DB4228 T 57-2021 甘薯脱毒种薯规范化生产技术规程.pdf

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1、ICS 65.020.01B23 DB4228恩 施 土 家 族 苗 族 自 治 州 地 方 标 准DB 4228/T 57 2021甘 薯 脱 毒 种 薯 规 范 化 生 产 技 术 规 程 Technical specification for standardized productionof virus-free tubers of sweet potato 2021 -01- 28发 布 2021- 04-28实 施恩 施 土 家 族 苗 族 自 治 州 市 场 监 督 管 理 局 发 布 DB4228/T 572021 I 目 录前 言 .II1 范 围 .12 规 范 性 引 用

2、 文 件 .13 术 语 和 定 义 .14 脱 毒 组 培 苗 快 繁 .25 水 培 壮 苗 生 产 .36 原 原 种 生 产 .47 原 种 生 产 .5 8 生 产 用 种 生 产 .5附 录 A（ 资 料 性 附 录 ） MS 培 养 基 贮 备 液 的 配 制 .6附 录 B（ 资 料 性 附 录 ） 水 培 营 养 液 贮 备 液 的 配 制 .7 DB4228/T 572021 II 前 言本 标 准 按 GB/T 1.1-2020给 出 的 规 则 起 草 。本 标 准 附 录 A、 附 录 B为 资 料 性 附 录 。本 标 准 由 恩 施 土 家 族 苗 族 自 治 州

3、 农 业 科 学 院 提 出 并 归 口 管 理 。本 标 准 主 要 起 草 单 位 ： 恩 施 土 家 族 苗 族 自 治 州 农 业 科 学 院 、 湖 北 恩 施 中 国 南 方 马 铃 薯 研 究 中 心 、 恩施 土 家 族 苗 族 自 治 州 农 业 技 术 推 广 中 心 、 湖 北 清 江 种 业 有 限 责 任 公 司 、 来 凤 三 丰 时 代 农 业 有 限 公 司 、 巴东 县 神 峰 薯 业 开 发 有 限 公 司 。本 标 准 主 要 起 草 人 ： 程 群 、 瞿 勇 、 徐 怡 、 陈 巧 玲 、 叶 兴 枝 、 沈 艳 芬 、 高 剑 华 、 李 求 文 、

4、 杨 国 才 、 郝苗 、 宋 威 武 、 王 甄 、 张 等 宏 、 闫 雷 、 陈 火 云 、 陈 家 吉 、 杨 晓 华 、 张 良 、 尹 鑫 、 谷 勇 、 赵 锦 慧 、 李 雪 晴 、曾 珍 。 DB4228/T 572021 1 甘 薯 脱 毒 种 薯 规 范 化 生 产 技 术 规 程1范 围 本 规 程 规 定 了 甘 薯 脱 毒 组 培 苗 的 术 语 及 定 义 、 脱 毒 组 培 苗 快 繁 、 水 培 壮 苗 生 产 、 原 原 种 生 产 、 原 种生 产 及 生 产 用 种 生 产 等 。本 规 程 适 用 于 恩 施 州 甘 薯 脱 毒 种 薯 的 标 准 化

5、 生 产 。2规 范 性 引 用 文 件下 列 文 件 对 于 本 标 准 的 应 用 是 必 不 可 少 的 。 凡 是 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 仅 所 注 日 期 的 版 本 适 用 于 本 标准 。 凡 是 不 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 其 最 新 版 本 （ 包 括 所 有 的 修 改 单 ） 适 用 于 该 标 准 。 GB 5084 农 田 灌 溉 水 质 标 准GB 15618 土 壤 环 境 质 量 标 准NY/T 402 脱 毒 甘 薯 种 薯 （ 苗 ） 病 毒 检 测 技 术 规 程NY/T 1200 甘 薯 脱 毒 种 薯NY/T 3537 甘 薯

