DB15 T 1217-2017 饲料中金刚烷胺的测定 高效液相色谱-串联质谱法.pdf

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1、ICS 65.120 B46 备案号： 54520-2017 DB15 内 蒙 古 自 治 地 方 标 准 DB15/T 1217 2017 饲料中金刚烷胺的测定 高效液相色谱 -串联质谱法 Determination of amantadine residues in feeds High performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry method 2017 - 05 - 15 发布 2017 - 08 - 15 实施 内 蒙古自治区质量技术监督局 发布 DB15/T 1217 2017 I 前 言 本标准按照 GB/T

2、 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由赤峰出入境检验检疫局提出。 本标准由内蒙古出入境检验检疫局归口。 本标准起草单位：赤峰出入境检验检疫局、赤峰市农牧科学研究院。 本标准主要起草人：赵敏、姜兆兴、李智瑾、肖雪宾、王智亮、赵瑞霞、萨其仍贵、红敏、李宝栋、 曹旭。 DB15/T 1217 2017 1 饲料中金刚烷胺的测定 高效液相色谱 -串联质谱法 1 范围 本标准规定了高效液相色谱 -串联质谱法测定饲料中金刚烷胺残留量的条件和详细分析步骤。 本标准适用于饲料中金刚烷胺残留量 的检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用

3、于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14699.1 饲料 采样 3 原理 试样经过甲醇 -三氯乙酸溶液提取，提取液经混合阳离子交换柱 MCX 进行净化，提取液浓缩后用流 动相溶解。采用高效液相色谱 -串联质谱法测定，内标法定量。 4 试剂和溶液 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 中 4.1 和 5 中 规定的一级水。 4.1 金刚烷胺标准品：纯度 99 %。 4.2 金刚烷胺 -D6标准品（内标）：纯度 98 %。 4.3 甲醇（ CH3OH）：色谱纯。 4.4

4、0.1 %三氯乙酸：取 0.100 g 三氯乙酸加入 100 mL 水中完全溶解。 4.5 甲醇 -0.1 %三氯乙酸（ 1+1）：取 50 mL 甲醇加 50 mL 0.1 %三氯乙酸。 4.6 乙腈：色谱纯。 4.7 2 %盐酸：取 2.0 mL 盐酸加入 100 mL 水中，混合均匀。 4.8 氨水 -甲醇 -异丙醇（ 5+80+15）：取 5 mL 氨水， 15 mL 异丙醇加入 80 mL 甲醇，混匀。 4.9 0.2 %甲酸：色谱纯，吸取 200 L 甲酸加入 100 mL 水中，混匀。 4.10 标准储备 液：准确称取金刚烷胺标准品 10.0 mg，用甲醇溶解并定容至 100 m

5、L，混匀，制成 100 g/mL 标准储备液。 -20 冰箱保存，存储期 6 个月。 4.11 标准工作液：准确吸取金刚烷胺标准储备液 250 L，用甲醇定容至 25 mL,制成 1.0 g/mL 标准工 作液。 4 冰箱保存，存储期 1 个月。 4.12 内标储备 液：准确称取金刚烷胺 -D6 标准品 10.0 mg，用甲醇溶解并定容至 100 mL，混匀，制成 100 g/mL 标准储备液。 -20 冰箱保存，存储期 6 个月。 4.13 内标标准工作液：准确吸取金刚烷胺 -D6标准储备液 250 L，用甲醇定容至 25 mL,制成 1.0 g/mL 标准工作液。 4 冰箱保存，存储期 1

6、 个月。 DB15/T 1217 2017 2 4.14 复溶液：乙腈 -2 %甲酸（ 80+20）：取 80 mL 乙腈加 20 mL 2 %甲酸，混匀。 5 仪器和设备 5.1 超声波清洗器。 5.2 冷冻离心机：转速 10000 r/min（ 4 ）。 5.3 涡旋混合器。 5.4 氮吹仪。 5.5 分析天平：感量 0.01 g 和感量 0.0001 g。 5.6 高效液相色谱串联质谱仪： 配有电喷雾离子源。 5.7 色谱柱： C18柱（柱长 50 mm，内径 2.1 mm，填料直径 1.8 m）。 5.8 固相萃取柱：混合阳离子交换柱 MCX（ 60 mg/3 mL）。 5.9 滤膜：

