DB4403 T 108-2020 药用植物种质资源保存规范.pdf
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1、ICS 65.020.99 CCS B 61 DB4403 深圳市 地方标准 DB4403/T 108 2020 药用植物种质资源保存规范 Conservation specification for medicinal plant germplasm resources 2020-10-26 发布 2020-12-01 实施 深圳市市场监督管理局 发布 DB4403/T 108 2020 I 目 次 前言 . II 1 范围 . 1 2 规范性引用文件 . 1 3 术语和定义 . 1 4 种质 资源 保存原则 . 2 5 种质 资源 保存方法 . 2 6 种质 资源 质量 监 测与更 新 .
2、 5 7 技术档案 . 6 附录 A( 资料 性) 深圳市珍稀濒危药用植物资源名录 . 7 附录 B(规范性) 药用植物种质资源基本信息表 . 12 参考文献 . 13 DB4403/T 108 2020 II 前 言 本 文件 按照 GB/T 1.1 2020 标准化工作导则 第 1部分:标准化文件的结构和起草规则 的 规定 起草。 本 文件 由深圳市城市管理和综合执法局提出并归口。 本 文件 起草单位:深 圳市 中国科学院 仙湖植物园、广东省农业科学院环境园艺研究所。 本 文件 主要起草人:金红、李杰、王再花、王茜茜、徐晔春、刘海林、叶广英。 DB4403/T 108 2020 1 药用植
3、物种质资源保存规范 1 范围 本 文件 规定了药用植物种质资源保存原则、 保存 方法、质量监测与更新以及技术档案 的要求 。 本 文件 适用于深圳市药用植物种质资源的保存。 2 规范性引用文件 下列文件 中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中, 注日期的引用文件, 仅 该 日期 对应 的版本适用于本文件 ; 不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本 文件。 GB/T 2930.2 草 种子检验规程 净度分析 GB/T 2930.4 草种子检验规程 发芽试验 GB/T 2930.8 草种子检验规程 水分测定 GB/T 2930.9 草种子检验规程 重量测定
4、 GB/T 3543.3 农作物种子检验规程 净度分析 GB/T 3543.4 农作物种子检验规程 发芽试验 GB/T 3543.6 农作物种子检验规程 水分测定 GB/T 3543.7 农作物种子检验规程 其他项目检验 GB/T 14072 1993 林木种质资源保存原则与方法 GB/T 20399 自然保护区总体规划技术规程 SZDB/Z 130 2015 植物种质资源离体保存库建设规范 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 。 3.1 种质资源 germplasm resources 具有不同遗传基础的植物个体和群体的各种繁殖材料总称。 来源: GB/T 14072-1993,2.
5、2,有修改 3.2 原地保存 conservation in situ 又称就地保存,指将种质资源在原生地保存。 来源: GB/T 14072-1993,2.7 3.3 迁地保存 conservation ex situ 又称异地保存,指将种质资源迁移出原生地栽培保存。 来源: GB/T 14072-1993,2.8 DB4403/T 108 2020 2 3.4 种子保存 seed conservation 将成熟种子干燥至适宜的含水量,并在适宜的低温条件下长期保存以维持种子活力的方法。 3.5 离体保存 conservation in vitro 将离体培养的小植株、器官、组织、细胞或原生
