DB3401 T 231-2021 生态环境检测实验室标准菌株管理规范.pdf

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1、ICS 13.020.01CCS Z 00 3401安 徽 省 合 肥 市 地 方 标 准DB 3401/T 231 2021生 态 环 境 检 测 实 验 室 标 准 菌 株 管 理 规 范 2021 -06- 29发 布 2021- 06-29实 施合 肥 市 市 场 监 督 管 理 局 发 布 DB 3401/T 231 2021 I 目 次前 言 .II1 范 围 .12 规 范 性 引 用 文 件 .13 术 语 和 定 义 .14 一 般 要 求 .2人 员 .2场 所 与 设 备 .2安 全 防 护 .2 记 录 .25 管 理 流 程 .2流 程 概 述 .2采 购 .2验 收

2、 .2保 藏 .2期 间 核 查 .2制 备 .3销 毁 .4附 录 A（ 资 料 性 ） 菌 株 的 代 数 、 使 用 类 型 、 继 承 关 系 .5附 录 B（ 规 范 性 ） 标 准 菌 株 管 理 流 程 .6附 录 C（ 资 料 性 ） 记 录 表 .7 附 录 D（ 规 范 性 ） 标 准 储 备 菌 株 制 备 流 程 . 12附 录 E（ 规 范 性 ） 储 备 菌 株 制 备 流 程 .13附 录 F（ 规 范 性 ） 工 作 菌 株 制 备 流 程 .14 DB 3401/T 231 2021 II 前 言本 文 件 按 照 GB/T 1.1 2020 标 准 化 工

3、作 导 则 第 1部 分 ： 标 准 化 文 件 的 结 构 和 起 草 规 则 的 规 定起 草 。请 注 意 本 文 件 的 某 些 内 容 可 能 涉 及 专 利 。 本 文 件 的 发 布 机 构 不 承 担 识 别 专 利 的 责 任 。本 文 件 由 合 肥 市 生 态 环 境 局 提 出 并 归 口 。本 文 件 起 草 单 位 ： 安 徽 海 峰 分 析 测 试 科 技 有 限 公 司 、 中 国 建 材 检 验 认 证 集 团 安 徽 有 限 公 司 、 合 肥 市环 境 监 测 中 心 站 、 肥 西 县 环 境 监 测 站 、 安 徽 国 测 检 测 技 术 有 限 公

4、司 、 安 徽 海 恒 检 测 技 术 有 限 公 司 、 安 徽省 环 境 检 测 行 业 协 会 、 合 肥 志 鹏 环 保 职 业 培 训 学 校 有 限 公 司 。本 文 件 主 要 起 草 人 ： 丁 月 、 王 家 菊 、 程 燕 、 刘 莎 莎 、 夏 晴 、 夏 俊 雅 、 戴 光 玉 、 李 伟 、 杨 圣 广 、 张 汉昌 、 孙 美 慧 、 王 莉 莉 、 牛 俊 、 崔 建 双 。 DB 3401/T 231 2021 1 生 态 环 境 检 测 实 验 室 标 准 菌 株 管 理 规 范1 范 围本 文 件 规 定 了 生 态 环 境 检 测 实 验 室 标 准 菌

5、株 管 理 的 一 般 要 求 和 流 程 。本 文 件 适 用 于 生 态 环 境 检 测 实 验 室 标 准 菌 株 的 管 理 。2 规 范 性 引 用 文 件下 列 文 件 中 的 内 容 通 过 文 中 的 规 范 性 引 用 而 构 成 本 文 件 必 不 可 少 的 条 款 。 其 中 ， 注 日 期 的 引 用 文 件 ，仅 该 日 期 对 应 的 版 本 适 用 于 本 文 件 ； 不 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 其 最 新 版 本 （ 包 括 所 有 的 修 改 单 ） 适 用 于 本 文 件 。GB 19489 实 验 室 生 物 安 全 通 用 要 求GB/T

