DB42 T 1591-2020 畜禽肉及肉制品中牛羊猪鸡鸭源性成分定性PCR检测方法.pdf

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1、ICS 67 120 10CCS B 45湖 北 省 地 方 标 准DB42/T 1591 202042畜 禽 肉 及 肉 制 品 中 牛 羊 猪 鸡 鸭 源 性 成 分定 性 PCR检 测 方 法 Detection of bovine, ovine, caprine, pig, chicken and duck derived materials in meatsand meat products of livestock and poultry by qualitative polymerase chain reaction(PCR) method 2020 -07- 07发 布 202

2、0- 11 -07实 施湖 北 省 市 场 监 督 管 理 局 发 布 DB42/T XXXXX XXXX I 目 次前 言 .II1 范 围 .12 规 范 性 引 用 文 件 .13 术 语 和 定 义 .14 原 理 .15 试 剂 和 材 料 .16 仪 器 和 设 备 .3 7 分 析 步 骤 .38 结 果 分 析 .59 结 果 判 定 与 表 述 .510 PCR产 物 测 序 结 果 判 定 与 表 述 .511 检 测 过 程 中 防 止 交 叉 污 染 的 措 施 .512 废 弃 物 处 理 .5附 录 A（ 资 料 性 ） 扩 增 产 物 序 列 （ 来 源 NCBI

3、） .7 FORMTEXT FORMTEXT DB42/T 1591 FORMTEXT 2020 II 前 言本 文 件 按 照 GB/T 1.1 2020 标 准 化 工 作 导 则 第 1部 分 ： 标 准 化 文 件 的 结 构 和 起 草 规 则 的 规 定起 草 。请 注 意 本 文 件 的 某 些 内 容 可 能 涉 及 专 利 。 本 文 件 的 发 布 机 构 不 承 担 识 别 这 些 专 利 的 责 任 。本 文 件 由 华 中 农 业 大 学 提 出 。本 文 件 由 湖 北 省 农 业 农 村 厅 归 口 。本 文 件 起 草 单 位 ： 华 中 农 业 大 学 、 武

4、 汉 市 动 物 疫 病 预 防 控 制 中 心 。本 文 件 主 要 起 草 人 ： 刘 榜 ， 王 文 君 ， 付 明 ， 周 翔 ， 陶 利 文 ， 刘 祖 红 ， 王 小 康 ， 张 庆 德 ， 阮 征 。本 文 件 实 施 中 的 疑 问 可 咨 询 湖 北 省 农 业 农 村 厅 ， 联 系 电 话 ： 027-87665821， 邮 箱 ： ；华 中 农 业 大 学 ， 联 系 电 话 ： 027-87382290， 邮 箱 ： 。 对 本 文 件 的 有 关 修 改 意见 及 建 议 请 反 馈 至 华 中 农 业 大 学 ， 联 系 电 话 ： 027-87282038， 邮

5、 箱 ： 。 FORMTEXT FORMTEXT DB42/T 1591 FORMTEXT 2020 1 畜 禽 肉 及 肉 制 品 中 牛 羊 猪 鸡 鸭 源 性 成 分定 性 PCR 检 测 方 法1 范 围本 文 件 规 定 了 牛 （ 普 通 牛 、 瘤 牛 、 牦 牛 和 水 牛 ） 、 羊 （ 绵 羊 和 山 羊 ） 、 猪 （ 家 猪 和 野 猪 ） 、 鸡 、 鸭源 性 成 分 的 定 性 PCR检 测 方 法 。本 文 件 适 用 于 牛 （ 普 通 牛 、 瘤 牛 、 牦 牛 和 水 牛 ） 、 羊 （ 绵 羊 和 山 羊 ） 、 猪 （ 家 猪 和 野 猪 ） 、 鸡 、