6、 脱 毒 种 薯 （ 苗 ） 生 产 技 术 规 程3术 语 及 定 义下 列 术 语 和 定 义 适 用 于 本 文 件 。3.1脱 毒 组 培 苗 virus-free tissue culture plant简 称 脱 毒 苗 ， 是 应 用 茎 尖 组 织 培 养 技 术 获 得 的 、 经 检 测 确 认 不 带 甘 薯 羽 状 斑 驳 病 毒 （ Sweet potatofeathery mottle virus, SPFMV） 、 甘 薯 潜 隐 病 毒 (Sweet potato latent virus, SPLV)、 甘 薯 黄 矮 病 毒 （ Sweet potato y

7、ellow dwarf virus C, SPYDV） 、 甘 薯 明 脉 病 毒 （ Sweet potato veinc-learing virus G, SPVCV） 、 甘薯 轻 斑 驳 病 毒 （ Sweet potato mild mottle virus, SPSMV） 的 试 管 苗 。3.2水 培 壮 苗 hydroponic seedling脱 毒 组 培 苗 切 段 在 温 室 扦 插 成 活 ， 剪 取 其 主 茎 及 侧 枝 两 叶 一 心 扦 插 成 活 的 苗 。3.3脱 毒 种 薯 virus-free seed roots从 繁 殖 脱 毒 苗 开 始 ， 通

8、 过 生 产 水 培 苗 经 逐 代 繁 殖 增 加 种 薯 数 量 的 种 薯 生 产 体 系 生 产 出 来 的 各 级 种 薯 。脱 毒 种 薯 分 为 原 原 种 、 原 种 和 生 产 用 种 。3.4 原 原 种 pre-elite利 用 组 培 苗 及 水 培 苗 在 温 室 条 件 和 60 目 防 虫 网 室 下 生 产 的 符 合 NY/T 1200 的 种 薯 。 3.5 原 种 elite DB4228/T 572021 2 用 原 原 种 作 种 薯 ， 在 大 于 500m 隔 离 条 件 下 生 产 的 符 合 NY/T 1200 的 种 薯 。3.6 生 产 用

9、 种 certified seed用 原 种 作 种 薯 ， 在 大 于 500m 隔 离 条 件 下 生 产 出 的 符 合 NY/T 1200 的 种 薯 。4脱 毒 组 培 苗 快 繁4.1外 植 体 处 理选 择 经 过 品 种 登 记 且 适 宜 本 地 区 大 面 积 推 广 的 高 产 优 质 或 具 有 区 域 特 殊 用 途 的 甘 薯 品 种 ， 质 量 符 合NY/T 1200 的 要 求 。 将 选 取 的 薯 块 在 温 室 育 苗 ， 当 苗 高 20 cm 左 右 ， 选 取 茎 顶 端 2 cm 长 芽 段 ， 剪 去 肉眼 可 见 叶 片 ， 用 自 来 水

10、冲 洗 30 min， 经 70%酒 精 浸 泡 25 s， 再 用 0.1%氯 化 汞 溶 液 消 毒 30 s ， 5%次 氯酸 钠 溶 液 消 毒 处 理 10 min， 无 菌 水 冲 洗 3 遍 。 4.2茎 尖 分 生 组 织 培 养4.2.1培 养 基 的 制 备在 每 l000 ml MS培 养 基 (见 附 录 A)中 加 GA3 0.5 mg、 6-BA 0.5 mg、 IAA 0.1 mg分 装 入 管 。4.2.2茎 尖 拨 离 接 种在 超 净 工 作 台 上 体 视 显 微 镜 下 用 手 术 刀 等 工 具 剥 去 幼 叶 ， 切 取 带 l 2个 叶 原 基 （

