GA T 1631-2019 法庭科学 血液、尿液中米氮平和氟西汀检验 气相色谱和气相色谱-质谱法.pdf

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1、 ICS 13.310 A 92 中 华 人 民 共 和 国 公 共 安 全 行 业 标 准 GA GA/T 法庭科学 血液、尿液 中米氮平 和 氟西汀 检验 气相 色谱 和 气相色谱 -质谱法 Forensic sciences Examination methods for mirtazepine and fluoxetine in blood and urine samples GC and GC-MS - -发布 - -实施 中华人民共和国公安部 发布 GA/T I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1 2009 给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。 本文件的发布机

2、构不承担识别这些专利的责任。 本标准由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员会（ SAC/TC 179/SC 1）提出并归口。 本标准起草单位： 北京市公安局 刑事侦查总队 。 本标准起草人：乔静、 张瑛、 覃仕扬、 张文芳、杨继峰、 杨士云、刘永涛、杨继锋、张文芳 。 GA/T 1 法庭科学 血液、尿液 中米氮平 和 氟西汀 检验 气相色谱 和 气相色谱 -质谱法 1 范围 本标准规定了 法庭科学 血液、尿液 中 米氮平 和 氟西汀 的气相色谱（ GC） 定量 检验 方法和 气相色谱 - 质谱（ GC-MS）定性定量 检验方法。 本标准适用于 法庭科学 血液、尿液 中 米氮平 和 氟

3、西汀 的定性 分析和 定量分析 。其他可疑 样 品中 米氮 平 和 氟西汀 的 定性分析和定量分析可参照使用 。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用 水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件。 4 原理 以空白样品和添加样品作对照，按平行操作的要求，对血液及尿液进行提取、净化及浓缩，采用气 相色谱 法 定 量 、气相色谱 -质谱 法 定性定量

4、，以保留时间、质谱特征离子碎片峰和相对丰度 比 作为定性 判断依据； 以 峰面积 为依据 ， 采 用外标法或内标法进行定量分析。 5 试剂 和 材料 5.1 试剂 实验用水应符合 GB/T 6682 中规定的三级水。除非另有说明，在分析中使用的试剂均为分析纯，试 剂包括： a) 乙 腈； b) 正己烷 ； c) 无水硫酸钠； d) 1mol/mL 氢氧化钠溶液 ： 称量 4.0g 氢氧化钠 ，用水溶解，并稀释至 100mL； e) 标准溶液： 1) 1.0mg/mL 标准 物质溶液 ： 根据米氮平和氟西汀标准物质的纯度 及盐型换算后，各称取适 量 ，分别 用甲醇配制 1.0mg/mL 灭多威和

5、灭多威肟标准物质溶液，置于冰箱中冷藏保存。 有效期 6 个月。或采用市售标准溶液 ； 2) 0.1mg/mL 混合 标准工作 溶 液（ 100.0g/mL）： 移 取 1.0mg/mL 米 氮 平 和 氟西汀 标准 物质 溶 液各 1.0mL，用甲醇 定容至 10mL， 混匀，密封，置于冰箱中冷藏 保存。 有效期 3 个月。 实验中所用 其他 浓度的混合标准工作 溶 液均由 0.1mg/mL 标准物质溶液用甲醇稀释得到 ； GA/T 2 3) 1.0mg/mL 内标溶液：根据内标 普罗地芬（ SKF525A） 标准物质 的纯度，用甲醇配制 1.0mg/mL SKF525A 内标物质溶液，置于冰

6、箱中冷藏保存。有效期 6 个月。或采用市售标准溶液； 4) 0.1mg/mL 内标工作溶液：移取 1.0mg/mL 的内标 SKF525A 标准溶液 1.0mL，用甲醇定容至 10mL，混匀，密封，置于冰箱中冷藏保存 。 有效期 3 个月。实验中所用其他浓度的内标 溶液均由 0.1mg/mL 内标溶液用 甲醇稀释得到。 注： 特殊情况下可使用对照溶液代替标准溶液。 5.2 材料 材料包括： a) 具盖离心管； b) 具塞玻璃试管。 6 仪器 和设备 仪器 和设备 包括： a) 气相色谱 -质谱仪： 配有电子轰击源（ EI） ； b) 气相色谱仪：配有火焰离子化检测器（ FID）； c) 振荡

7、器； d) 电子天平； e) 离心机 ； f) 浓缩器。 7 操作方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品 提取 7.1.1.1 液液萃取 移 取 血液、尿液 检材 样品 1.0mL 2.0mL 于具 盖离心 管中 （若采用内标法，则加入 内标 SKF525A 溶 液，使内标浓度为 1.0g/mL，混匀 ），用 0.1mol/L 的 NaOH 溶液调节 pH 值 至 11， 加入 正己烷 /乙腈 （体 积比 98:2） 混合溶剂 10mL， 振荡 5min， 8000r/min 离心 5min，分离有机相；重复提取一次，合并两次 提取的有机相 ，用 无水硫酸钠（ 15g） 脱水 ， 收集 滤液