6、 鸭的 肉 及 肉 制 品 中 源 性 成 分 的 定 性 PCR检 测 。2 规 范 性 引 用 文 件 下 列 文 件 中 的 内 容 通 过 文 中 的 规 范 性 引 用 而 构 成 本 文 件 必 不 可 少 的 条 款 。 其 中 ， 注 日 期 的 引 用 文 件 ，仅 该 日 期 对 应 的 版 本 适 用 于 本 文 件 ； 不 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 其 最 新 版 本 （ 包 括 所 有 的 修 改 单 ） 适 用 于 本文 件 。GB/T 6682 分 析 实 验 室 用 水 规 格 和 试 验 方 法GB/T 19495.2 转 基 因 产 品 检 测 实

7、 验 室 技 术 要 求GB/T 27403-2008 实 验 室 质 量 控 制 规 范 食 品 分 子 生 物 学 检 测3 术 语 和 定 义本 文 件 没 有 需 要 界 定 的 术 语 和 定 义 。4 原 理 根 据 牛 、 羊 、 猪 、 鸡 和 鸭 的 物 种 特 异 性 序 列 ， 设 计 特 异 性 引 物 ， 对 待 检 样 品 提 取 的 DNA进 行 PCR扩 增 ，依 据 扩 增 特 异 性 片 段 的 结 果 ， 判 断 待 检 样 品 中 是 否 含 有 牛 、 羊 、 猪 、 鸡 和 鸭 源 性 成 分 。5 试 剂 和 材 料5.1 除 另 有 规 定 外

8、， 试 剂 为 分 析 纯 或 生 化 试 剂 。 实 验 用 水 符 合 GB/T 6682 的 要 求 。5.2 琼 脂 糖 。5.3 GelRed核 酸 染 料 。注 ： 根 据 需 要 可 选 择 其 他 效 果 相 当 的 核 酸 染 料 作 为 核 酸 电 泳 的 染 色 剂 。5.4 10 mol/L氢 氧 化 钠 溶 液 ： 在 160 mL 水 中 加 入 80.0 g 氢 氧 化 钠 （ NaOH） ， 溶 解 后 ， 冷 却 至 室 温 ，再 加 水 定 容 至 200 mL。5.5 0.5 mol/L乙 二 铵 四 乙 酸 二 钠 溶 液 （ pH 8.0） ： 称 取

9、 18.6 g 乙 二 铵 四 乙 酸 二 钠 （ EDTA-Na 2） ， 加入 70 mL 水 中 ， 再 加 入 适 量 氢 氧 化 钠 溶 液 （ 5.4） ， 加 热 至 完 全 溶 解 后 ， 冷 却 至 室 温 ， 用 氢 氧 化 钠 溶 液（ 5.4） 调 pH 至 8.0， 加 水 定 容 至 100 mL。 在 103.4 kPa（ 121 ） 条 件 下 灭 菌 20 min。 FORMTEXT FORMTEXT DB42/T 1591 FORMTEXT 2020 2 5.6 1 mol/L 三 羟 甲 基 氨 基 甲 烷 -盐 酸 溶 液 （ pH 8.0） ： 称 取

10、 121.1 g 三 羟 甲 基 氨 基 甲 烷 （ Tris） 溶 解于 800 mL 水 中 ， 用 盐 酸 （ HCl） 调 pH 至 8.0， 加 水 定 容 至 1 000 mL。 在 103.4 kPa（ 121 ） 条 件 下灭 菌 20 min。5.7 5 mol/L 氯 化 钠 溶 液 ： 称 取 29.22 g 氯 化 钠 （ NaCl） 溶 于 80mL水 中 ， 加 水 定 容 至 100mL。 在 103.4kPa蒸 汽 压 （ 121 ） 条 件 下 灭 菌 20 min。5.8 10%十 二 烷 基 磺 酸 钠 溶 液 ： 称 取 10 g 十 二 烷 基 磺 酸

