GA T 1648-2019 法庭科学 疑似毒品中鸦P检验 液相色谱和液相色谱-质谱法.pdf

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1、ICS 13.310 A 92 GA 中华人民共和国 公共安全 行业标准 GA/T 法庭科学 疑似毒品中鸦片检验 液相色谱 和液相色谱 -质谱法 Forensic sciences Examination methods for opium in suspected drugs LC and LC-MS - - 发布 - - 实施 中华人民共和国公安部 发布 GA/T I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1 2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。 本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本 标准 由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员会（ SAC/TC

2、179/SC1） 提出并 归口。 本 标准 起草单位：公安部物证鉴定中心 、 山东省公安厅 。 本 标准 主要起草人： 高利生 、张春水、郑珲、 翟晚枫、 许满军、 常颖、赵阳、 贺剑锋、 刘克林、黄 星、王一、王 蔚 昕 、赵彦彪、李彭 、杨虹贤、郑晓雨 。 GA/T 1 法庭科学 疑似毒品 中 鸦片检验 液相色谱和液相色谱 -质谱法 1 范围 本标准 规定了 法庭科学领域 鸦片中有效成分吗啡、可待因、蒂巴因、罂粟碱、那可汀的 液 相色谱 - 质谱 （ LC-MS） 定性 检验 方法 和吗啡的 液 相色谱（ LC） 定量 检验 方法 。 本 标准 适用于 法庭科学领域鸦片 中吗啡、 可待因、

3、蒂巴因、罂粟碱、那可汀的定性 分析 及吗啡的定 量 分析 。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单 ） 适用于本文件。 GB/T 4883 2008 数据的统计处理和解释 正态样本离群值的判断和处理 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 JJF 1059 2012 测量不确定度评定与表示 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本 文件 。 4 原理 对疑似毒品 样品 中的吗啡、可待因、蒂巴因、罂粟碱、那可

4、汀进行提取 。 采 用 液相色谱 -质谱 检测， 以保留时间 、 质谱特征离子碎片峰 和 离子 丰度 比 作为定性判断依据； 采 用 液相色谱检测， 用标准曲线法 进行定量分析 。 5 试剂 和材料 5.1 试剂 实验用水应符合 GB/T 6682 中规定的一级水。除非另有说明，在分析中使用的 试剂 均为 色谱 纯， 试 剂包括： a） 乙腈； b） 甲醇； c） 甲酸； d） 磷酸二氢钾 ：分析纯 ； e） 庚烷磺酸钠 ：分析纯 ； f） 内标物：氨茶碱 ； GA/T 2 g） 标准溶液： 1） 标准物质 溶液 ： 1.0mg/mL吗啡、可待因、蒂巴因、罂粟碱、那可汀 等五种 标准 物质溶

5、液 ； 2） 标准工作溶液按实验需求分为以下三类： 定性 用标准工作 溶 液： 分别移取 1.0mg/mL的 吗啡、可待因、蒂巴因、罂粟碱、那可汀 等五种标准物质溶液 适量 ，用甲醇 稀释， 配制成 1ng/mL的 吗啡、可待因、蒂巴因、罂 粟碱、那可汀 标准工作溶液 。 其余浓度定性用标准工作溶液，按实验需求由 1.0mg/mL 的标准物质溶液稀释配制； 外标法 用标准工作 溶 液：使用 1.0mg/mL吗啡 标准物质溶液 ， 用甲醇逐级稀释 ，配 制 成 0.2mg/mL、 0.05mg/mL、 0.02mg/mL、 0.005mg/mL、 0.002mg/mL的吗啡标准工作溶液 ； 内标

6、法用标准工作 溶 液： 称取氨茶 碱 500mg，用甲醇定容到 50mL容量瓶中，配制成 10.0 mg/mL氨茶碱内标储备溶液（置于冰箱中保存， 有效期 12个月）。使用时用甲醇稀释， 配制成 0.2mg/mL的 氨茶碱溶液 。 内标法用标准工作溶液 制备 方法 参见附录 A中表 A.1， 移取相应体积的 1.0mg/mL吗啡 标准物质溶液 、 0.2mg/mL氨茶碱溶液至 1mL容量瓶中， 用甲醇定容至刻度， 配制成 吗啡 浓度分别为 0.2mg/mL、 0.05mg/mL、 0.02mg/mL、 0.005mg/mL、 0.002mg/mL的 吗啡 标准 工作 溶液。 5.2 材料 材料

