ng/mL 混合 标准 溶液 ,现用 现配 ; 4) 高分辨 质谱 质控 标准 工作 溶液 (100
9、ng/mL ) : 准 确移 取 9 种( 吗啡 、 甲 基苯 丙 胺、 甲卡 西 酮、 美 沙酮、 可卡 因、 四 氢大麻 酸、 地芬 诺酯、 舒 芬太尼 、BZP ) 毒品 的单一 标准 工作 溶 液,用 乙腈/ 水( 体积 比 1:1 )配制 成 浓度 为 100ng/mL 混合 标 准溶 液, 现用 现配 。 注 1 :可根据实际情况, 调整 质控标准溶 液中毒品的种类 和数量; 注 2 :四氢大麻酚和四氢大麻 酸标准溶液应避光保存 。 5.2 材料 材料包 括 : a) 具盖离 心管 ; b) 具塞玻 璃试 管 ; c) 有机微 孔滤 膜:0.22 m ; d) 固相萃 取柱 :Oa
10、sis PRIME HLB 柱 或等 效固 相萃 取 柱。 注:Oasis PRIME HLB柱是Waters 公司产品的商品名称,给出 这一信息是为了方便本标准的使用者,并不是 表示对该产品的认可。如果 其他等效产品具有相同的效果,则可使用这些等效产品 。 6 仪器 和设 备 仪器和 设备 包括 : a) 液相 色谱- 三重 四极 杆质 谱 仪 : 配有 电喷 雾离 子源 (ESI )和 三 重 四 极 杆质 量 分析器 ; b) 液相 色谱- 高分 辨 质 谱仪 :配有 电喷 雾离 子源 (ESI )和高 分辨 质量 分析 器 ; c) 振荡 器 ; d) 分析 天平 :分 度值 d0.0
11、1mg; e) 离心 机 ; f) 移液 器 ; g) 浓缩 器 。 7 操作 方法 7.1 样品 前 处理 7.1.1 固相 萃取 法 GA/T 3 移取 尿液 或 血液 等液 体 检材 样 品0.5mL , 于 具盖 离心 管 中。 加 入乙 腈3mL ,用 振 荡器 振 荡10min , 以 不低 于8000r/min离心20min , 取上 清液转 移至 固相萃 取柱 中,控 制上 清液过柱 流速 低于1.0mL/min , 收集过滤 液 于具 塞玻 璃试 管中 , 置 于浓 缩器 上50 浓缩至 近干, 残留 物 用 乙 腈/水 ( 体积 比1:1)0.5mL 溶解, 经有 机微 孔
12、滤 膜过 滤, 作 为检 材样 品提 取液 ,供仪 器检 测。 7.1.2 沉淀 蛋白 法 移取尿 液 或 血液 等液 体检 材样 品 0.5mL , 于具 盖离 心管中 。加 入乙腈 3mL , 用振荡 器振 荡 10min , 以不低 于 8000r/min 离心 20min , 收集 上清 液 于 具塞 玻璃试 管中 , 置 于浓 缩器 上 50 浓缩 至 近 干, 残留 物用乙腈/ 水( 体积 比1:1 )0.5mL 定容 , 经有 机微 孔滤膜 过滤 ,作 为检 材样 品提取 液, 供仪 器检 测。 7.1.3 空白 样品 和添 加样 品 取与检 材样 品等 量的 相似 基质空 白样
13、 品 , 与检 材样 品 平行操 作, 得到 空白 样品 提 取液, 供仪 器检 测。 再取与 检材 样品 等量 的相 似基质 空白 样品 , 添 加标 准物质 溶液 (LC-TQ/MS 检 测时, 添加 标准 溶液,使 样品中 可卡 因 、 舒 芬太 尼 、 甲 基苯 丙胺 、 卡 西酮 、 美沙酮 、 地芬 诺酯 、 吗啡、BZP 、 四 氢大 麻酸 的浓 度 为10ng/mL ,LC-HRMS 检测 时 ,添 加标 准溶液 , 使样 品 中 可 卡因 、舒 芬太 尼、 甲 基苯 丙胺 、 卡 西酮 、 美沙酮 、 地 芬诺 酯、 吗啡 、 BZP 、 四 氢大 麻 酸 的浓 度为100n
14、g/mL ) 作 为添 加样 品 , 与检 材样 品平 行操 作, 得到添 加样 品提 取液 ,供 仪器检 测。 注: 可根据实际情况, 调整添加样品中毒品的数量和种类。 7.2 仪 器检 测 7.2.1 仪器 条件 7.2.1.1 液 相色 谱- 三 重四 极串联 质谱 仪条 件 以 下为 参考 条件 : a) 色谱柱 :ACQUITY UPLC HSS C 18 柱,(2.1mm 150mm, 1.8 m) 或其 他等 效柱 ; 注:ACQUITY UPLC HSS C18 为 Waters 公司产品的商品名称,给出这一信息是为了方便本标准的使用者,并不是 表示对该产品的认可。如果其他等效