11、 钠 （ C12H25SO4Na， SDS） ， 加 入 80 mL 水 中 ， 加热 至 完 全 溶 解 后 ， 冷 却 至 室 温 ， 加 水 定 容 至 100mL。 在 103.4kPa 蒸 汽 压 （ 121 ） 条 件 下 灭 菌 20 min。5.9 DNA 提 取 细 胞 裂 解 液 ： 量 取 200 mL 乙 二 铵 四 乙 酸 二 钠 溶 液 （ 5.5） ， 200 mL 三 羟 甲 基 氨 基 甲 烷 -盐 酸 溶 液 （ 5.6） ， 40 mL 氯 化 钠 溶 液 （ 5.7） ， 200 mL 十 二 烷 基 磺 酸 钠 溶 液 （ 5.8） ， 混 合 后 用

12、 水 定 容至 1 000 mL， 室 温 保 存 ， 备 用 。5.10 20 mg/mL 蛋 白 酶 K 溶 液 ： 将 200 mg 蛋 白 酶 K（ Proteinase K） 溶 于 9.5 mL 水 中 ， 轻 摇 至 完 全 溶解 后 ， 加 水 定 容 至 10 mL。 于 -20 保 存 备 用 。5.11 Tris-饱 和 酚 。 5.12 氯 仿 ： 异 戊 醇 (24:1)： 将 氯 仿 和 异 戊 醇 按 照 24:1的 比 例 配 制 。5.13 无 水 乙 醇 。5.14 75%乙 醇 。5.15 TE缓 冲 液 （ pH 8.0） ： 分 别 量 取 10 mL

13、 三 羟 甲 基 氨 基 甲 烷 -盐 酸 溶 液 （ 5.6） 和 2 mL 乙 二 铵 四 乙酸 二 钠 溶 液 （ 5.5） 溶 液 ， 加 水 定 容 至 1000 mL。 在 103.4 kPa（ 121 ） 条 件 下 灭 菌 20 min。5.16 50TAE 缓 冲 液 ： 称 取 242.2 g 三 羟 甲 基 氨 基 甲 烷 （ Tris） ， 先 用 500 mL 水 加 热 搅 拌 溶 解 后 ，加 入 100 mL乙 二 铵 四 乙 酸 二 钠 溶 液 （ 5.5） ， 用 冰 乙 酸 调 pH至 8.0， 然 后 加 水 定 容 到 1 000 mL。 使 用时 用

14、 水 稀 释 成 1TAE。5.17 Taq酶 。5.18 10PCR缓 冲 液 。5.19 dNTP混 合 液 。5.20 6DNA上 样 缓 冲 液 。5.21 DNA分 子 量 标 记 ： 可 清 楚 的 区 分 100 bp 1 000 bp 的 DNA片 段 。 5.22 物 种 特 异 性 引 物 （ 表 1） 。5.23 引 物 溶 液 ： 用 TE缓 冲 液 （ 5.15） 或 水 分 别 将 引 物 稀 释 到 10 mol/L。5.24 PCR产 物 回 收 试 剂 盒 。 表 1 物 种 特 异 性 引 物 信 息物 种 引 物 名 称 引 物 序 列 片 段 大 小 /

15、bp牛 Bovinae-F 5 -CAGACAAAGGTCAGGAAGTAATC-3 223Bovinae-R 5 -AGATGAGGGAAGAGCAGGTCTG-3羊 Ovis-F 5 -GCAAGAATGGCACCCAAGAC-3 237Ovis-R 5 -TGCCATGTGTGCCGCATTTG-3 猪 Sus-F 5 -GCAATGCTCCAAGGACTTAGTGA-3 154Sus-R 5 -TGTGCTCAAATAGGAAGGTTGTCA-3鸡 Gallus-F 5 -GCAAGGAGATGTAACCCAGTAAAG-3 252Gallus-R 5 -AGAATCAATCAGAAA

16、AATGAAGCC-3鸭 Anas-F 5 -GTCAACGATTGCCCCGAAAC-3 222Anas-R 5 -GGGGACTTTGACGGCATCTT-3 FORMTEXT FORMTEXT DB42/T 1591 FORMTEXT 2020 3 6 仪 器 和 设 备6.1 分 析 天 平 ： 感 量 不 小 于 0.1 mg。6.2 PCR扩 增 仪 ： 升 降 温 速 度 1.5 /s， 孔 间 温 度 差 异 1.0 。6.3 电 泳 槽 、 电 泳 仪 等 电 泳 装 置 。6.4 紫 外 透 射 仪 。6.5 紫 外 分 光 光 度 计 。6.6 凝 胶 成 像 系 统 或