6、27405-2008 实 验 室 质 量 控 制 规 范 食 品 微 生 物 检 测GB 50346 生 物 安 全 实 验 室 建 筑 技 术 规 范SN/T 2660 食 品 微 生 物 实 验 室 菌 种 保 藏 方 法3 术 语 和 定 义GB/T 27405-2008 界 定 的 以 及 下 列 术 语 和 定 义 适 用 于 本 文 件 。标 准 菌 株 reference strain至 少 定 义 到 属 或 种 水 平 的 菌 株 。 按 其 特 性 进 行 分 类 和 描 述 ， 有 明 确 的 来 源 。来 源 ： GB/T 27405-2008， 3.10 标 准 储

7、备 菌 株 reference stocks标 准 菌 株 经 过 一 代 转 接 后 获 得 的 同 种 菌 株 。来 源 ： GB/T 27405-2008， 3.11储 备 菌 株 stock culture标 准 储 备 菌 株 经 过 转 接 后 获 得 的 同 种 菌 株 。工 作 菌 株 working cultures由 标 准 菌 株 、 标 准 储 备 菌 株 、 储 备 菌 株 或 4代 以 内 经 过 转 接 获 得 的 同 种 菌 株 ， 直 接 用 于 培 养 基 检 验 、人 员 比 对 、 阴 性 及 阳 性 对 照 等 实 验 活 动 。代 generatio

8、n将 微 生 物 接 种 至 新 鲜 培 养 基 上 或 培 养 基 内 培 养 生 长 一 次 即 为 一 代 。 注 ： 按 照 菌 株 的 传 代 过 程 ， 对 各 代 菌 株 的 代 数 、 使 用 类 型 、 继 承 关 系 ， 附 录 A中 给 出 了 进 一 步 的 说 明 。 DB 3401/T 231 2021 2 4 一 般 要 求人 员4.1.1 技 术 人 员 应 覆 盖 标 准 菌 株 管 理 工 作 流 程 的 全 部 环 节 。4.1.2 技 术 人 员 应 经 专 业 技 能 培 训 ， 经 能 力 确 认 合 格 后 方 可 上 岗 。4.1.3 涉 及 色

9、 彩 辨 识 的 实 验 ， 不 应 选 用 有 颜 色 视 觉 障 碍 的 人 员 。场 所 与 设 备4.2.1 应 按 照 检 测 活 动 内 容 配 置 符 合 相 应 生 物 安 全 等 级 要 求 的 实 验 室 ， 实 验 室 应 符 合 GB 19489 和 GB50346的 相 关 规 定 。4.2.2 应 根 据 标 准 菌 株 的 性 质 配 备 保 藏 、 制 备 、 销 毁 等 设 备 。安 全 防 护 4.3.1 应 按 照 检 测 活 动 内 容 配 置 符 合 微 生 物 危 害 等 级 要 求 的 生 物 安 全 防 护 用 品 ， 并 设 置 安 全 标 识

10、 。4.3.2 标 准 菌 株 的 保 藏 和 领 用 ， 应 实 行 双 人 双 锁 负 责 制 管 理 。记 录应 对 标 准 菌 株 的 管 理 进 行 记 录 并 归 档 留 存 ， 档 案 留 存 期 限 不 少 于 6年 。5 管 理 流 程流 程 概 述管 理 流 程 包 括 采 购 、 验 收 、 保 藏 、 期 间 核 查 、 制 备 、 销 毁 。 标 准 菌 株 管 理 流 程 按 附 录 B执 行 。采 购 应 从 有 销 售 资 质 的 机 构 获 取 有 明 确 来 源 的 标 准 菌 株 。 采 购 申 请 记 录 应 包 括 菌 株 名 称 、 来 源 、 代

11、数 、数 量 等 内 容 。验 收标 准 菌 株 验 收 检 查 内 容 包 括 名 称 、 规 格 、 数 量 、 包 装 、 有 效 期 、 说 明 书 、 证 书 等 。 如 需 对 标 准 菌 株进 行 存 活 性 和 纯 度 确 认 ， 按 5.6.2.1-5.6.2.3执 行 。 验 收 记 录 表 参 见 附 录 C中 的 表 C.1。保 藏5.4.1 标 准 菌 株 应 按 照 供 应 商 提 供 的 使 用 说 明 书 要 求 进 行 保 藏 。5.4.2 标 准 储 备 菌 株 、 储 备 菌 株 、 工 作 菌 株 的 保 藏 方 法 按 照 SN/T 2660执 行 。

