SN T 5324.2-2020 出口包装饮用水和饮用天然矿泉水中丙咪嗪、卡马西平、氟西汀、氟尼辛和氯米帕明的测定 液相色谱-质谱质谱法.pdf

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1、以正式出版文本为准 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 5324.2 2020 出口包装饮用水和饮用天然矿泉水中丙 咪嗪 、 卡马西平 、 氟西汀 、 氟尼辛和氯 米帕明的测定 液相色谱 - 质谱 / 质谱法 Determination of imipramine, carbamazepine, fluoxetine, flunixin and clomipramine in exported packaged drinking water and drinking natural mineral water LC- MS/MS method 2020-12-30 发布 2021-

2、07-01 实施 ICS 67.160 CCS X 51 中华人民共和国海关总署发 布 以正式出版文本为准 以正式出版文本为准 SN/T 5324.2 2020 I 前 言 本文件按照 GB/T 1.1 2020给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。 本文件起草单位：中华人民共和国北京海关 、北京市食品科学研究院、中国人民解放军疾病预 防控制中心。 本文件主要起草人：王珮玥、饶红、冯鑫、韩深、崔凤云、梁娜娜、齐鹤鸣、古瑾、刘萤、 张灿。 以正式出版文本为准 以正式出版文本为准 1 SN/T 5

3、324.2 2020 出口包装饮用水和饮用天然矿泉水中丙 咪嗪 、 卡马西平 、 氟西汀 、 氟尼辛和氯 米帕明的测定 液相色谱 - 质谱 / 质谱法 1 范围 本文件规定了饮用纯净水、饮用天然矿泉水、其他饮用水中丙咪嗪、卡马西平、氟西汀、氟尼 辛和氯米帕明的液相色谱 - 质谱 / 质谱检测方法。 本文件适用于饮用纯净水、饮用天然矿泉水、其他饮用水中丙咪嗪、卡马西平、氟西汀、氟尼 辛和氯米帕明的测定。 2 规范性引用文件 下列文件中对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于 本文件。凡是不注明日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T

4、 33087 仪器分析用高纯水规格及试验方法。 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 方法提要 试样中的待测物经液相色谱 - 质谱 / 质谱进行分离和测定，外标法定量。 5 试剂和材料 除另有说明外，所用试剂均为色谱纯，水为符合 GB/T 33087 规定的仪器分析用高纯水。 5.1 甲醇。 5.2 甲酸。 5.3 乙腈。 5.4 甲酸溶液（0.1%）：量取甲酸 1 mL，加水至 1 000 mL，混匀。 5.5 丙咪嗪标准物质：C 19 H 24 N 2 ，CAS 50 -49-7，纯度 99%。 5.6 卡马西平标准物质：C 15 H 12 N 2 O，CAS 298 -4

5、6-4，纯度 99%。 5.7 氟西汀标准物质：C 17 H 18 F 3 NO，CAS 54910 -89-3，纯度 99%。 5.8 氟尼辛标准物质：C 14 H 11 F 3 N 2 O 2 ，CAS 38677 -85-9，纯度 99%。 5.9 氯米帕明标准物质：C 19 H 23 CIN 2 ，CAS 303 -49-1，纯度 99%。 5.10 标准物质储备溶液：分别称取丙咪嗪标准物质（5.5），卡马西平标准物质（ .6），氟西汀标准 物质（5.7），氟尼辛标准物质（5.8）和氯米帕明标准物质（5.9）10.0 mg（精确至 0.1 mg），用甲醇（5.1） 溶解并定容至 10

6、mL，配制成浓度为 1 000 mg/L 的标准储备液，于 -18避光保存。 以正式出版文本为准 2 SN/T 5324.2 2020 5.11 混合标准中间溶液：分别移取 100 L 标准物质储备液（5.10），混合后用甲醇（5.1）溶解并定 容至 10 mL，使各物质浓度为 10 mg/L，于 4避光保存。 5.12 混合标准工作溶液：准确移取适量的混合标准中间溶液（5.11），用水稀释，配制成浓度水平为 0.05 ng/mL、0.1 ng/mL、0.5 ng/mL、2 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL 的混合标准工作溶液，临用时配制。 6 仪器和设备 6.1 高效液相色谱