17、 照 相 系 统 。6.7 微 量 可 调 移 液 器 ： 0.1 L 2.5 L， 1 L 10 L， 10 L 100 L， 100 L 1 000 L。6.8 涡 旋 振 荡 器 。6.9 高 速 冷 冻 离 心 机 （ 最 大 离 心 力 12 000 g） 。6.10 恒 温 水 浴 锅 。 7 分 析 步 骤7.1 样 品 制 备采 集 一 定 量 的 畜 禽 肉 或 肉 制 品 并 匀 浆 ， -20 保 存 备 用 。7.2 DNA模 板 制 备7.2.1 试 样 DNA提 取试 样 DNA 提 取 步 骤 如 下 ：a) 称 取 上 述 匀 浆 样 品 0.1 g， 剪 碎

18、或 在 液 氮 中 充 分 研 磨 成 粉 末 后 转 移 至 2 mL 离 心 管 中 （ 不 需 要研 磨 的 试 样 直 接 加 入 ） ；b) 向 样 品 加 入 1 mL细 胞 裂 解 液 （ 5.9） ， 然 后 加 入 30 L蛋 白 酶 K（ 5.10） 溶 液 ， 混 匀 ， 56 消化 6 h 10 h至 无 明 显 组 织 块 ， 4 ， 12 000 g离 心 10 min， 取 上 清 移 至 新 的 2 mL离 心 管 中 ； c) 加 入 等 体 积 的 Tris-饱 和 酚 （ 5.11） ， 缓 慢 颠 倒 混 匀 10 min， 4 ， 12 000 g 离

19、 心 10 min，取 上 清 液 移 至 新 的 2 mL离 心 管 中 ；d) 加 入 0.5倍 体 积 的 Tris-饱 和 酚 （ 5.11） 和 0.5倍 体 积 的 氯 仿 ： 异 戊 醇 （ 24:1） （ 5.12） ， 缓慢 颠 倒 混 匀 10 min， 4 ， 12 000 g 离 心 10 min；e) 取 上 清 液 移 至 新 的 2 mL离 心 管 中 ， 加 入 等 体 积 的 氯 仿 ： 异 戊 醇 （ 24:1） （ 5.12） ， 缓 慢 颠 倒混 匀 10 min， 4 ， 12 000 g 离 心 5 min；f) 多 次 重 复 操 作 步 骤 e)

20、， 直 到 两 相 中 间 不 能 看 到 明 显 的 变 性 蛋 白 质 为 止 ， 取 上 清 液 移 至 新 的 4mL离 心 管 中 ；g) 加 入 2 倍 体 积 -20 预 冷 的 无 水 乙 醇 （ 5.13） ， 轻 轻 摇 晃 至 絮 状 沉 淀 析 出 ， 12000 g 离 心 5min10 min， 倒 掉 上 清 液 ；h) 加 入 1 mL 75%乙 醇 （ 5.14） 洗 涤 沉 淀 ， 12 000 g 离 心 3 min， 吸 去 上 清 液 ， 重 复 1次 2 次 ；i) 室 温 下 放 置 使 残 余 乙 醇 完 全 挥 发 ， 加 入 30L 50 L

21、 TE缓 冲 液 （ 5.15） 溶 解 DNA沉 淀 ， -20保 存 DNA溶 液 。 7.2.2 DNA质 量 评 估使 用 紫 外 分 光 光 度 计 对 试 样 DNA的 质 量 进 行 评 估 ， 检 测 260 nm和 280 nm处 的 吸 光 值 A260和 A280， 满足 以 下 要 求 则 适 宜 进 行 PCR扩 增 ： FORMTEXT FORMTEXT DB42/T 1591 FORMTEXT 2020 4 a) DNA浓 度 为 50 ng/L 1 000 ng/L；b) A260/A280比 值 应 在 1.8 2.0之 间 。7.3 PCR反 应7.3.1

