HJ 1017-2019 水质 联苯胺的测定 高效液相色谱法.pdf

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1、中华人民共和国国家环境保护标准 HJ 10172019 水质 联苯胺的测定 高效液相色谱法 Water qualityDetermination of benzidine High performance liquid chromatography 2019-04-13发布 2019-09-01实施 生 态 环 境 部 发 布 HJ 10172019 i 中华人民共和国生态环境部 公 告 2019年 第13号 为贯彻中华人民共和国环境保护法，保护生态环境，保障人体健康，规范生态环境监测工作， 现批准水质 联苯胺的测定 高效液相色谱法等三项标准为国家环境保护标准，并予发布。 标准名称、编号如下。

2、 一、水质 联苯胺的测定 高效液相色谱法（ HJ 10172019）； 二、水质 磺酰脲类农药的测定 高效液相色谱法（ HJ 10182019）； 三、水质 致突变性的鉴别 蚕豆根尖微核试验法（ HJ 10162019）。 以上标准自 2019 年 9 月 1 日起实施，由中国环境出版集团出版，标准内容可在生态环境部网站 （ 特此公告。 生态环境部 2019年4月13日 HJ 10172019 iii 目 次 前 言.iv 1 适用范围.1 2 规范性引用文件.1 3 方法原理.1 4 试剂和材料.1 5 仪器和设备.2 6 样品.2 7 分析步骤.3 8 结果计算与表示.4 9 精密度和准确

3、度.4 10 质量保证和质量控制.5 11 废物处理.5 HJ 10172019 iv 前 言 为贯彻中华人民共和国环境保护法和中华人民共和国水污染防治法，保护生态环境，保障 人体健康，规范水中联苯胺的测定方法，制定本标准。 本标准规定了测定地表水、地下水、生活污水和工业废水中联苯胺的高效液相色谱法。 本标准为首次发布。 本标准由生态环境部生态环境监测司、法规与标准司组织制订。 本标准起草单位：青岛市环境监测中心站。 本标准验证单位：山东省环境监测中心站、农业农村部农产品质量安全监督检验测试中心（青岛）、 威海市环境保护监测站、辽宁北方环境检测技术有限公司、青岛华测检测技术有限公司和国家城市供

4、水 水质监测网青岛监测站。 本标准生态环境部2019年4月13日批准。 本标准自2019年9月1日起实施。 本标准由生态环境部解释。 HJ 10172019 1 水质 联苯胺的测定 高效液相色谱法 警告：实验中使用的有机溶剂具有一定的毒性和挥发性，标准物质具有强致癌性，试剂配制 和样品前处理过程应在通风橱内进行，操作时应按要求佩戴防护器具，避免接触皮肤和衣物。 1 适用范围 本标准规定了测定水中联苯胺的高效液相色谱法。 本标准适用于地表水、地下水、生活污水和工业废水中联苯胺的测定。 当取样体积为 150 ml，试样定容体积为 2.0 ml，进样体积为 40 ml 时，方法检出限为 0.006

5、mg/L， 测定下限为0.024 mg/L。 2 规范性引用文件 本标准引用了下列文件或其中的条款。凡是未注明日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 HJ/T 91 地表水和污水监测技术规范 HJ/T 164 地下水环境监测技术规范 3 方法原理 样品通过阳离子交换固相萃取柱，联苯胺被吸附，用乙酸溶液将联苯胺锁定在固相萃取柱上，用甲 醇淋洗除去杂质，再用氨水甲醇溶液进行洗脱，洗脱液浓缩定容后，用具有荧光检测器的高效液相色谱 分离检测。根据保留时间定性，外标法定量。 4 试剂和材料 除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂，实验用水为不含有机物的纯水。 4.1 盐酸：r（HCl）=1

6、.19 g/ml。 4.2 冰醋酸：r（CH3COOH）=1.05 g/ml。 4.3 氨水：r（NH3H2O）=0.91 g/ml，优级纯。 4.4 氢氧化钠（NaOH）。 4.5 硫代硫酸钠（Na2S2O3）。 4.6 乙酸铵（CH3COONH4）：色谱纯。 4.7 联苯胺：w99.6%。 4.8 甲醇（CH3OH）：液相色谱纯。 4.9 乙醇（CH3CH2OH）。 4.10 乙腈（CH3CN）：液相色谱纯。 4.11 盐酸溶液：1+1。 4.12 甲醇水溶液：1+1。 4.13 乙酸铵溶液：c（CH3COONH4）=0.01 mol/L。 HJ 10172019 2 称取0.77 g乙酸