7、包括： a） 具盖 离心管； b） 有机微孔滤膜： 0.22m。 6 仪器 和设备 仪器和 设备 包括： a） 液相色谱仪（ LC） ： 配有二极管阵列（ DAD）或紫外检测器（ UV）； b） 液相色谱 -质谱 仪 （ LC-MS） ： 配 电喷雾离子源 、 三重 四 极 杆质量分析器 ； c） 电子天平：分度值 d： 0.01mg； d） 离心机； e） 涡旋振荡器； f） 真空抽 滤 泵； g） 超声清洗仪； h） 10mL和 1mL移液器或移液管； i） 10mL瓶口移液器。 7 操作方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品 提取 称取样品约 10mg于具盖离心管中 ，加入 10mL甲

8、醇， 密封并振荡 10min， 6000r/min离心 5min，离心 后 取出适量上清液稀释，用 0.22m的有机系微孔滤膜过滤， 用 LC-MS分析。 同时用 LC-MS分析 定性用 标准工作溶液 进行 质量控制。 GA/T 3 7.1.2 仪器检测 7.1.2.1 液相色谱 -质谱 仪 条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整： a） 色谱柱： poroshell 120 C18 （ 3.0mm50mm,2.7m） 或其他等效柱 ； 注： poroshell 120 C18柱为 Agilent 公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表

9、示 对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b） 流动相 ： A： 0.2%甲酸 溶液 ， B： 甲醇； c） 梯度程序： 见表 1； 表 1 梯度洗脱程序 时间 min A B 0 75% 25% 3.5 67% 33% 6 65% 35% 6.01 5% 95% 6.5 5% 95% d） 流速： 0.3mL/min； e） 离子源：电喷雾离子源； f） 扫描方式：正离子模式； g） 毛细管 电压 ： 4000V； h） 干燥气： 10 L/min； i） 干燥气温度： 350 ； j） 雾化气： 25psi； k） 后处理时间（平衡时间 ） ： 3.5mi

10、n； l） 后处理流速： 0.4mL/min； m） 吗啡、可待因、蒂巴因、罂粟碱、那可汀的 离子对和 Fragmentor电压 、 碰撞能量 (CE)： 见表 2。 表 2 质谱参考 条件 名称 母离子 子离子 Fragmentor 电压 V 碰撞能量 eV 吗啡 286.1 201.0 130 30 165.0 42 可待因 300.2 165.0 120 42 215.0 32 蒂巴因 312.2 58.1 85 18 266.0 18 罂粟碱 340.1 202.1 130 29 324.1 29 那可汀 414.1 220.1 120 25 353.1 25 GA/T 4 7.1.2

11、.2 进样 分别吸取（空白）甲醇溶液、 定性用 标准 工作 溶液和 样品提取液 适量 ， 按 7.1.2.1条件进样分析。 7.1.3 记录 分 别记录标准物质 和 样品中目标物 的 保留时间 、 定性离子对 及 离子 丰度 比 。 7.2 定量分析 7.2.1 外标法 7.2.1.1 标准 工作曲线绘制 按照 7.2.1.4.1条件分析 外标法用 标准工作溶液， 以 标准工作溶液中目标物的峰面积值为纵坐标，目 标物浓度为横坐标， 绘制成线性范围为 0.002mg/mL 0.2mg/mL的 吗啡 标准工作曲线 。 7.2.1.2 标准工作曲线监测 采用 浓度为 0.005mg/mL和 0.2m

12、g/mL的标准工作 溶液作为监测样品，建立标准工作曲线时，每个监 测样品各分析 10次，计算吗啡峰面积的平均值及标准偏差（ SD）。每次检验前先分析监测样品， 监测 样品的结果在平均值 3SD之间，标准工作曲线有效 ； 监测样品的结果 超出 平均值 3SD， 应重新绘制标 准工作曲线。 7.2.1.3 样品提取 平行称取样品 2份各约 10mg于具盖离心管中 （如需提供定量结果的不确定度，则平行称取样品 6份）， 加入 10mL甲醇， 密封并振荡 10min， 6000r/min离心 5min，离心后取出适量上清液稀释，用 0.22m的有 机系微孔滤膜过滤 ， 供 LC-DAD或 LC-UV分