12、5.4.3 工 作 菌 株 保 藏 宜 采 用 斜 面 培 养 法 。5.4.4 保 藏 和 领 用 记 录 表 参 见 附 录 C 中 的 表 C.2。 期 间 核 查应 根 据 菌 株 类 型 、 数 量 、 保 藏 期 限 等 ， 制 定 菌 株 保 藏 期 间 核 查 计 划 ， 计 划 应 对 具 体 菌 株 、 核 查 方 法 、频 次 、 文 件 记 录 、 结 果 判 定 等 内 容 进 行 规 定 。 期 间 核 查 方 法 包 括 文 件 核 查 、 存 活 性 核 查 、 关 键 生 化 特 性核 查 。 期 间 核 查 记 录 表 参 见 附 录 C中 的 表 C.3。

13、 DB 3401/T 231 2021 3 制 备5.6.1 制 备 要 求5.6.1.1 制 备 过 程 应 在 无 菌 条 件 下 进 行 。5.6.1.2 培 养 条 件 应 按 照 供 应 商 提 供 的 使 用 说 明 书 要 求 进 行 。5.6.1.3 培 养 物 应 进 行 标 识 ， 标 识 内 容 应 包 括 名 称 、 菌 种 号 、 传 代 日 期 和 代 数 及 使 用 类 型 等 信 息 。5.6.1.4 应 记 录 制 备 信 息 ， 制 备 记 录 表 参 见 附 录 C 中 的 表 C.4。5.6.2 制 备 过 程5.6.2.1 复 苏拆 开 标 准 菌 株

14、 的 包 装 ， 按 照 供 应 商 提 供 的 使 用 说 明 书 要 求 对 标 准 菌 株 进 行 复 苏 。5.6.2.2 平 板 分 离 采 用 非 选 择 性 平 板 对 复 苏 后 的 标 准 菌 株 进 行 分 离 、 纯 化 。5.6.2.3 确 认对 平 板 分 离 出 的 菌 落 进 行 存 活 性 、 纯 度 确 认 。 确 认 合 格 后 ， 方 可 进 行 制 备 。 如 确 认 不 合 格 ， 应 及 时灭 菌 销 毁 。5.6.2.4 标 准 储 备 菌 株 制 备挑 取 纯 菌 落 进 行 分 装 保 藏 ， 即 得 到 标 准 储 备 菌 株 （ 第 2代

15、） 。 标 准 储 备 菌 株 制 备 流 程 按 照 附 录 D执 行 。标 准 储 备 菌 株 不 应 作 为 标 准 菌 株 使 用 。5.6.2.5 储 备 菌 株 制 备取 标 准 储 备 菌 株 ， 在 非 选 择 性 平 板 上 转 种 培 养 并 验 证 合 格 ， 挑 取 纯 菌 落 进 行 分 装 保 藏 ， 即 得 到 储 备菌 株 （ 第 3代 ） 。 储 备 菌 株 制 备 流 程 按 照 附 录 E执 行 。 储 备 菌 株 不 应 作 为 标 准 储 备 菌 株 或 标 准 菌 株 使 用 。 5.6.2.6 工 作 菌 株 制 备5.6.2.6.1 由 标 准

16、菌 株 制 备 工 作 菌 株 （ 第 3 代 ）取 标 准 菌 株 ， 在 复 苏 、 分 离 确 认 合 格 后 ， 挑 取 纯 菌 落 转 接 于 斜 面 进 行 培 养 ， 即 得 到 工 作 菌 株 （ 第 3代 ） 。 制 备 流 程 按 照 附 录 F图 F.1执 行 。 工 作 菌 株 不 应 作 为 储 备 菌 株 、 标 准 储 备 菌 株 或 标 准 菌 株 使 用 。5.6.2.6.2 由 标 准 储 备 菌 株 制 备 工 作 菌 株 (第 4 代 )取 标 准 储 备 菌 株 ， 在 非 选 择 性 平 板 上 转 种 培 养 并 验 证 合 格 ， 挑 取 纯 菌