8、 置于 浓缩器上 80 浓缩至干， 残留物 用 正己烷 / 乙腈 （体积比 98:2） 混合溶剂 0.2mL 溶解， 作为检材样品提取液 供 GC-MS 分析 。 7.1.1.2 质控样品制备 取等量相似基质的空白样品（若无相似基质空白样品可用血液替代）两份于具盖 离心管中，一份作 为空白样品，一份添加米氮平和氟西汀标准品，作为添加样品（添加样品的浓度为 1.0g/mL），与检 材样品平行操作，得到空白样品提取液和添加样品提取液供仪器检测。 若采用内标法，不做添加样品，空白样品（不加内标）与检材平行操作， 供 GC-MS 分析 。 7.1.2 仪器检测 7.1.2.1 仪器条件 （ 气相色谱

9、-质谱 ） 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整： a) 色谱柱： DB-5MS毛细色谱 柱（ 30m0.25mm0.25m）或 等效色谱柱 ； GA/T 3 注： DB-5MS 柱 是 Aglient 公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该 产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b) 色谱柱温程： 150保持 1min，以 10/min速率升温至 280，保持 15min； c) 进样口温度： 280； d) 传输线温度： 260； e) 载气：氦气； f) 进样方式：分流进样，分流比 10 1； g)

10、 电子轰击能量： 70eV； h) 离子源温度： 250； i) 倍增器电压：自动调谐值； j) 柱流量： 1mL/min ； k) 质量 扫描 范围： 40amu450amu ； l) 扫描 方式：全扫描（ Scan）。 7.1.2.2 进样 分别吸取检材、空白和添加样品提取液及标准工作溶液 （若采用内标法，分别吸取检材、空白和内 标工作溶液及标准工作溶液） ，按 7.1.2.1的分析条件进样分析。 7.2 定量分析 7.2.1 样品 提取 准确量取血液 或尿液 样品 1.0mL 2.0mL两 份 （若采用内标法，则加入内标 SKF525A溶液，使内标浓 度为 1g/mL，混匀）， 按 7.

11、1.1进行操作。 另取等量相似基质的空白样品三份，其中两份分别添加米氮平和氟西汀标准物质作为添加样品（添 加样品中目 标物含量应为检材样品中目标物含量的 (100 50)%，若采用内标法，则添加样品中还需加入 内标 SKF525A溶液，使内标浓度为 1g/mL，混匀 ），另一份作为空白样品，与检材样品平行操作，得到 空白样品提取液和添加样品提取液供仪器 分析 。 7.2.2 仪器检测 7.2.2.1 仪器条件 7.2.2.1.1 气相色谱条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整： a) 检测器： FID； b) 色谱柱： DB-5毛细色谱 柱（ 30m0.25mm0

12、.25m）或 等效色谱柱 ； 注： DB-5 柱 是 Aglient 公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产 品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 c) 色谱柱温程： 160保持 1min，以 10/min速率升温至 280，保持 20min； d) 进样口温度： 280； e) 检 测器温度： 280 ； f) 载气 ：氮气 ； g) 进样方式：分流进样 ； h) 分流比： 10 1； i) 柱流量： 1mL/min。 GA/T 4 7.2.2.1.2 气相色谱 -质谱条件 按 7.1.2.1规定的条件分析。 7.2.2.2 进

13、样 分别吸取检材、空白和添加样品提取液及标准工作溶液 （若采用内标法，还需进样内标工作溶液） ， 按 7.2.2.1的分析条件每个样品进样分析 2 3次。若要报告测量不确定度，每个样品分析次数应不少于 6 次。 7.2.2.3 计算 7.2.2.3.1 计算含量 7.2.2.3.1.1 外标 -单点法 记录各样品提取液平行进样 2 3 次 的 目标物保留时间和峰面积值，按公式（ 1）计算含量： 添样添 样添样 VMA VMAW = . (1) 式中： W 检材样品 中目标物的含量，单位为微克每克 （ g/g） 或微克每毫升（ g/mL） ； A 样 检材 样品提取液 中目标物峰面积平均值； M

14、 添 添加样品中 目标物 添加量，单位为微克 （ g ） ； V 样 检材 样品 的定容体积，单位为毫升 （ mL） ； A 添 添加样品 提取液 中目标物峰面积平均值； M 样 检材 样品 的取样量，单位为克 （ g） 或毫升 （ mL） ； V 添 添加样品的定容体积，单位为毫升 （ mL） 。 7.2.3.1.2 内标 -单点 法 记录各样品 提取 液 平行进样 2 3 次的目标物及内标物峰面积值，按公式 （ 2） 计算校正因子 ， 按公 式 （ 3） 计算含量 ： MAf = 标内 内标 . (2) 式中： f 校正因子； M标 添加样品中 目标物 添加量，单位为微克（ g ）； A内