6、质体等材料,采用 适当的 方法延缓或停止其生长, 需要时可立即恢复其生长,并再生植株的方法。 来源: SZDB/Z 130-2015,3.6,有修改 3.6 外植体 explant 用于植物组织培养的离体植物器官、组织、细胞以及原生质体等起始培养材料。 来源: SZDB/Z 130-2015,3.14 4 种质 资源 保存原则 4.1 优先保存原则 优先 保存本地区分布的各级重点保护药用植物、珍稀濒危药用植物、岭南特色药用植物和有科研价 值、生态价值或经济价值的药用植物。 4.2 分类保存原则 针对本地区珍稀濒危药用植物( 见 表 A.1)、各级重点保护 药用 植物、在深圳有分布的岭南特色药
7、用植物以及其他有经济和应用价值的药用植物实施分类保存。对每个物种进行 分类标记,特别需要重点 保护的物种需要划定严格限制的区域进行特殊保存。 4.3 因地制宜 原则 依据 种质资源 的 生物学和生态学习性、 濒危程度、 生境破环程度 以及环境特点 等 ,因地制宜选择 原 地保存、迁地保存、种子保存 和 离体保存等方法。 5 种质 资源 保存方法 5.1 原地保存 5.1.1 保护区选址原则 5.1.1.1 依据不同情况设立两类保护区: a) 一类是以保护生物多样性为主,重点关注其中的药用植物; b) 一类是对某一种或几种药用植物建立专属保护区。 5.1.1.2 保护区 选址 应同时满足以下基本
8、条件: a) 植物生境受威胁 严重 ,人为干扰加剧; b) 生态系统、气候环境 、 自然条件 和 种群数量具有代表性; c) 远离公路、矿区、工业设施 所在地 、规模化养殖 区 、潜在淹没地、滑坡塌方或规划中的建设 用地。 5.1.2 保护区选 址 方法 DB4403/T 108 2020 3 对拟建立 保护区 的药用植物进行全面调查,查明其地理分布,并取样分析其遗传多样性 ; 根据调查 结果和遗传多样性分析的数据,确定某种药用植物的遗传多样性分布中心 ; 以其遗传多样性分布中心确 定保护区具体地理位置。 5.1.3 保护区建设 根据主要保存植物的生长、繁殖特点和 相关 法规建立以保存药用植物
9、为核心的自然保护区,设立核 心 保护 区和 一般控制区 。 保护区的具体规划和建设 要求 参照 GB/T 20399 相关规定执行 。 5.1.4 数据 观测 和 记录 保护区的药用植物观察 记录 项目见 表 B.1。所有的观测 记录 资料应建立详细的档案。 5.2 迁地保存 5.2.1 条件 遵守国际和国内的相关政策和规定, 不收集任何非法购买或不允许收集的物种,不引种携带病虫害 或 入侵性植物 ,并 具备下列条件之一: a) 当药用植物种群原有生境破碎成斑块状,或者原生境不复存在; b) 当 药用 植物种群数目下降到极低水平,个体难以繁殖; c) 当药用植物种群的生存环境突然变化导致面临生
10、存危机。 5.2.2 方法 主要 有 传统的花园、农场、种质资源圃和植物园 等 形式,参考迁地保存目标植物 的生境,重点做好 以下工作: a) 引进的非本地物种需根据风险性分析报告决定隔离试种时间, 从境外引入的 一年生植物不得少 于 一 个 生长 周期,多年生植物不得少于 2 年; b)加强栽培管理,保证植物正常生长繁殖, 繁殖期 管理要有利于促进种群自然繁殖 更新 ; c) 需进行复份异地保存,以防止因自然灾害或意外导致资源丢失 。 5.2.3 数据观测和记录 建立永久档案, 按照 表 B.1 规定的内容 详细 记录每个个体的采集 情况 及栽培管理措施。 5.3 种子保存 5.3.1 接纳
11、登记 接纳 登记的种子材料 按照 表 B.1 规定的内容 填写 基本 信息。接纳登记时需检查种子 质量、数量和 健康状况,选择当季收获的新种子。 5.3.2 去杂清选 按 照 GB/T 2930.2-2017 第 6 章 、 GB/T 3543.3-1995 第 5 章 的规定,清除 杂质 、其他植物种子 和 空瘪、 霉变种子,种子净度不低于 98%。 5.3.3 分类、排序、编号、建档 清选好的种子,按科属分类,依次进行编号、登记,建立档案。 5.3.4 重量测定 DB4403/T 108 2020 4 从净度分析后并充分混合的净种子中,分出一部分作为试验样品,按需求任选百粒法、千粒法、全