11、 约 0.2mm 0.4mm）的 茎 尖 ,接 种 到 MS加 激 素 的 培 养 基 试 管 中 ， 每 管 放 1个 茎 尖 ， 注 明 品 种 ， 茎 尖 号 ， 接 种 日 期 。4.2.3组 织 培 养在 温 度 28 、 光 照 16h/d、 光 照 强 度 2000 3000Lx的 条 件 下 培 养 。 25d后 茎 尖 愈 伤 组 织 形 成 ， 转 入 广口 瓶 MS无 激 素 培 养 基 上 继 续 培 养 50d 60d， 当 幼 苗 长 出 5 7片 叶 时 ， 进 行 扩 繁 。 4.3病 毒 检 测采 用 症 状 学 诊 断 法 、 酶 联 免 疫 吸 附 检 测

12、 法 、 指 示 植 物 检 测 法 检 测 病 毒 ， 根 据 检 测 结 果 出 具 检 验 报 告 ，脱 毒 组 培 苗 未 检 出 甘 薯 羽 状 斑 驳 病 毒 （ SPFMV） 、 甘 薯 潜 隐 病 毒 (SPLV)、 甘 薯 黄 矮 病 毒 （ SPYDV） 、甘 薯 明 脉 病 毒 （ SPVCV） 、 甘 薯 轻 斑 驳 病 毒 （ SPSMV） 等 病 毒 则 批 准 进 行 组 培 苗 生 产 。4.3.1 目 测 法先 用 症 状 学 诊 断 法 全 面 观 察 组 培 茎 尖 苗 的 长 势 长 相 ,将 长 势 弱 ,叶 片 黄 化 、 黄 脉 和 花 叶 等 症

13、 状 明 显 的带 毒 苗 淘 汰 去 除 。4.3.2酶 联 免 疫 吸 附 检 测 法当 单 株 的 试 管 苗 长 至 展 开 叶 达 6片 以 上 时 检 测 ， 按 株 取 其 上 、 中 、 下 部 叶 片 用 于 酶 联 免 疫 吸 附 检 测 。用 酶 联 免 疫 检 测 法 初 检 后 ， 淘 汰 显 阳 性 反 应 的 单 株 。 检 测 方 法 参 照 NY/T 402执 行 。 4.3.3指 示 植 物 检 测 法通 过 酶 联 免 疫 检 测 的 健 康 植 株 继 续 扩 繁 ， 再 用 指 示 植 物 检 测 法 将 生 长 可 疑 的 茎 尖 苗 嫁 接 在 巴

14、 西 牵 牛上 ， 15 d后 观 察 结 果 。 检 测 方 法 参 照 NY/T 402中 指 示 植 物 检 测 法 进 行 。 DB4228/T 572021 3 4.3.4脱 毒 苗 复 检随 机 抽 取 1 % 2 %脱 毒 试 管 苗 再 次 检 测 ， 经 酶 联 免 疫 法 检 测 淘 汰 阳 性 反 应 株 后 ， 再 经 指 示 植 物 检测 确 无 症 状 后 ， 可 用 于 扩 大 繁 殖 ， 检 测 方 法 参 照 NY/T 402测 定 。继 代 扩 繁 中 选 的 脱 毒 苗 ， 每 年 至 少 作 一 次 病 毒 复 检 。4.4组 培 苗 继 代 增 殖 培

15、 养经 过 病 毒 检 测 无 病 毒 的 试 管 苗 ， 在 无 菌 条 件 下 按 1叶 1节 切 段 ， 移 入 装 有 MS培 养 基 的 广 口 瓶 中 ， 在 温度 28 ， 光 照 16h/d， 光 照 强 度 2000 3000Lx条 件 下 培 养 。 经 3d 5d腋 芽 萌 发 ， 30d后 长 成 5 7片 叶 的 成苗 。 可 以 连 续 切 段 增 殖 培 养 ， 繁 殖 系 数 3 5倍 。5 水 培 壮 苗 生 产 5.1温 室 消 毒用 二 氧 化 氯 消 毒 剂 对 整 个 温 室 熏 蒸 ， 视 温 室 大 小 设 点 ， 工 作 浓 度 1500 mg/