15、 添加样品中内标物峰面积平均值 ； M内 添加样品中内标物添加量，单位为微克（ g ）； A 标 添加样品中目标物峰面积平均值 。 样内 内样 MA MAfW = . (3) 式中： W 检材 样品中目标物含量，单位为微克每克（ g/g）或微克每毫升（ g/mL)； f 校正因子； A 样 检材样品提取液中目标物 峰面积 平均值 ； M 内 检材样品中 内标物添加量，单位为微克（ g）； GA/T 5 A 内 检材样品提取液中内 标物 峰面积 平均值 ； M 样 检材样品的取样量 ，单位为克（ g）或毫升（ mL）； 7.2.2.3.2 计算相对相差 记录 2 份平行操作的 检材 样品中目标物

16、的 含量，按公式（ 4）计算相对相差： %10021 = X XXRD . (4) 式中： RD 相对相差， 用百分比（ %）表示 ； X1、 X2两个检材 样品 平行定量测定的含量数值； X 两个检材 样品 平行定量测定含量的平均值。 8 结果评价 8.1 定性结果评价 8.1.1 阳性结果评价 在相同条件下进行样 品测定时，检材样品中目标物的色谱峰保留时间与标准溶液一致（相对误差在 1%之内），且在扣除背景后的检材样品质谱图中，目标物的质谱特征离子与标准溶液一致，特征离子 丰度比与浓度接近的标准溶液相比，相对偏差不超过表 1 规定的范围，空白样品无干扰，则可判断检材 样品中检出目标物。 表

17、 1 特征离子丰度比的最大允许相对偏差范围 特征离子丰度比 50% 20 50 10 20 10% 最大允许相对偏差 10 15 20% 50% 8.1.2 阴性结果评价 外标法阴性评价 ， 检材样品中未出现与 目标物 （衍生后标准物质或衍生后对照品） 一致的色谱峰， 且添加样品中出现与目标物一致的色谱峰，空白样品无干扰，则可判断检材样品中未检出目标物。 内标法阴性 评价， 检材样品中未出现与目标物一致的色谱峰， 且检材样品中 出现与 内标物 （ 衍生后 内标物质 ）一致的色谱峰，空白样品无干扰 ， 则可判断检材样品中未检出目标物。 米氮平、氟西汀 检出限、 回收率 、 工作曲线和相关谱图 参

18、见 附录 A。 8.2 定量结果评价 如果目标物含量的 RD 20%，定量数据可靠，其含量按 两 份检材的平均值计算。 如果检材样品中 目标物含量的 RD20%，定量数据不可 靠。应按 7.2重新提取检验。 GA/T 6 A A 附 录 A （资料性附录） 米氮平、氟西汀 回收率 、 工作曲线和相关谱图 A.1 米氮平和氟西汀在样品中的回收率见表 A.1。 表 A.1 米氮平和氟西汀 的回收率 （ 2mL 检材分别添加 1g 标准品） 目标物 定量离子 血液中回收率 RSD 尿液中回收率 RSD 米氮平 195 101.2% 4.08% 104.3% 2.74% 氟西汀 44 74.9% 4.

19、29% 68.1% 3.92% 注： n 表示样品平行操作份数。 A.2 米氮平、氟西汀工作曲线 及检出限 见表 A.2。 表 A.2 米氮平、氟西汀的工作曲线及检出限（ S/N=10） 目标物 标准溶液 工作曲线 标准溶液 检出限 ng/mL 血液添加方法工作曲线 血液添加方法 检出限 ng/mL 米氮平 Y=6035.9X-1410.6 r2=0.9992 50 Y=13806X-16206 r2=0.9997 30 氟西汀 Y=-28802.4X+85755.9 r2=0.9980 30 Y=163698.9X-41549.7 r2=0.9985 100 A.3 GC-MS 分析，米氮平

20、检出限为 30ng/mL，氟西汀检出限为 100ng/mL。 A.4 米氮平质谱图见图 A.1。 50 1 0 0 1 5 0 2 0 0 2 5 0 3 0 0 3 5 0 4 0 0 4 5 0 0 25 50 75 1 0 0 % 195 43 20871 111 167 26572 139 234 303 361 436411387326 图 A.1 米氮平 质谱图 （ 特征离子： 195（基峰）， 208， 265） GA/T 7 A.5 氟西汀质谱图见图 A.2。 50 1 0 0 1 5 0 2 0 0 2 5 0 3 0 0 3 5 0 4 0 0 4 5 0 0 25 50

21、75 1 0 0 % 44 59 91 148 309183 251232205 277 368 393 419343 446 图 A.2 氟西汀 质谱图 （ 特征离子： 44（基峰）， 104， 309） A.6 内标 SKF525A质谱图见图 A.3。 50 1 0 0 1 5 0 2 0 0 2 5 0 3 0 0 3 5 0 4 0 0 4 5 0 0 25 50 75 1 0 0 % 86 99 58 16544 209131 281 338239 309258 368 393 427 图 A.3 内标 SKF525A质谱图 （ 特征离子： 86（基峰）， 99， 165） A.7 米氮平、氟西汀化学结构见图 A.4。 氟西汀（ Fluoxetine） 米氮平（ Mirtazapine） 图 A.4 氟西汀、米氮平化学结构图 _