7、铵（4.6）， 用 水 溶解后，稀释定容至1 L。 4.14 乙酸溶液：3+97。 量取3 ml冰醋酸（4.2）和97 ml水，混匀后备用。 4.15 氢氧化钠溶液：c（NaOH）=1 mol/L。 称取4 g氢氧化钠（4.4），用水溶解后，稀释至100 ml。 4.16 氨水甲醇溶液：5+95。 量取5 ml氨水（4.3）和95 ml甲醇（4.8），混匀后备用。 4.17 联苯胺标准贮备液：r =1 000 mg/ml。 称取0.050 g（精确到0.1 mg）联苯胺（4.7）于50 ml棕色容量瓶中，用甲醇（4.8）溶解并稀释定 容至标线，转移至内衬聚四氟乙烯垫的螺口棕色试剂瓶中保存。此溶

8、液在4以下冷藏、避光可保存 1年。也可直接购买市售有证标准溶液。 4.18 联苯胺标准中间液：r =100 mg/ml。 准确移取1.00 ml 联苯胺标准贮备液（4.17）于10 ml 棕色容量瓶中，用甲醇（4.8）稀释定容至标 线。此溶液在4以下冷藏、避光可保存1年。 4.19 联苯胺标准使用液：r =10.0 mg/ml。 准确移取1.00 ml联苯胺标准中间液（4.18）于10 ml棕色容量瓶中，用甲醇水溶液（4.12）稀释定 容至标线。此溶液在4以下冷藏、避光可保存3个月。使用前，应放至室温并混匀。 4.20 联苯胺标准使用液：r =1.00 mg/ml。 准确移取1.00 ml联苯

9、胺标准使用液（4.19）于10 ml棕色容量瓶中，用甲醇水溶液（4.12）稀释 定容至标线。临用现配。 4.21 固相萃取柱：混合型阳离子交换固相萃取柱，填料为苯磺酸化的聚苯乙烯-二乙烯基苯树脂， 150 mg/6 ml，或其他等效萃取柱。 4.22 滤膜：0.45 mm聚四氟乙烯滤膜。 4.23 氮气：纯度99.99%。 5 仪器和设备 5.1 高效液相色谱仪：具荧光检测器。 5.2 色谱柱：填料粒径为5 mm，柱长15 cm，内径4.6 mm的C18反相色谱柱，或其他等效色谱柱。 5.3 样品瓶：500 ml具磨口塞的棕色细口玻璃瓶或带聚四氟乙烯衬垫的棕色螺纹口玻璃瓶。 5.4 微量注射器

10、：10 ml、50 ml和100 ml。 5.5 氮吹仪。 5.6 超声波清洗仪：输出功率在180 W以上，工作频率为40 kHz。 5.7 固相萃取装置。 5.8 一般实验室常用仪器和设备。 6 样品 6.1 样品采集和保存 按照HJ/T 91和HJ/T 164的相关规定进行样品的采集。采样前，向样品瓶（5.3）中加入硫代硫酸 钠（4.5），每 500 ml 样品加入40 mg。采样时，应使样品充满采样瓶，不留液上空间。如果样品的pH 不在69之间，用盐酸溶液（4.11）或氢氧化钠溶液（4.15）调节pH至69。采集的样品应在4以 HJ 10172019 3 下冷藏、避光保存，5 d内萃取。

11、萃取后的洗脱液在4以下冷藏、避光保存，4 d内分析完毕。 6.2 试样的制备 6.2.1 固相萃取柱的活化 将固相萃取柱（4.21）固定在固相萃取装置（5.7）上，先用5 ml甲醇（4.8）以约2 ml/min的流速 通过固相萃取柱，在填料暴露于空气之前，向柱上加5 ml水，待水剩约2 ml时，停止活化。 6.2.2 富集、净化与浓缩 量取150 ml 样品置于250 ml锥形瓶中，以约2 ml/min的流速通过活化后的固相萃取柱（6.2.1）， 样品完全富集后，加入 5 ml 乙酸溶液（4.14），待乙酸溶液完全流出后，加入 8 ml 甲醇（4.8）淋洗， 待甲醇完全流出后，继续用真空泵抽吸

12、5 min。用7 ml氨水甲醇溶液（4.16）洗脱，洗脱液收集到浓缩 瓶中。然后将浓缩瓶置于氮吹仪（5.5）上，在60浓缩至1 ml，再用水定容至2.0 ml，混匀后经滤膜 （4.22）过滤到棕色样品瓶中，待测。 注：对于悬浮物浓度超过12 mg/L的样品，可先将样品用盐酸溶液（4.11）调节pH至3左右，用超声波清洗仪（5.6） 超声10 min，用经过乙醇（4.9）浸润的滤膜（4.22）过滤。滤液用氢氧化钠溶液（4.15）调节pH至69，再 进行固相萃取。 6.3 空白试样的制备 用实验用水代替样品，按照与试样的制备（6.2）相同步骤进行空白试样的制备。 7 分析步骤 7.1 色谱参考条件