16、L， 熏 蒸 点 分 布 均 匀 ， 离地 面 高 度 1.5m。5.2炼 苗筛 选 生 根 好 、 生 长 健 壮 的 甘 薯 脱 毒 组 培 苗 放 在 经 过 消 毒 的 防 虫 温 室 ， 于 室 温 、 自 然 光 下 炼 苗 2d 3 d。5.3水 培 苗 扦 插5.3.1水 培 前 准 备用 长 1.3m、 宽 1.0 m、 高 0.05m 的 塑 料 盘 作 栽 培 盘 ， 每 盘 加 入 30L 35L营 养 液 ， 营 养 液 上 放 置 泡沫 塑 料 板 ， 泡 沫 塑 料 板 按 照 3cm 4cm 打 孔 。 5.3.2扦 插5.3.2.1 诱 导 根 原 始 体 形

17、 成将 炼 苗 后 的 脱 毒 组 培 苗 从 组 培 瓶 中 取 出 ， 保 留 原 有 根 系 2cm 3cm， 用 纯 净 水 冲 洗 掉 残 留 培 养 基 ， 再将 组 培 苗 栽 于 泡 沫 板 上 ， 水 培 盘 中 加 入 营 养 液 诱 导 根 原 始 体 形 成 ， 将 栽 好 的 水 培 苗 置 于 温 度 为 24 28 温 室 中 ， 自 然 光 散 射 ， 5d 7d出 现 根 原 始 体 。 营 养 液 配 置 参 见 附 录 B表 一 。5.3.2.2生 根 培 养水 培 苗 根 原 始 体 形 成 后 ， 将 诱 导 根 原 始 体 的 营 养 液 换 成 生

18、 根 营 养 液 ， 置 于 温 度 24 28 温 室 中 ，自 然 光 散 射 ， 7d 10d水 培 苗 新 生 根 系 长 度 达 到 2 cm 3cm。 营 养 液 配 置 见 参 见 附 录 B表 二 。5.3.2.3生 长 培 养水 培 苗 新 生 根 系 达 到 2 cm 3cm， 将 生 根 营 养 液 换 成 继 代 增 殖 生 长 营 养 液 。 营 养 液 配 置 参 见 附 录 B 表 三 。5.3.2.4增 殖 扩 繁水 培 苗 在 防 虫 温 室 培 养 11d 13d， 长 到 15cm 18cm时 ， 可 以 剪 成 2叶 节 扦 插 ， 以 苗 繁 苗 。

19、剩 余 茎 段继 续 培 养 于 生 长 营 养 液 中 ， 15d以 后 再 次 剪 苗 扩 繁 。 DB4228/T 572021 4 5.3.3病 毒 检 测按 NY/T 1200的 要 求 执 行 。6原 原 种 生 产用 脱 毒 水 培 苗 在 60目 以 上 网 室 内 隔 离 栽 培 。6.1扦 插6.1.1 基 质以 蛭 石 、 珍 珠 岩 混 合 基 质 为 好 ， 混 合 比 例 2： 1， 混 合 硫 酸 钾 复 合 肥 N:P:K=15:15:15， 并 充 分 吸 水 ，将 混 合 基 质 装 入 适 宜 规 格 的 育 苗 盘 。 每 季 种 薯 收 后 基 质 应

20、 严 格 烘 炒 消 毒 ， 一 般 可 反 复 使 用 3 4 年 。 6.1.2 苗 床 准 备在 网 室 内 用 砖 砌 成 宽 1m、 深 25cm的 苗 床 ， 底 覆 一 层 无 防 布 ， 上 铺 一 层 蛭 石 基 质 ， 厚 度 约 20 cm。6.1.3定 植当 扩 繁 水 培 苗 长 到 12cm 15cm时 ， 按 20cm 25cm规 格 定 植 ， 定 植 前 剪 掉 部 分 根 须 ， 保 留 须 根 3cm5cm。6.3管 理定 植 后 早 晚 喷 水 湿 润 ， 阴 雨 天 少 浇 或 不 浇 ， 水 质 应 符 合 GB 5084规 定 。 晴 天 需 遮