7、- 质谱 / 质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。 6.2 天平：感量为 0.1 mg。 6.3 高速离心机：转速 10 000 r/min。 6.4 具塞塑料离心管：2 mL。 6.5 尼龙微孔滤膜：0.22 m。 7 测定步骤 7.1 试样的制备 将水样摇匀静置约 10 min 后，吸取适量水样置于 2 mL 具塞塑料离心管（5.4），于 12000 r/min 离 心 5 min 后，上清液过 0.22 m 微孔滤膜（5.5）后待上机测定。 7.2 试样的保存 将试样于 4 避光保存。 7.3 测定条件 7.3.1 液相色谱参考条件 液相色谱参考条件如下： a） 流动相 A ：乙腈；流动

8、相 B ：0.1% 甲酸水溶液； b） 色谱柱：UPLC BEH C18，100 mm 2.1 mm，1.7 m 或相当者； c） 流速：0.35 mL/min ； d） 进样量：10 L； e） 柱温：30 ； f） 梯度洗脱：见表 1。 表 1 液相梯度洗脱程序 时间 /min A/% B/% 0.0 5.0 95.0 0.5 5.0 95.0 3 30.0 70.0 9 95.0 5.0 10 95.0 5.0 10.5 5.0 95.0 12 5.0 95.0 以正式出版文本为准 3 SN/T 5324.2 2020 7.3.2 质谱条件 质谱条件如下： a） 离子化模式：电喷雾电离（

9、ESI+）正离子模式； b） 扫描方式：多反应监测（MRM）； c） 使用前应调节各参数，使质谱灵敏度达到检测要求，参考条件参见附录 A。 7.3.3 定性测定 按照液相色谱 - 质谱 / 质谱条件测定样品和标准工作溶液，如果检测的质量色谱峰保留时间与标 准品保留时间相差不超过 5%，定性离子对相对丰度（是用相对于最强离子丰度的强度百分比表示） 与浓度相当的标准工作溶液的相对丰度一致，相对丰度允许偏差不超过表 2 规定的范围，则可判定样 品中存在对应的待测物。 表 2 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 /% 50 2050 1020 10 允许的相对偏差 /% 20 25 3

10、0 50 7.3.4 定量测定 依次测定标准系列工作液，绘制峰面积对标准溶液浓度的标准工作曲线，用标准曲线对样品进 行定量。样品溶液中丙咪嗪、卡马西平、氟西汀、氟尼辛和氯米帕明的响应值应在仪器测定的线性范 围内，超过线性范围的稀释后再进样。在上述色谱条件和质谱条件下，丙咪嗪、卡马西平、氟西汀、 氟尼辛和氯米帕明的参考保留时间参见附录 A，标准品的多反应监测 (MRM）色谱图参见附录 B。 7.3.5 空白试验 用水代替样品，按上述操作步骤进行。 8 结果计算和表述 8.1 采用外标法定量，按式（1）计算被测物的含量： X i =c i null f （1） 式中： X i 试样中被测组分残留量

11、，单位为纳克每毫升（ng/mL）； c i 由标准工作曲线得到的某被测组分溶液浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）； f 稀释倍数。 8.2 结果需扣除空白值，计算结果保留三位有效数字。 9 方法的定量限和回收率 9.1 定量限 本方法中丙咪嗪、氟尼辛的定量限为 0.05 ng/mL，卡马西平、氯米帕明的定量限为 0.1 ng/mL，氟 西汀的定量限为 0.2 ng/mL。 以正式出版文本为准 4 SN/T 5324.2 2020 9.2 回收率 不同基质中丙咪嗪、卡马西平、氟西汀、氟尼辛和氯米帕明的添加水平和回收率数据见表 3。 表 3 不同基质的添加水平和回收率范围（n=6） 化合物 添加

12、水平 ng/mL 回收率范围（%） 饮用纯净水 其他饮用水 饮用天然矿泉水 丙咪嗪 0.05 86.0-106 90.0-114 86.0-108 0.1 91.0-118 102-111 92.0-115 0.5 91.2-115 91.8-118 85.8-108 卡马西平 0.1 87.0-111 91.0-112 90.0-113 0.2 105-118 87.5-108 89.0-107 1 97.3-113 99.2-118 87.8-113 氟西汀 0.2 89.5-115 93.0-119 90.5-113 0.4 88.5-113 88.5-115 99.8-109 2 91