22、试 样 PCR 反 应7.3.1.1 每 个 试 样 PCR反 应 设 置 3 个 平 行 。7.3.1.2 在 PCR 反 应 管 中 按 表 2依 次 加 入 反 应 试 剂 ， 混 匀 。 也 可 采 用 经 验 证 的 、 等 效 的 定 性 PCR 反 应试 剂 盒 配 制 反 应 体 系 。7.3.1.3 将 PCR 反 应 管 放 入 离 心 机 ， 2 000 g离 心 1 min， 取 出 后 放 入 PCR仪 。7.3.1.4 进 行 PCR反 应 。 反 应 程 序 为 ： 95 预 变 性 5 min； 95 变 性 30 s， 60 退 火 30 s， 72 延 伸

23、15 s， 32次 循 环 ； 72 终 延 伸 2 min； 4 降 温 2 min。7.3.1.5 反 应 结 束 后 取 出 PCR 管 ， 对 PCR反 应 产 物 进 行 电 泳 检 测 。 表 2 PCR检 测 反 应 体 系试 剂 用 量 /L 终 浓 度双 蒸 水 13.110 Buffer 2 1dNTPs 混 合 液 （ 各 2.5 mmol/L） 1.6 各 0.2 mmol/L5 U/L Taq酶 0.1 0.025 U/L10 mol/L 上 游 引 物 0.6 0.3 mol/L10 mol/L 下 游 引 物 0.6 0.3 mol/L25 ng/L DNA模 板

24、 2.0 2.5 ng/L总 体 积 20.0 注 ： 若 采 用 定 性 PCR试 剂 盒 ， 则 按 试 剂 盒 说 明 书 的 推 荐 用 量 配 制 反 应 体 系 ， 但 正 向 引 物 和 反 向 引 物 用 量 按 表 2执 行 。7.3.2 对 照 PCR 反 应在 试 样 PCR反 应 的 同 时 ， 应 设 置 阴 性 对 照 、 阳 性 对 照 和 空 白 对 照 。分 别 以 牛 、 羊 、 猪 、 鸡 和 鸭 的 基 因 组 DNA作 为 阳 性 对 照 ； 以 除 上 述 目 标 物 种 以 外 的 常 见 动 物 的 基 因组 DNA作 为 阴 性 对 照 ； 以

25、 水 作 为 空 白 对 照 。各 对 照 PCR反 应 体 系 中 ， 除 模 板 外 ， 其 余 组 分 及 PCR反 应 条 件 与 试 样 PCR（ 7.3.1） 相 同 。7.4 PCR产 物 电 泳 检 测称 量 琼 脂 糖 （ 5.2） 适 量 ， 加 入 1 TAE缓 冲 液 （ 5.16） 至 终 浓 度 为 20 mg/mL， 加 热 溶 解 ， 配 制 成 琼脂 糖 溶 液 。 每 100 mL琼 脂 糖 溶 液 中 加 入 5 L GelRed核 酸 染 料 （ 5.3） ， 混 匀 ， 稍 适 冷 却 后 ， 将 其 倒 入 电泳 板 上 ， 插 上 梳 板 ， 室

26、温 下 凝 固 成 凝 胶 后 ， 放 入 含 1 TAE缓 冲 液 （ 5.16） 电 泳 槽 中 ， 垂 直 向 上 轻 轻 拔 去 梳 板 。 取 5 L PCR 产 物 与 1 L 6 DNA上 样 缓 冲 液 （ 5.18） ， 混 合 后 加 入 凝 胶 点 样 孔 ， 同 时 在 其 中 一 个点 样 孔 中 加 入 DNA分 子 量 标 记 （ 5.19） ， 接 通 电 源 ， 在 2 V/cm 5 V/cm条 件 下 电 泳 检 测 。7.5 凝 胶 成 像 分 析电 泳 结 束 后 ， 取 出 琼 脂 糖 凝 胶 ， 置 于 凝 胶 成 像 仪 上 成 像 。 根 据 D