13、析。 可根据实验情况调整样品称量重量。 7.2.1.4 仪器检测 7.2.1.4.1 液相色谱仪 条件 以下为参考条件，按照本 方 法所获得的液相色谱图参见 附录 B，可根据不同品牌仪器和不同样品等 实际情况进行调整： a） 检测器：二极管阵列或可变波长紫外检测器； b） 色谱柱： ODS， (150mm4.6mm,5m） ； c） 柱温： 30 ； d）离子对试剂：称取 6.8g磷酸二氢钾和 0.51g庚烷磺酸钠，用 水定容于 1L容量瓶中，配制成 0.05M 磷酸二氢钾和 0.0025M庚烷磺酸钠离子对试剂， 摇匀。 用真空抽滤泵 过滤 ，超声清洗仪 超声， 即可使用； e） 流动相： A

14、： 离子对试剂 ， B： 乙腈； f）梯度程序： 见 表 3； GA/T 5 表 3 梯度洗脱程序 时间 min A B 0 90% 10% 12 70% 30% 15 30% 70% 17 30% 70% g） 流速： 1.0mL/min； h） 检测波长： 220nm，带宽： 4nm。 7.2.1.4.2 进样 分别吸取（空白）甲醇溶液、 外标法用 标准工作溶液和样品提取液 适量 ，按 7.2.1.4.1条件进样分析。 7.2.1.5 计算 7.2.1.5.1 含量计算 用标准工作曲线和公式（ 1）对样品进行定量 ，计算 含量 Xi。 100% iiVXC m= (1) 式中： Xi 样品

15、中目标物含量 ， 用百分比（ %）表示 ； Ci 从标准曲线上得到的目标物浓度，单位为 毫 克每毫升（ mg/mL）； V 样品的定容体积 （含稀释倍数） ，单位为毫升（ mL）； m 样品的取样量，单位为毫克 （ mg）。 7.2.1.5.2 相对相差 计算 对两个平行测定数据按照公式（ 2）进行相对相差（ RD）计算。 100%120X - XRD = X （ 2） 式中： 相对相差， 用百分比（ %）表示 ； 1、 2 两个样品平行定量测定的含量数值； 0 两个样品平行定量测定含量的平均值。 7.2.1.5.3 异常值检验 根据 GB/T 4883 2008， 按照公式（ 3）对 6份（

16、 或 5份）平行测定数据进行 格拉布斯（ Grubbs） 可疑 值判别。 i0i X -XG= s （ 3） GA/T 6 式中 ： 可疑值 ； 0 平均值 ； 6 个（或 5 个）数据的单次测定标准差 ； Grubbs 统计量。 7.2.2 内标法 7.2.2.1 标准 工作曲线绘制 按照 7.2.1.4.1条 件分析 内标 法用 标准工作溶液， 记录 目标物和 氨茶碱 的峰面积 ，以峰面积 比值 为 纵 坐标，浓度 比值 为横坐标， 绘制成线性范围为 0.002mg/mL 0.2mg/mL的 标准 工作曲线 。 7.2.2.2 标准工作曲线监测 采用 吗啡浓度为 0.005mg/mL和 0

17、.2mg/mL的 内标 法用 标准工作溶液作为监测样品，建立标准工作曲 线时，每个监测样品各分析 10次，计算 吗啡与氨茶碱峰面积比值的 平均值及 SD。每次检验前先分析监 测样品， 监测样品的结果在平均值 3SD之间，标准工作曲线有效 ； 监测样品的结果 超出 平均值 3SD， 应重新绘制标准工作曲线。 7.2.2.3 样品 制备 平行称取样品 2 份各约 10mg 于具盖离心管中 （如需提供定量结果的不确定度，则平行称取样品 6 份 ） ，加入 10mL甲醇，充分振荡，离心后移取上清液 200L 于 1mL容量瓶中，向容量瓶中加入 0.2mg/mL 内标 液 100L，用甲醇定容至刻度，

18、振荡均匀后 用 0.22m有机 系 微孔滤膜 过滤 ， 供 LC-DAD 或 LC-UV 分析。 可根据实验情况调整样品称量重量。 7.2.2.4 仪器检测 7.2.2.4.1 液相色谱仪 条件 同 7.2.1.4.1。 7.2.2.4.2 进样 分别吸取（空白）甲醇溶液、内标 法用 标准工作溶液和加入内标的样品提取液 适量 ，按 7.2.1.4.1条 件进样分析。 7.2.2.5 计算 7.2.2.5.1 含量计算 用标准工作曲线和公式（ 4）对样品进行定量，计算 含量 Xi。 100% i VX k C m= 内 (4) 式中： Xi 样品中目标物含量 ， 用百分比（ %）表示 ； k 从