13、.2-112 96.0-118 94.5-113 氟尼辛 0.05 100-118 86.0-106 90.0-114 0.1 90.0-112 85.0-110 91.0-113 0.5 86.6-107 89.4-108 86.6-99.0 氯米帕明 0.1 89.0-116 89.0-113 92.0-112 0.2 91.5-120 85.5-109 92.0-119 1 89.0-111 89.5-118 90.3-114 以正式出版文本为准 5 SN/T 5324.2 2020 附 录 A （资料性） 质谱参数 1） A1 液相色谱 - 质谱 / 质谱参数如下： a） 毛细管电压：

14、1.00 kV ； b） 去溶剂气温度：500 ； c） 去溶剂气流速：1000 L/Hr ； d） 碰撞气流速：0.14 mL/min ； e） 离子源温度：150 ； f） 雾化气压力：6.0 bar。 g） 定性定量离子等其他参数见表 A.1。 表 A.1 定性定量离子等其他参数 化合物名称 保留时间 /min 母离子（m/z） 子离子（m/z） 锥孔电压 /V 碰撞能量 /eV 丙咪嗪 5.77 281.2 86.0* 58.1 35 15 28 卡马西平 5.56 237.1 178.9* 165.1 26 34 36 氟西汀 6.29 310.2 148.1* 44.0 20 8

15、10 氟尼辛 7.08 297.1 279.1* 264.0 40 22 30 氯米帕明 6.54 315.2 86.1* 58.1 46 20 22 注: 带*的离子为定量离子。 1）非商业性声明：附录 A 所列参数是在 Waters Xevo TQ -S 质谱仪上完成的，此处列出试验用仪器型号仅是为了 提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试采用不同厂家或型号的仪器。 以正式出版文本为准 6 SN/T 5324.2 2020 附 录 B （资料性） 多反应监测（MRM）色谱图 图 B.1 标准物质 MRM 色谱图 以正式出版文本为准 7 SN/T 5324.2 2020 Forewo

16、rd This standard is drafted according to GB/T 1.12009, GB/T 20001.42015 and SN/T 00012016. Please note that some of the contents of this document may involve patents. The issuing body of this document does not undertake the responsibility of identifying these patents. This standard is proposed by an

17、d is under the jurisdiction of General Administration of Customs, P. R. China. The standard is drafted by Beijing Customs District P.R.China, Beijing Academy of Food Science， Academy of Military Medical Sciences. The main drafters of this standard are Wang Peiyue, Rao Hong, Feng Xin, Han Shen, Cui F

18、engyun, Liang Nana, Qi Heming, Gu Jin, Liu Ying，Zhang Can. 以正式出版文本为准 8 SN/T 5324.2 2020 Determination of imipramine, carbamazepine, fluoxetine, flunixin and clomipramine in exported packaged drinking water and drinking natural mineral water-LC-MS/MS method 1 Scope This standard specifies the determi

19、nation of imipramine, carbamazepine, fluoxetine, flunixin and clomipramine in purified drinking water, natural drinking mineral water and other drinking water. This standard is applicable to the determination of imipramine, carbamazepine, fluoxetine, flunixin and clomipramine in purified drinking wa

20、ter, natural drinking mineral water and other drinking water. 2 Normative reference The following document is necessary for this standard. For dated reference, only dated editions shall apply to this standard. For undated references, the latest edition of the normative document referred to apply. GB

21、/T 33087 Ultra pure water for instrumental analysis specification and test methods 3 Terms and definitions There is no term or definition to be defined in this document. 4 Principle The samples are separated and determined by liquid chromatography-mass/mass spectrometry, and quantified by external s

22、tandard method. 5 Regents and materials Unless otherwise specified, all the regents used should be chromatographic grade. “Water” is the ultra pure water for instrument analysis prescribed by GB/T 33087. 5.1 Methanol. 5.2 Formic acid. 5.3 Acetonitrile. 5.4 Formic acid solution (0.1%）: pipet 1 mL of

23、formic acid, add water to 1 000 mL and mix well. 5.5 Imipraminestandard material:C 19 H 24 N 2 , CAS 50-49-7, purity 99%. 5.6 Carbamazepine standard material: C 15 H 12 N 2 O, CAS 298-46-4, purity 99%. 5.7 Fluoxetine standard material: C 17 H 18 F 3 NO, CAS 54910-89-3, purity 99%. 5.8 Flunixin stand