13、 流动相A：乙腈（4.10），流 动 相 B ：乙酸铵溶液（4.13）；洗脱程序为等度洗脱，流动相A/流动相 B=20/80（V/V），流速：1.0 ml/min；柱温：40；激发波长：292 nm，检测波长：395 nm；进样体积： 40.0 ml。 7.2 校准曲线的建立 分别取适量的联苯胺标准使用液（4.19）或联苯胺标准使用液（4.20），用甲醇水溶液（4.12） 稀释，制备至少 5 个浓度点的标准系列，联苯胺的质量浓度分别为 2.00 mg/L、5.00 mg/L、10.0 mg/L、 50.0 mg/L、100 mg/L、200 mg/L（此为参考浓度）。按照色谱参考条件（7.1）

14、，由 低 质 量 浓 度 到 高质量浓 度依次对标准系列溶液进样，以联苯胺的质量浓度（g/L）为横坐标，对应的色谱峰面积或峰高为纵坐 标，建立校准曲线。 7.3 试样的测定 按照与校准曲线的建立（7.2）相同的条件进行试样（6.2.2）的测定。 7.4 空白试验 按照与试样的测定（7.3）相同的条件进行空白试样（6.3）的测定。 HJ 10172019 4 8 结果计算与表示 8.1 定性分析 根据样品中目标化合物与标准系列中目标化合物的保留时间进行定性，可采用不同波长下的荧光强 度比辅助定性，必要时用高效液相色谱-三重四极杆质谱法进行确认。 在本标准推荐的色谱参考条件（7.1）下，联苯胺的标

15、准色谱图见图1。 0.00 100 200 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00 min 0.00 mAU 300 图1 联苯胺标准色谱图（r =50.0 mg/L） 8.2 定量分析 样品中联苯胺的质量浓度r（g/L）， 按照式（1）进行计算： 11VD V rr = （1） 式中：r 样品中联苯胺的质量浓度，g/L； r 1由校准曲线得到的试样中联苯胺的质量浓度，g/L； V1试样定容体积，ml； V取样体积，ml； D稀释倍数。 8.3 结果表示 当测定结果小于1 mg/L时，保留小数点后3位；当测定结果大于等于1 mg/L

16、时，保留 3 位有效数字。 9 精密度和准确度 9.1 精密度 6家实验室对联苯胺加标浓度为0.027 mg/L、0.267 mg/L和1.06 mg/L的地表水样品进行了6次重复 测定：实验室内相对标准偏差分别为1.9%7.2%、1.7%7.5%和1.7%6.3%；实验室间相对标准偏差 分别为8.8%、5.5%和7.5%；重复性限为0.003 mg/L、0.032 mg/L和0.11 mg/L；再现性限为0.006 mg/L、 0.047 mg/L和0.23 mg/L。 HJ 10172019 5 6家实验室对联苯胺加标浓度为0.267 mg/L的生活污水样品进行了6次重复测定：实验室内相对

17、标 准偏差为3.4%6.6%；实验室间相对标准偏差为6.6%；重复性限为0.038 mg/L；再现性限为0.057 mg/L。 6家实验室对含联苯胺平均浓度为0.462 mg/L，加标浓度为0.500 mg/L的工业废水样品进行了加标 前后的6次重复测定：实验室内相对标准偏差分别为1.4%7.0%和1.1%5.3%；实验室间相对标准偏 差分别为8.1%和4.5%；重复性限为0.062 mg/L和0.095 mg/L；再现性限为0.12 mg/L和0.15 mg/L。 9.2 准确度 6家实验室对联苯胺加标浓度为0.027 mg/L、0.267 mg/L和1.06 mg/L的地表水样品进行了6次

18、重复 加标分析测定：加标回收率范围分别为73.9%95.1%、80.6%98.4%和84.0%97.0%；加标回收率最 终值为88.0%15.8%、88.2%12.4%和91.0%10.0%。 6家实验室对联苯胺加标浓度为0.267 mg/L的生活污水样品进行了6次重复加标分析测定：加标回 收率范围为83.8%100%；加标回收率最终值为90.3%11.2%。 6家实验室对含联苯胺平均浓度为0.462 mg/L，加标浓度为0.500 mg/L的工业废水样品进行了6次 重复加标分析测定：加标回收率范围为86.6%102%；加标回收率最终值为93.7%10.6%。 10 质量保证和质量控制 10.

19、1 空白试验 每20个样品或每批次（20个样品/批）应至少做一个实验室空白，测定结果应低于方法检出限。 10.2 校准 校准曲线的相关系数应0.999。每 20 个样品或每批次（20 个样品/批）应测定一个校准曲线中 间浓度点的标准溶液，测定结果与曲线该点浓度的相对误差应在15%之内。 10.3 平行样 每20个样品或每批次（20个样品/批）应至少测定一个平行样，平行样的相对偏差应20%。 10.4 基体加标 每 20 个样品或每批次（20 个样品/批）应至少测定一个基体加标样品，加标回收率应为 70% 120%。 11 废物处理 实验中产生的有机废液应分类收集、集中保管，并做好相应标识，委托有资质的单位进行处理。