12、量法中的一种测定种子重量,具体测量要求、方法 应按照 GB/T 2930.9-2017 第 4 章 、 GB/T 3543.7-1995 第 12 章 中 的规定执行。 5.3.5 发芽率测定 测定种子发芽率 应按 以下规定: a) 从待测种子中随机取数量相等的 3 份种子,数量根据种子大小而定 , 中小粒种子 ( 千粒重 100 g) 每份 100 粒;大粒种子( 100 g 千粒重 500 g)每份 50 粒;特大粒种子 ( 千粒重 500 g) 每份 25 粒; b) 种子发芽率检测按 GB/T 2930.4-2017 第 5 章 、 GB/T 3543.4-1995 第 6 章 规定的
13、 试验程序 进行,若无规定,则参照相关文献或研究获得适宜方法后进行 ; c) 种子入库前,一般要求栽培种发芽率 85%,野生种、稀有种及特殊遗传材料发芽率 70%。 5.3.6 干燥 符合入库的种子应及时干燥,干燥时间的长短依药用植物种子的大小、数量、最初含水量和干燥条 件而定: a) 若干燥的种子份数少,将种子装入粗纱布袋,按种子与硅胶的重量比为 1:1,在干燥器中室温 下脱水干燥; b) 若干燥的种子份数多,在温度 10 25 ,相对湿度 10% 15% 的干燥箱(间)干燥 ; c) 顽拗型种子不耐脱水,需因具体植物材料而定。 5.3.7 含水量 测定 按 照 GB/T 2930.8-20
14、17 第 6 章 、 GB/T 3543.6-1995 第 5 章 中 给出测定 程序 , 根据植物种子的 特性分别选择 低恒温烘干法、高恒温烘干法 测定种子含水量 。 5.3.8 包装称重 经干燥处理的种子称量记录重量后,及时密封包装,包装材料 可选择 玻璃罐、塑料瓶、螺纹铝盒或 铝箔袋等。 5.3.9 入库保存 根据种子的特性及保存需求 可 选择以下 保存 方法 : a) 长期库保存 : 贮藏温度为 零下 18 零下 20 ,相对湿度小于 50%,种子含水量 5% 7%,一般可保存 50 年以上 ; b) 中期库保存 : 贮藏温度为 零下 4 4 ,相对湿度小于 65%,种子含水量 5%
15、9%, 一般可保存 15 年以上; c) 短期库保存 : 贮藏温度为 10 15 ,相对湿度小于 65%,种子含水量 5% 9%,一般 可保存 5 年 ; d) 顽拗型种子保存 : 该类种子不耐脱水及低温,在不影响种子发芽率的前提下,应尽可能降低贮 藏温度及种子含水量,并添加杀菌剂保存种子, 以 达到短期贮存的目的;或利用超低温保存技 术(液氮)长期保存顽拗性种子或其离体胚或胚轴,具体的保存方法参照相关文献或研究获得 适宜方法后进行 。 5.3.10 入库定位 根据种质库保存材料的特点 ,制定库编号和库位号的编码规则, 可以种子入库年份 +采集地首字母 +种子入库先后顺序号的格式编号 ( 见
16、图 1) , 对符合入库条件的每一份材料编码后入库定位保存,并 输入种质 资源 管理数据库。 DB4403/T 108 2020 5 图 1 入库编号示例 5.4 孢子保存 孢子的采集 和保存需符合以下要求: a) 需注意孢子的成熟度和采收时期,避免同时采集不同种类的孢子时出现相互混杂现象 ; b) 采集时将覆有成熟孢子的叶片剪下,蒸馏水冲洗干净,滤纸吸干水分,纸袋包装后置于通风干 燥处阴干 ; 孢子自然干燥、脱落后收集孢子,容器密封 ; c) 依据不同植物的特性,选择 4 、 零下 15 零下 20 或是超低温(液氮)保存。 5.5 离体保存 5.5.1 保存材料 选择来源可靠、种源纯正 的
17、 外植体 材料 , 参照 SZDB/Z 130 2015 中 5.3的规定进行 外植体消毒和 离体培养,继代培养产生的材料作为离体保存的材料。 5.5.2 保存容器 依材料情况选择不同规格大小的试管或组培瓶,塑料盖封口,用标签写明种质编号。 5.5.3 保存条件与数量 根据保存 需求 , 参 照 SZDB/Z 130 2015 中 5.4、 5.5 描述的要求 , 可 选择以下两种保存方法 : a) 常温 保存 : 保存温度 25 , 环境相对湿度适宜, 光照强度 1500 lx 3000 lx,光照时间 10 h 16 h, 培养基依 种质资源 而定,每份种质 资源 保存 10 管(或瓶)以