21、阳 ， 定 植 7d 10d水 培 苗 长 出 新 根 后 ， 不 再 遮 阳 。6.4 病 虫 害 防 治 防 治 对 象 、 时 期 按 NY/T 1200执 行 。 发 现 病 株 连 同 薯 块 拔 除 ， 带 出 网 室 外 销 毁 。6.5 原 原 种 收 获当 地 温 稳 定 在 14 16 时 收 获 ， 收 获 时 避 免 机 械 损 伤 和 品 种 混 杂 。 收 后 摊 晾 4d 7d， 剔 除 烂 薯 、病 薯 、 伤 薯 及 杂 物 。6.6 病 毒 检 测按 照 NY/T 1200中 第 6条 试 验 方 法 进 行 检 测 ， 并 符 合 NY/T 1200中 第

22、 5条 的 要 求 。7原 种 生 产7.1生 产 环 境 选 用 检 验 合 格 的 原 原 种 生 产 原 种 。 宜 选 择 海 拔 1200 m以 下 土 层 深 厚 ， 疏 松 肥 沃 的 中 性 或 微 酸 性 壤 土或 沙 壤 土 ， 土 壤 环 境 应 符 合 GB 15618要 求 。 选 择 至 少 3年 以 上 没 种 过 甘 薯 的 田 块 ， 且 500m以 内 无 甘 薯 种植 。7.2生 产 方 法 DB4228/T 572021 5 按 NY/T 3537中 第 8条 脱 毒 种 薯 （ 苗 ） 生 产 规 定 执 行 。7.3 田 间 管 理常 规 肥 水 管

23、 理 ， 及 时 中 耕 除 草 。 病 虫 害 防 治 按 NY/T 1200执 行 。7.4 病 毒 检 测按 照 NY/T 1200中 第 6条 试 验 方 法 进 行 检 测 ， 并 符 合 NY/T 1200中 第 5条 的 要 求 。8 生 产 用 种 生 产8.1 生 产 要 求选 用 检 验 合 格 的 原 种 进 行 生 产 。 宜 选 择 海 拔 1200m以 下 土 层 深 厚 ， 疏 松 肥 沃 的 中 性 或 微 酸 性 壤 土 或 沙 壤 土 ， 土 壤 环 境 符 合 GB 15618规 定 ， 选 择 无 病 田 块 ， 且 500 m以 内 无 甘 薯 种 植

24、 的 空 间 隔 离 条 件 。8.2 生 产 方 法执 行 NY/T 3537第 8条 脱 毒 种 薯 （ 苗 ） 生 产 规 定 。8.3 田 间 管 理常 规 肥 水 管 理 ， 及 时 中 耕 除 草 。 病 虫 害 防 治 按 NY/T 1200执 行 。8.4 病 毒 检 测按 照 NY/T 1200中 第 6条 试 验 方 法 进 行 检 测 ， 并 符 合 NY/T 1200中 第 5条 的 要 求 。 DB4228/T 572021 6 附 录 AMS培 养 基 贮 备 液 的 配 制贮 备 液 成 分 用 量 （ mg/l) 每 升 培 养 基 取 用 量 (ml)A 硝

25、酸 铵 (NH4NO3)硝 酸 钾 (KNO 3)磷 酸 二 氢 钾 (KH2PO4)硫 酸 镁 (MgSO4 7H2O)氯 化 钙 (CaCl2) 1650019000170037003330 100B 硫 酸 亚 铁 (FeSO4 7H2O)乙 二 胺 四 乙 酸 二 钠 (Na 2 EDTA) 55707450 5C 碘 化 钾 (KI)钼 酸 钠 (Na2MoO4 2H2O)硫 酸 铜 (CuSO4 5H2O)氯 化 钴 (CoCl2 6H2O)硫 酸 锰 (MnSO 4 4H2O)硫 酸 锌 (ZnSO4 7H2O)硼 酸 (H3BO3) 8302502525223008600620