19、标准曲线上得到的目标物和内标的浓度比； C 内 内标浓度，单位为毫克每毫升（ mg/mL）； V 样品的定容体积 （含稀释倍数） ，单位为毫升（ mL）； GA/T 7 m 样品的取样量，单位为 毫 克（ mg）。 7.2.2.5.2 相对相差计算 同 7.2.1.5.2。 7.2.2.5.3 异常值检验 同 7.2.1.5.3。 8 结果评价 8.1 定性结果评价 阳性结果评价：在相同条件下进行样品测定时，样品中目标物的色谱峰保留时间与 浓度接近的定性 用 标准 工作 溶液一致（相对误差在 2.5%之内）、目标物的定性离子（至少两对定性离子）与 浓度接近 的定性用 标准 工作 溶液一致，且离

20、子丰度比与浓度接近的 定性用 标准 工作 溶液相比，相对偏差不超过表 4规定的范围，空白 甲醇溶液 无干扰，则可判断样品中检出目标物。 表 4 离子丰度比的最大允许偏差范围 离子丰度比 50% 20 50 10 20 10% 最大允许相对偏差 20 25 30% 50% 阴性结果评价：样品未出现与 1ng/mL 定性用标准工作 溶液一致的色谱峰，空白 甲醇溶液 无干扰， 则可判断检材样品中未检出目标物。 LC-MS分析，检 出 限为 1ng/mL。 8.2 定量结果评价（外标法及内标法 ） 8.2.1 含量结果有效性 对两个平行测定数据进行相对相差（ RD）计算， 当 RD10%时 ，数据有效

21、； 当 RD 10%时 ，需要 重新检验。 8.2.2 异常值检验 对 6份（ 5份）平行测定数据进行 Grubbs可疑值判别， GiGn（ 95） ，数据有效， GiGn（ 95） 时，应剔除 该数据，但只能剔除 1个数据，否则本次测定无效，需要重新检验。 当测定次数 n=6 时 ， G6（ 95） =1.822；当测定次数 n=5 时， G5（ 95） =1.672。 8.2.3 含量结果计算 以 2 份 样品含量测定的平均值作为含量结果 （ 如需提供定量结果的不确定度，则以 6 份 或 5 份样品 含量测定的平均值作为含量结果 ） 。 8.3 含量结果表述 定量检验完成后，检验结果应表述

22、为：从样品中检出 吗啡 成分，其中 吗啡 含量为 . %。 8.4 测量不确定度的 评定与 表述 如需提供测量不确定度， 测定结果的不确定度评定与表述按 JJF 1059.1 2012的规定执行。 GA/T 8 附录 A （资料性附录 ） 内标定量法 标准溶液制备操作参数 内标 法 用 标准 工作 溶液制备操作参数 选择见表 A.1。 表 A.1 内标 定量法标准溶液制备操作参数选择表 浓度级别 1.0mg/mL 吗啡标准 物质溶 液体积 L 0.2mg/mL 的氨茶碱 溶液 体积 L 定容体积 mL 吗啡浓度 mg/mL 2 100 1 0.002 5 100 1 0.005 20 100

23、1 0.02 50 100 1 0.05 200 100 1 0.2 GA/T 9 附录 B （ 资料性附录 ） 鸦片相 关谱图 吗啡、可待因、罂粟碱、蒂巴因、那可汀 的液相色谱图和 特征离子质量色谱 图 见图 B.1图 B.6。 图 B.1 吗啡 、可待因、罂粟碱、蒂巴因、那可汀 液相色谱 图 图 B.2 吗啡 的特征离子质量色谱图 图 B.3 可待因 的特征离子质量色谱图 0 . 0 2 . 5 5 . 0 7 . 5 1 0 . 0 1 2 . 5 1 5 . 0 1 7 . 5 2 0 . 0 2 2 . 5 2 5 . 0 2 7 . 5 m i n 0 25 50 75 1 0 0 1 2 5 1 5 0 1 7 5 mV 检测器 A C h 1 : 2 2 0 n m 吗啡 可待因 蒂巴因 罂粟碱 那可汀 GA/T 10 图 B.4 蒂巴因 的特征离子质量色谱图 图 B.5 罂粟碱 的特征离子质量色谱图 图 B.6 那可汀 的特征离子质量色谱图