27、NA分 子 量 标 记 判 断 扩 增 目 的 条 带 的片 段 大 小 （ 表 1） ， 将 电 泳 结 果 形 成 电 子 文 件 存 档 。 如 需 通 过 序 列 分 析 确 认 PCR扩 增 片 段 是 否 为 目 的 DNA片 段 ， 按 照 7.6和 7.7的 规 定 执 行 。 FORMTEXT FORMTEXT DB42/T 1591 FORMTEXT 2020 5 7.6 PCR产 物 回 收按 PCR产 物 回 收 试 剂 盒 说 明 书 ， 回 收 PCR扩 增 的 DNA片 段 。7.7 PCR产 物 测 序 验 证将 回 收 的 PCR产 物 进 行 双 向 测 序

28、 ， PCR扩 增 引 物 作 为 测 序 引 物 ， 测 序 原 理 同 Sanger测 序 法 。 将 获 得的 序 列 分 别 与 牛 源 性 成 分 的 PCR扩 增 产 物 序 列 、 羊 源 性 成 分 的 PCR扩 增 产 物 序 列 、 猪 源 性 成 分 的 PCR扩增 产 物 序 列 、 鸡 源 性 成 分 的 PCR扩 增 产 物 序 列 和 鸭 源 性 成 分 的 PCR扩 增 产 物 序 列 (附 录 A) 进 行 比 对 和结 果 判 定 。8 结 果 分 析阳 性 对 照 的 PCR反 应 中 可 扩 增 出 与 预 期 大 小 一 致 的 DNA片 段 （ 牛

29、、 羊 、 猪 、 鸡 、 鸭 的 片 段 大 小 分 别 为 ： 223 bp、 237 bp、 154 bp、 252 bp、 222 bp） ， 而 阴 性 对 照 及 空 白 对 照 中 均 未 扩 增 出 预 期 DNA片 段 ， 表明 PCR反 应 体 系 正 常 工 作 ， 否 则 重 新 进 行 检 测 。9 结 果 判 定 与 表 述9.1 阳 性 结 果 判 定 与 表 述试 样 中 X的 特 异 性 DNA序 列 得 到 扩 增 且 扩 增 片 段 大 小 与 预 期 片 段 大 小 一 致 ， 表 明 样 品 中 检 测 出 X源 性成 分 ， 表 述 为 “ 样 品

30、中 检 测 出 X源 性 成 分 ， 结 果 为 阳 性 ” 。注 ： X代 表 牛 、 羊 、 猪 、 鸡 、 鸭 中 任 一 待 测 物 种 。9.2 阴 性 结 果 判 定 与 表 述试 样 中 X的 特 异 性 DNA序 列 未 得 到 扩 增 或 扩 增 片 段 大 小 与 预 期 片 段 大 小 不 一 致 ， 表 明 样 品 中 未 检 测 出 X源 性 成 分 ， 表 述 为 “ 样 品 中 未 检 测 出 X源 性 成 分 ， 结 果 为 阴 性 ” 。注 ： 3个 PCR平 行 扩 增 的 结 果 不 一 致 的 ， 应 重 复 检 测 。 重 复 检 测 结 果 仍 不

31、一 致 的 ， 以 多 数 结 果 为 最 终 结 果 。10 PCR产 物 测 序 结 果 判 定 与 表 述若 测 序 结 果 与 附 录 A中 对 应 物 种 的 PCR扩 增 产 物 序 列 的 符 合 程 度 在 95%以 上 （ 含 95%） ， 则 判 断 为 所 扩增 片 段 为 对 应 物 种 DNA片 段 ， 即 检 测 到 对 应 物 种 源 性 成 分 ； 若 符 合 程 度 在 95%以 下 ， 则 判 断 为 所 扩 增 片 段不 是 对 应 物 种 DNA片 段 ， 即 没 有 检 测 到 对 应 物 种 源 性 成 分 。11 检 测 过 程 中 防 止 交 叉