24、ard material: C 14 H 11 F 3 N 2 O 2 , CAS 38677-85-9, purity 99%. 5.9 Clomipramine standard material: C 19 H 23 CIN 2 , CAS 303-49-1, purity 99%. 5.10 Standard stock solutions: separately weigh10 mg (accurate to 0.1 mg） imipramine (5.5）, carbamazepine 以正式出版文本为准 9 SN/T 5324.2 2020 (5.6）, fluoxetine (

25、5.7）, fluonixin (5.8）and clomipramine (5.9）, dissolve and fill to the volume of 10 mL using methanol (5.1）. The concentration of each standard in standard stock solution is 1000 mg/L. The standard stock solutions storage at -18 . 5.11 Mixed standard intermediate solution: separately pipet 100 L each

26、 standard stock solution (5.10）and mix. Fill to the volume of 10 mL using methanol (5.1）. The concentration of each standard is 10 mg/L. The mixed standard intermediate solution storage at 4 . 5.12 Mixed standard working solution: take appropriate amount of mixed standard intermediate solution (5.11

27、） and dilute with water. The concentration of the standard series solution is 0.05 ng/mL, 0.1 ng/mL, 0.5 ng/mL, 2 ng/mL, 10 ng/mL and 20 ng/mL respectively. Prepare when it will be used. 6 Apparatus and equipment 6.1 UPLC-MS/MS: equipped with electric spray ion source (ESI）. 6.2 Analytical balance:

28、a sensitivity of 0.1 mg. 6.3 Centrifuge: rotational speed 10 000 r/min. 6.4 Plugged plastic centrifuge tube: 2 mL. 6.5 Nylonmillipore filter film: 0.22 m. 7 Procedure 7.1 Sample preparation The water samples are mixed and stand for about 10 min. Pipet a small amount of water into the 2 mL plugged pl

29、astic centrifuge tube (5.4）. After centrifugation (12 000 r/min, 5 min）, filter the about 1 mL supernatant with millipore filter film (5.5）for LC -MS/MS analysis. 7.2 Sample storage The test samples should be stored at 4 . 7.3 Determination 7.3.1 UPLC operation conditions UPLC operation conditions a

30、re as follows: a） Mobilephase (A）: Acetonitrile; mobilephase(B）: 0.1% Formic acid water solution; b） Chromatographic column: UPLC BEH C18, 100 mm2.1 mm, 1.7 m or equivalent; c） Flow rate: 0.35 mL/min; d） Injection volume: 10 L; e） Column temperature: 30 ; f） Gradient elution: according to table 1. T

31、able 1 Liquid chromatography gradient elution procedure Time/min A/% B/% Initial 5.0 95.0 0.5 5.0 95.0 3 30.0 70.0 以正式出版文本为准 10 SN/T 5324.2 2020 Table 1 （续） Time/min A/% B/% 9 95.0 5.0 10 95.0 5.0 10.5 5.0 95.0 12 5.0 95.0 7.3.2 Mass spectrometry operation conditions Mass spectrometry operation cond

32、itions are as follows: a） Ionization mode: electrospray ionization positive ion mode (ESI+）; b） MS scan mode: multiple reaction mode (MRM）; c） The parameters should be adjusted before use to make the sensitivity of the mass spectrum meet the testing requirements. Other parameter can be referred to A

33、nnex A. 7.3.3 Conformation determination The sample and standard working solution are determined according to the liquid chromatography mass spectrometry / mass spectrometry conditions. The variation range of the retention time for the peaks in unknown sample and in the standard solution can not be

34、out of the range of 5%. For the same analysis batch and same compound, the variation range of the ion ratio of the two product ions for the unknown sample and the working standard solution at the similar concentration can not be out of the range of table 2. Table 2 Maximum permitted tolerance for re

35、lative ion intensities while conformation Relative intensity/(%） 50 20 to 50 10 to 20 10 Permitted tolerance/(%） 20 25 30 50 7.3.4 Quantification determination The standard series working solutions are determined successively, and the calibration curve of peak area to concentration was plotted. The

36、samples are quantified using the standard calibration curve. The responses of imipramine, carbamazepine, fluoxetine, flunixin and clomipramine in the sample solutions should be within the linear range of the curve. If out of the range, the samples should be diluted. Under the above LC and MS conditi

37、ons, the reference retention times of imipramine, carbamazepine, fluoxetine, fluonixin and clomipramine can be referred to Annex A . The MRM chromatograms of the standards can be referred to Annex B. 7.3.5 Blank test The operation of blank test is the same as the described in the method of determina