15、产品具有相同的效果,则可使用这些等效产品。 b) 柱温:40 ; c) 流动 相 A :乙 腈; d) 流动 相 B :5mmol/L 甲酸 铵溶液 (对 于疑 似吗 啡样 品,宜 将流 动 相 B 更换 为 0.1% 氨 水溶 液进 样分析 ) ; e) 流速:0.4mL/min ; f) 进样体 积 :1L2L ; g) 洗脱: 梯度 洗脱 ,梯 度洗 脱 条件 见表 1; h) 扫描方 式: 正负 离子 同时 扫描; i) 检测方 式: 多反 应监 测; j) 电喷雾 电压 :5500V (-4500V ); k) 离子源 温度 :550 ; l) 雾化气 压力 :55psi ; m)
16、气帘气 压力 :35psi ; n) 辅助气 压力 :60psi ; o) 离子对 和去 簇电 压 、 碰撞 能 量条件 参 见附录 B 。 GA/T 4 表1 梯 度洗 脱条 件 时间 min 流动相A 流动相B 0.0 13% 87% 0.5 13% 87% 10 50% 50% 10.7 90% 5% 12.25 90% 5% 12.5 13% 87% 15.0 13% 87% 7.2.1.2 液 相色 谱- 高 分辨 质谱仪 条件 以 下为 参考 条件 : a) 色谱柱 :ACQUITY UPLC HSS C 18 柱,(2.1mm 150mm, 1.8 m) 或其 他等 效柱 ; 注
17、:ACQUITY UPLC HSS C18 为 Waters 公司产品的商品名称,给出这一信息是为了方便本标准的使用者,并不是 表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果,则可使用这些等效产品。 b) 柱温:40 ; c) 流动 相 A :乙 腈; d) 流动 相 B :5mmol/L 甲酸 铵溶液 (对 于疑 似吗 啡样 品,宜 将流 动 相 B 更换 为 0.1% 氨 水溶 液进 样分析 ) ; e) 流速:0.4mL/min ; f) 进样体 积 :1 L2 L ; g) 洗脱: 梯度 洗脱 ,梯 度洗 脱条件 见 表 1; h) 电喷雾 电压 :0.8kV ; i) 雾化气 :
18、氮 气,800L/h ; j) 锥孔反 吹气 流速 :氮 气,20L/h ; k) 离子源 温度 :150 ; l) 脱溶剂 温度 :4 5 0 ; m) 碰撞气 :氩 气; n) 扫描范 围:50m/z 600m/z ; o) 扫描时 间 :0.1s ; p) 碰撞能 范围 :10ev40ev ; q) 保留时 间 、 一级 离子 、二 级离子 参见附录 C 。 7.2.2 进样 分 别吸 取空 白溶 剂、 检材 样品提 取液 、 空 白 样 品提 取液 、 添加 样品 提取 液、 质控标准 溶液,按7.2.1 仪器条 件进 样分 析。 进样 顺 序和进 样次 数应 确保 结果 有效。 若质
19、 控标 准溶 液不 包 含检材 中检 出的 目标 物, 需吸取 相应 目标 物的 标准 工作溶 液, 按7.2.1 仪 器条 件进样 分析 。 8 结果 评价 GA/T 5 8.1 阳性 结果 评价 8.1.1 三 重四 极串 联质谱 结果评 价 在相同 条件 下进 行 测 定时 , 检材 样品 中目 标物 的色 谱峰保 留时 间与 标准 物质 工作溶 液一 致 ( 相对误 差在 2.5% 之 内 ) 、 目 标物 的 两对 定性 离子 对与 标准 工作溶 液一 致 , 且 离子 对 丰度比与 浓度 接 近的 标准 物质工 作溶 液相比, 相 对 偏差不 超过 表 3 规定 的范 围, 空白
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