32、 污 染 的 措 施按 照 GB/T 27403-2008中 附 录 D的 规 定 执 行 。 12 废 弃 物 处 理检 测 过 程 中 的 废 弃 物 ， 收 集 后 按 照 GB/T 19495.2规 定 的 废 弃 物 处 理 要 求 进 行 无 害 化 处 理 。 FORMTEXT FORMTEXT DB42/T 1591 FORMTEXT 2020 6 FORMTEXT FORMTEXT DB42/T 1591 FORMTEXT 2020 7 A A附 录 A（ 资 料 性 ）扩 增 产 物 序 列 （ 来 源 NCBI）A.1 牛 源 性 成 分 的 PCR扩 增 产 物 序 列

33、 （ 223 bp） ：1 CAGACAAAGG TCAGGAAGTA ATCCCAGCGC TCATCCCCCC TGGGAAGCAC CCAGGGCTTG61 CCCCAAGATG TGGCCTCCAG TTCCCTGTCA AGACTGTAGC CCTACTAGGA GCTGCAGTCT121 GGCCCCGAGG CCCCTGCTGG GTCTCAGCGG TCCCCTATCA GGGACCAGTG GGACCCTCTC181 TGAAGGGGCT TCACCAACTC CCAGACCTGC TCTTCCCTCA TCTA.2 羊 源 性 成 分 的 PCR扩 增 产 物 序 列 （

34、237 bp） ： 1 GCAAGAATGG CACCCAAGAC ACCAACAGCA CCTAGCTCAA GAGAAACACC AGAGCTACCA61 GTGGCACCTG TGCCACTCAT GGAAAGAGCA GCACCCAGGG CTAGAGTGGC ATCAGAGACA121 CAAGCAGTAC CCAGGCCTAG AGTGGCACCC ATGCCACCTG TGTCACCGAG GACAAGAGCT181 GCACAAGAGA CACCAGCCAC TCCTGTGACA CGTGCGGCAA ATGCGGCACA CATGGCAA.3 猪 源 性 成 分 的 PCR扩

35、 增 产 物 序 列 （ 154 bp） ：1 GCAATGCTCC AAGGACTTAG TGACTTTCCC CAATGTTTGT GAGTCTGGCA GGGTGCAAAT61 TACATCTGCA GTCTTTGCCA GCACCCGTGA CCATCCAGGT GGCTCTGCCT TCTCAGAAGT121 GCCCTGGACC TGACAACCTT CCTATTTGAG CACAA.4 鸡 源 性 成 分 的 PCR扩 增 产 物 序 列 （ 252 bp） ： 1 GCAAGGAGAT GTAACCCAGT AAAGCTGTGA TTTTCCATTT ATACCATTTC AC

36、ATCTGAAA61 CAAATTCCAG TGGGCTTTTT TTTGTTCTTG CTGTTGTTGC TGTTTTCTTC TGAGGACTAG121 AAACAAACAA CGTTTTTAAA ATATCAAGCC ATTATTTAAA TAATCAGCGG CTGGGAGTAC181 AGTGACACTG ATTTAAAGGG ATTAAGCTCC AACCTTAAAG CTCAGCGGGG CTTCATTTTT241 CTGATTGATT CTA.5 鸭 源 性 成 分 的 PCR扩 增 产 物 序 列 （ 222 bp） ：1 GTCAACGATT GCCCCGAAAC CATCATCAAA CGTGCCAAAG ACGTTGTCAA ACAGCCCCAA61 AACGTCAAAC ACCCCCAAAA AGTCATCAAA TGCCCCCAAG CGTGTTGTAG AACACCCCAA121 AATGTCATCG ATCACCCTGA GAACATCATC AAACGCCCCC AAGACATCGT CAAACGCGCC181 AAAGATGTCG TCAAACGCGC CAAAGATGCC GTCAAAGTCC CC 注 ： 划 线 部 分 为 引 物 序 列 所 在 位 置 。