26、0 1D 盐 酸 硫 胺 素 (VB1)盐 酸 吡 哆 素 (VB6)甘 氨 酸烟 酸肌 醇 2010040010020000 5注 ： 在 配 制 贮 备 液 A 时 ， 最 后 加 氯 化 钙 ； 在 配 制 贮 备 液 B 时 ， 分 别 溶 解 FeSO4 7H2O和 Na2 EDTA在 各自 的 450 ml 蒸 馏 水 中 ， 适 当 加 热 并 不 停 搅 拌 。 然 后 将 两 种 溶 液 混 合 在 一 起 ， pH值 到 5.5， 最 后 加 蒸 馏 水 定 容 到 1000 ml。 培 养 基 pH值 5.8。 DB4228/T 572021 7 附 录 B水 培 营 养

27、 液 贮 备 液 的 配 制表 一 诱 导 根 原 始 体 形 成 营 养 液 贮 备 液 的 配 制贮 备 液 成 分 用 量 （ mg/l) 每 10升 营 养 液 取 用 量 (ml)A 硝 酸 铵 (NH 4NO3)硝 酸 钾 (KNO3)磷 酸 二 氢 钾 (KH2PO4)硫 酸 镁 (MgSO4 7H2O)无 水 氯 化 钙 (CaCl2) 1650019000170037003330 50B 硫 酸 亚 铁 (FeSO 4 7H2O)乙 二 胺 四 乙 酸 二 钠 (Na2 EDTA) 55707450 10表 二 生 根 营 养 液 贮 备 液 的 配 制贮 备 液 成 分 用

28、 量 （ mg/l) 每 10升 营 养 液 取 用 量 (ml)A 硝 酸 铵 (NH 4NO3)硝 酸 钾 (KNO3)磷 酸 二 氢 钾 (KH2PO4)硫 酸 镁 (MgSO4 7H2O)无 水 氯 化 钙 (CaCl2) 1650019000170037003330 250B 硫 酸 亚 铁 (FeSO 4 7H2O)乙 二 胺 四 乙 酸 二 钠 (Na2 EDTA) 55707450 10 DB4228/T 572021 8 C 碘 化 钾 (KI)钼 酸 钠 (Na2MoO4 2H2O)硫 酸 铜 (CuSO4 5H2O)氯 化 钴 (CoCl2 6H2O)硫 酸 锰 (MnS

29、O4 4H2O)硫 酸 锌 (ZnSO4 7H2O)硼 酸 (H3BO3) 83025025252230086006200 3表 三 继 代 增 殖 营 养 液 贮 备 液 的 配 制贮 备 液 成 分 用 量 （ mg/l) 每 10升 营 养 消 夜 取 用 量 (ml) A 硝 酸 铵 (NH4NO3)硝 酸 钾 (KNO3)磷 酸 二 氢 钾 (KH2PO4)硫 酸 镁 (MgSO4 7H2O)无 水 氯 化 钙 (CaCl2 2H2O) 1650019000170037003330 500B 硫 酸 亚 铁 (FeSO4 7H2O)乙 二 胺 四 乙 酸 二 钠 (Na2 EDTA) 55707450 30C 碘 化 钾 (KI)钼 酸 钠 (Na 2MoO4 2H2O)硫 酸 铜 (CuSO4 5H2O)氯 化 钴 (CoCl2 6H2O)硫 酸 锰 (MnSO4 4H2O)硫 酸 锌 (ZnSO4 7H2O)硼 酸 (H 3BO3) 83025025252230086006200 5_