17、 落 转 接 于 斜 面 进 行 培 养 ， 即 得到 工 作 菌 株 （ 第 4代 ） 。 制 备 流 程 按 照 附 录 F图 F.2执 行 。5.6.2.6.3 由 储 备 菌 株 制 备 工 作 菌 株 (第 5 代 )取 储 备 菌 株 ， 在 非 选 择 性 平 板 上 转 种 培 养 并 验 证 合 格 ， 挑 取 纯 菌 落 转 接 于 斜 面 进 行 培 养 ， 即 得 到 工作 菌 株 （ 第 5代 ） 。 制 备 流 程 按 照 附 录 F图 F.3执 行 。 5.6.2.6.4 由 工 作 菌 株 (第 3 代 )制 备 工 作 菌 株 （ 第 4 代 ） DB 340

18、1/T 231 2021 4 取 工 作 菌 株 （ 第 3代 ） ， 挑 取 纯 菌 落 转 接 于 斜 面 进 行 培 养 ， 即 得 到 工 作 菌 株 （ 第 4代 ） 。 制 备 流 程 按照 附 录 F图 F.4执 行 。5.6.2.6.5 由 工 作 菌 株 (第 4 代 )制 备 工 作 菌 株 （ 第 5 代 ）取 工 作 菌 株 （ 第 4代 ） ， 挑 取 纯 菌 落 转 接 于 斜 面 进 行 培 养 ， 即 得 到 工 作 菌 株 （ 第 5代 ） 。 制 备 流 程 按照 附 录 F图 F.5执 行 。销 毁5.7.1 销 毁 工 作 应 由 两 人 共 同 操 作

19、 ， 并 对 销 毁 过 程 进 行 严 格 监 督 。5.7.2 将 需 要 销 毁 的 菌 株 和 使 用 过 的 带 菌 耗 材 经 121 高 压 灭 菌 至 少 30min， 再 放 入 实 验 室 生 物 废 弃 物处 理 桶 。 需 要 销 毁 的 菌 株 包 括 但 不 限 于 ：a) 解 冻 使 用 后 的 标 准 储 备 菌 株 、 储 备 菌 株 ；b) 经 确 认 或 验 证 不 合 格 的 菌 株 ； c) 超 过 保 存 期 限 的 菌 株 ；d) 其 他 应 废 弃 的 菌 株 。5.7.3 废 弃 物 应 按 GB 19489 中 废 物 处 置 规 定 进 行

20、 处 理 。5.7.4 销 毁 记 录 表 参 见 附 录 C 中 的 表 C.5。 DB 3401/T 231 2021 5 B附 录 A（ 资 料 性 ）菌 株 的 代 数 、 使 用 类 型 、 继 承 关 系各 代 菌 株 的 代 数 、 使 用 类 型 、 继 承 关 系 见 表 A.1。表 A.1 各 代 菌 株 的 代 数 、 使 用 类 型 、 继 承 关 系代 数 使 用 类 型 继 承 关 系第 0代 标 准 菌 株 - 第 1代 - 由 第 0代 菌 株 复 苏 得 到 的 培 养 物 。第 2代 标 准 储 备 菌 株 由 第 1代 菌 株 培 养 生 长 得 到 的

21、同 种 菌 株 ， 并 进 行 保 藏 用 于 后 续储 备 菌 株 或 工 作 菌 株 的 制 备 。第 3代 储 备 菌 株 由 第 2代 菌 株 培 养 生 长 得 到 的 同 种 菌 株 ， 并 进 行 保 藏 用 于 后 续工 作 菌 株 的 制 备 。工 作 菌 株 由 第 2代 菌 株 培 养 生 长 得 到 的 同 种 菌 株 ， 并 直 接 用 于 检 验 检 测活 动 或 进 行 保 藏 用 于 后 续 工 作 菌 株 制 备 。第 4代 工 作 菌 株 由 第 3代 菌 株 培 养 生 长 得 到 的 同 种 菌 株 ， 并 直 接 用 于 检 验 检 测活 动 或 进