18、上,每管(或瓶) 1 10个繁殖材料,每 2 3个月继代一次 ; b) 低温保存 : 保存温度 5 18 , 环境相对湿度适宜, 光照强度 1500 lx 3000 lx,光照 时间 8 h 12 h,培养基依种质 资源 而定,每份种质 资源 保存 10管(或瓶)以上,每管(或瓶) 1 10 个繁殖材料,每 12 15 个月继代一次 。 6 种质 资源 质量监测与更新 6.1 长期库保存种子材料 种子发芽率 测定方法 见 5.3.5, 种子发芽率 监测 间期为 10 年;当种子发芽率低于 85% 时,种子 发芽率 监测 间期依据种类的不同而缩短。 6.2 中期库保存种子材料 种子发芽率 测定方
19、法 见 5.3.5, 种子发芽率 监测 间期为 5年。 6.3 种子材料更新 当入库保存的种子材料出现下列情况之一时,应繁殖更新: DB4403/T 108 2020 6 a) 药用植物种子发芽率降至 50% 以下 ; b) 自花授粉药用植物每份活种子数量低于 600 粒,异花授粉药用植物每份活种子数量低于 800 粒 ; c) 当种子在中期库绝种时,长期库应繁殖更新 。 6.4 离体保存材料 离体保存材料受培养基和培养条件等影响,培养 出的组培苗遗传特性发生变化,其形态上也表现出 不同于原种质的特征 时(如叶片变细长或不规则扭曲、植株黄化、白化、植株变矮等) , 应更新离体保 存材料 。离体
20、保存的材料变异率应 2%。 7 技术档案 种质资源保存相关单位须及时记录、收集、整理和分析当年的各项技术资料,建立系统的技术档案; 所有档案资料应同时保存纸质文档和电子文档,纸质文档内容应清晰明确,电子文档应有备份; 每年 分 类整理,编号目录,装订成册,归档保存。 DB4403/T 108 2020 7 附 录 A (资料性) 深圳市珍稀濒 危药用植物资源名录 表 A.1 列出了深圳市珍稀濒危药用植物名单 。 表 A.1 深圳市珍稀濒危药用植物资源名录 序 号 科名 中文名 拉丁名 国家重 点保护 植物 IUCN 红色 名录 中国 物种 红色 名录 中国 植物 红皮 书 CITES 附录 深
21、圳 濒危 级别 评定 蕨类植物 Pteridophyta 1 Angiopteridaceae 莲座蕨科 福建观音座莲 Angiopteris fokiensis Hieron. 近危 2 Blechnaceae 乌毛蕨科 苏铁蕨 Brainea insignis (Hook.) J. Sm. VU 易危 3 Cyatheaceae 桫椤科 粗齿桫椤 Alsophila denticulate Baker LC 濒危 4 Cyatheaceae 桫椤科 桫椤 Alsophila spinulosa (Wall. ex Hook.) R. M. Tryon. NT 易危 5 Dipteridac
22、eae 双扇蕨科 中华双扇蕨 Dipteris chinensis Christ EN 易危 6 Dryopteridaceae 鳞毛蕨科 全缘贯众 Cyrtomium falcatum (Linn. f.) Presl. VU 濒危 7 Huperziaceae 石杉科 华南马尾杉 Phlegmariurus fordii (Baker) Ching NT 极危 8 Loxogrammaceae 剑蕨科 柳叶剑蕨 Loxogramme salicifolia (Makino) Makino 易危 9 Ophioglossaceae 瓶尔小草科 心叶瓶尔小草 Ophioglossum reti
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