38、tion, but with samples replaced by ultra purewater. 8 Calculation and expression of the result 8.1 Quantify using external standard method and calculate the concentration of the analytes using formula (1） : X i =c i null f （1） 以正式出版文本为准 11 SN/T 5324.2 2020 Where: X i the residue concentration of the

39、 analytes, ng/mL; c i the concentration of the analytes calculated using standard calibration curve, ng/mL; f dilution ratio. 8.2 The blank value should be subtracted from the result of calculation. The results are rounded off to three significant figures. 9 Limit of quantification and recovery of t

40、he method 9.1 Limit of quantification The limit of quantification for imipramine and flunixin is 0.05 ng/mL.The limit of quantification for clomipramine and carbamazepine is 0.1 ng/mL. The limit of quantification for fluoxetine is 0.2 ng/mL. 9.2 Recovery The recovery data in different spiked levels

41、of imipramine, carbamazepine, fluoxetine, flunixin and clomipramine in purified drinking water, natural drinking mineral water and other drinking water are listed in Table 3. Table 3 The spiked levels and recovery ranges in different matrices (n=6） Compound Spiked level/ (ng/mL） Recovery range（%） Pu

42、rified drinking water Other drinking water Natural drinking mineral water Imipramine 0.05 86.0-106 90.0-114 86.0-108 0.1 91.0-118 102-111 92.0-115 0.5 91.2-115 91.8-118 85.8-108 Carbamazepine 0.1 87.0-111 91.0-112 90.0-113 0.2 105-118 87.5-108 89.0-107 1 97.3-113 99.2-118 87.8-113 Fluoxetine 0.2 89.

43、5-115 93.0-119 90.5-113 0.4 88.5-113 88.5-115 99.8-109 2 91.2-112 96.0-118 94.5-113 Flunixin 0.05 100-118 86.0-106 90.0-114 0.1 90.0-112 85.0-110 91.0-113 0.5 86.6-107 89.4-108 86.6-99.0 Clomipramine 0.1 89.0-116 89.0-113 92.0-112 0.2 91.5-120 85.5-109 92.0-119 1 89.0-111 89.5-118 90.3-114 以正式出版文本为准

44、 12 SN/T 5324.2 2020 Annex A （informative） Mass spectrometric parameters 1） A.1 Mass spectrometric parameters: a） Capillary voltages: 1.00 kV; b） Desolvation Temp: 500 ; c） Desolvation Gas Flow: 1 000 L/Hr; d） Collision Gas Flow ：0.14 mL/min; e） Source Temp: 150 ; f） Nebuliser Pressure: 6.0 bar; g）

45、Qualitative and quantitative ions information and other parameters can be referred in Table A.1. Table A.1 Qualitative and quantitative ions information and other parameters Compound Retention time /min Precursor ion （m/z） Product ion （m/z） Cone voltage /V Collision energy /eV Imipramine 5.77 281.2

46、86.0* 58.1 35 15 28 Carbamazepine 5.56 237.1 178.9* 165.1 26 34 36 Fluoxetine 6.29 310.2 148.1* 44.0 20 8 10 Flunixin 7.08 297.1 279.1* 264.0 40 22 30 Clomipramine 6.54 315.2 86.1* 58.1 46 20 22 Annotation: The symbol “*” represents the quantitative ion. 1）Non -commercial statement: The reference ma

47、ss parameters in Annex A are accomplished by Waters Xevo TQ-S. The equipment and its type involved in the standard method is only for reference and not related to any commercial aim, and the analysts are encouraged to use equipments of different corporation or different type. 以正式出版文本为准 13 SN/T 5324.

48、2 2020 Annex B (Informative） The MRM chromatograms of the standards Figure B.1 The MRM chromatograms of the standards 以正式出版文本为准 以正式出版文本为准 以正式出版文本为准 中华人民共和国出入境检验检疫 开本 8801230 1/16 印张 1.25 字数 24 千字 2021 年 6 月第一版 2021 年 6 月第一次印刷 印数 1500 书号：1551752 定价 18.00 元 出口包装饮用水和饮用天然矿泉水中丙 咪嗪、卡马西平、氟西汀、氟尼辛和氯 米帕明的测定 液相色谱 - 质谱 / 质谱法 行 业 标 准 SN/T 5324.22020 * * * SN/T 5324.2 2020 北京市朝阳区东四环南路甲 1 号（100023） 编辑部：（010）65194242-7509 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷 中国海关出版社有限公司出版发行 网址