22、行 保 藏 用 于 后 续 工 作 菌 株 制 备 。 第 5代 工 作 菌 株 由 第 4代 菌 株 培 养 生 长 得 到 的 同 种 菌 株 ， 并 直 接 用 于 检 验 检 测活 动 。注 ： 从 标 准 菌 株 到 标 准 储 备 菌 株 、 储 备 菌 株 和 工 作 菌 株 传 代 培 养 次 数 不 超 过 5次 。 DB 3401/T 231 2021 6 附 录 B（ 规 范 性 ）标 准 菌 株 管 理 流 程标 准 菌 株 管 理 流 程 见 图 B.1。 采 购 申 请 记 录合 同验 收 记 录保 藏 、 领 用 记 录期 间 核 查 记 录 制 备 记 录销 毁

23、 记 录图 B.1 标 准 菌 株 管 理 流 程 图 启 动 工 作 计 划采 购验 收 制 备销 毁工 作 结 束保 藏 、 期 间 核 查 DB 3401/T 231 2021 7 附 录 C（ 资 料 性 ）记 录 表C.1 验 收 记 录 表 见 表 C.1。 表 C.1 验 收 记 录 表序 号 标准菌株名称 标准菌株来源 菌株编号 批号 采购日期 验收日期 验 收 内 容 验收评价 验收人 备注规格 数量 有效期 包装 标识 说明书 证书 存活性 纯度 DB 3401/T 231 2021 8 C.2 保 藏 与 领 用 记 录 表 见 表 C.2。 表 C.2 保 藏 与 领

24、用 记 录 表保 藏 记 录序 号 菌 株 名 称 菌 株 批 号菌 株 编 号 菌 株 来 源 代 数 及 使 用 类 型首 次 保 藏 日 期 保 藏 数 量 保 藏 方 法 保 藏 条 件 保 管 人 1 保 管 人 2领 用 记 录序 号 领 用 日 期 领 用 数 量 领 用 人 用 途 保 管 人 1 保 管 人 2 处 置 DB 3401/T 231 2021 9 C.3 期 间 核 查 记 录 表 见 表 C.3。 表 C.3 期 间 核 查 记 录 表序号 菌株名 称 菌株来源 菌株编号 批号 代数及使用类型 保藏日期 核查日期 核 查 内 容 核查结果 核查人 备注外观 保

25、藏条件 有效期 文件资料 存活性 纯度 关键生化特性 DB 3401/T 231 2021 10 C.4 制 备 记 录 表 见 表 C.4。 表 C.4 制 备 记 录 表制 备 前 菌 株 信 息名 称 编 号 及 代 数来 源 批 号保 藏 介 质 使 用 数 量 制 备 条 件培 养 基 及 批 号 培 养 设 备培 养 温 度 培 养 时 间制 备 后 菌 株 信 息名 称 编 号 及 代 数批 号 制 备 数 量 保 藏 介 质 保 藏 温 度保 藏 设 备 预 期 用 途制 备 过 程 ： 操 作 人 制 备 日 期 DB 3401/T 231 2021 11 B CCC.5 销

26、 毁 记 录 表 见 表 C.5。 表 C.5 销 毁 记 录 表日 期 被 处 理 菌 株 （ 物 品 ） 名 称 销 毁 原 因 销 毁 方 式 操 作 人 监 督 人 备 注 注 ： 废 弃 菌 株 应 标 明 编 号 、 数 量 。 D DB 3401/T 231 2021 12 附 录 D（ 规 范 性 ）标 准 储 备 菌 株 制 备 流 程标 准 储 备 菌 株 制 备 流 程 见 图 D.1。 否 是图 D.1 标 准 储 备 菌 株 制 备 流 程 图 EF 按 说 明 书 要 求 复 苏 （ 第 1 代 ）按 说 明 书 要 求 的 培 养 条 件 ， 在 非 选 择 性

27、平 板 上 分 离（ 第 2 代 ） 符 合对 分 离 出 的 菌 落 进 行 存 活 性 、 纯 度 确 认挑 取 纯 菌 落 ， 用 合 适 的 保 存 介 质 进 行 分 装 保 藏标 准 储 备 菌 株 （ 第 2 代 ） 标 准 菌 株 （ 第 0 代 ） 销 毁 DB 3401/T 231 2021 13 附 录 E（ 规 范 性 ）储 备 菌 株 制 备 流 程储 备 菌 株 制 备 流 程 见 图 E.1。 否 是图 E.1 储 备 菌 株 制 备 流 程 图 G G 按 说 明 书 要 求 的 培 养 条 件 ， 在 非 选 择 性 平 板 上 分 离（ 第 3 代 ）符 合

28、对 分 离 出 的 菌 落 进 行 存 活 性 、 纯 度 确 认 挑 取 纯 菌 落 ， 用 合 适 的 保 存 介 质 进 行 分 装 保 藏储 备 菌 株 （ 第 3 代 ） 标 准 储 备 菌 株 （ 第 2 代 ） 销 毁 DB 3401/T 231 2021 14 附 录 F（ 规 范 性 ）工 作 菌 株 制 备 流 程F.1 标 准 菌 株 制 备 工 作 菌 株 流 程 见 图 F.1。 否 是 图 F.1 标 准 菌 株 制 备 工 作 菌 株 流 程 图 按 说 明 书 要 求 复 苏 （ 第 1 代 ）按 说 明 书 要 求 的 培 养 条 件 ， 在 非 选 择 性

29、平 板 上 分 离（ 第 2 代 ） 符 合对 分 离 出 的 菌 落 进 行 存 活 性 、 纯 度 确 认挑 取 纯 菌 落 工 作 菌 株 （ 第 3 代 ） 标 准 菌 株 （ 第 0 代 ） 转 接 于 斜 面 培 养 生 长销 毁 DB 3401/T 231 2021 15 F.2 标 准 储 备 菌 株 制 备 工 作 菌 株 流 程 见 图 F.2。 否 是 图 F.2 标 准 储 备 菌 株 制 备 工 作 菌 株 流 程 图 按 说 明 书 要 求 的 培 养 条 件 ， 在 非 选 择 性 平 板 上 分 离（ 第 3 代 ）符 合对 分 离 出 的 菌 落 进 行 存

30、活 性 、 纯 度 确 认标 准 储 备 菌 株 （ 第 2 代 ） 挑 取 纯 菌 落工 作 菌 株 （ 第 4 代 ）转 接 于 斜 面 培 养 生 长销 毁 DB 3401/T 231 2021 16 F.3 储 备 菌 株 制 备 工 作 菌 株 流 程 见 图 F.3。 否 是 图 F.3 储 备 菌 株 制 备 工 作 菌 株 流 程 图 按 说 明 书 要 求 的 培 养 条 件 ， 在 非 选 择 性 平 板 上 分 离（ 第 4 代 ）符 合对 分 离 出 的 菌 落 进 行 存 活 性 、 纯 度 确 认储 备 菌 株 （ 第 3 代 ） 挑 取 纯 菌 落工 作 菌 株

31、（ 第 5 代 ）转 接 于 斜 面 培 养 生 长销 毁 DB 3401/T 231 2021 17 F.4 工 作 菌 株 (第 3代 )制 备 工 作 菌 株 (第 4代 )流 程 见 图 F.4。 图 F.4 工 作 菌 株 (第 3 代 )制 备 工 作 菌 株 (第 4 代 )流 程 图挑 取 纯 菌 落 工 作 菌 株 （ 第 3 代 ） 工 作 菌 株 （ 第 4 代 ）转 接 于 斜 面 培 养 生 长 DB 3401/T 231 2021 18 F.5 工 作 菌 株 (第 4代 )制 备 工 作 菌 株 (第 5代 )流 程 见 图 F.5。 图 F.5 工 作 菌 株 (第 4 代 )制 备 工 作 菌 株 (第 5 代 )流 程 图挑 取 纯 菌 落 工 作 菌 株 （ 第 4 代 ） 工 作 菌 株 （ 第 5 代 ）转 接 于 斜 面 培 养 生 长