7、 0.2 m。 5.10 移液器（ 0-5 mL）。 5.11 正压固相萃取仪。 6 分析步骤 6.1 样品制备 按照 GB/T 14699.1中 8.1-8.7中规定 进行采样，将样品用四分法缩分至 300 g， 再用四分法分成两份 一份留样（ 100 g），另一份进行充分粉碎研磨， 全部通过 1 mm孔筛，混匀 备用。 6.2 样品提取 准确称取试样 2 g（精确至 0.01 g）至 50 mL 离心管中，加入 10 mL 甲醇 0.1 %三氯乙酸（ 1+1） 溶液 4.5，充分涡旋混合 1 min，超声提取 30 min， 10000 r/min 离心 10 min（ 4 ），上清液待净

8、化。 6.3 样品净化 依次用 3 mL 甲醇 4.3， 3 mL 水对 MCX 柱进行活化，用移液枪准确移取 5.0 mL 上清液过 MCX 柱， 流速不低于 1.0 mL/min。依次用 3 mL 2 %的盐酸 4.7， 3 mL 甲醇进行淋洗，加压吹干 0.5 min 1 min。 用 5 mL 氨水甲醇异丙醇（ 5+80+15） 4.8洗脱并收集洗脱液。 40 氮气吹干，用 1 mL 复溶液乙 腈 -2 %甲酸（ 80+20） 4.14溶解， 0.2 m 滤膜过滤待上机测定。 6.4 测定 6.4.1 高效液相色谱条件 流动相： 0.2 %甲酸 -乙腈（梯度洗脱）； 流速： 0.3 m

9、L/min； 柱温： 35 ； 进样体积： 5 L； 后运行： 3.00 min。 DB15/T 1217 2017 3 表 1 高效液相色谱 洗脱程序 时间 min 0.2%甲酸 % 乙腈 % 流量 L/min 1.00 95 5 0.3 2.00 85 15 0.3 2.50 85 15 0.3 4.00 70 30 0.3 6.00 2 98 0.3 7.00 2 98 0.3 8.00 95 5 0.3 6.4.2 .4.2 质谱条件 离子源： ESI； 扫描模式：正离子扫描 ； 检测方式：多反应监测（ MRM） ； 流速： 0.3 mL/min； 干燥气温度： 350 ； 干燥气流量

10、： 10 L/min； 雾化气压 力： 40 psi； 鞘气温度： 350 ； 鞘气流量： 11 L/min； 毛细管电压： 4000 v； 喷嘴电压： 500 v。 表 2 金刚烷胺及内标质谱采集参数 化合物 母离子 m/z 子离子 m/z 毛细管电压 v 碰撞电压 v 金刚烷胺 152.2 135.1* 90 15 107.1 90 30 93.2 90 25 金刚烷 -D6 159.2 142.2* 80 15 （注： *为定量离子） 6.4.3 定性 在仪器最佳工作条件下， 按照液相色谱 -串联质谱条件测定样液和 标准工作溶液，如果检测样 液色谱峰保留时间与标准品一致，定性离子对的相对

11、丰度与浓度相当的标准工作溶液的相对丰度一 致，相对丰度允许偏差不超过表 3 规定的范围，则可判断样品中存在对应的待分析物。 DB15/T 1217 2017 4 表 3 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对丰度 % 允许偏差 % 50 20 20 50 25 10 20 30 10 50 6.4.4 定量 用标准工作液（ 4.11， 4.13）配成一系列不同浓度的标准工作液，分别进样，以金刚烷胺与内 标的相对浓度作为横坐标（ X）；定量离子与内标的峰面积 之比作为纵坐标（ Y），绘制标准曲线，线 性范围 1 ng/mL 60 ng/mL。用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中金刚烷胺的

12、响应值均应 在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件和质谱条件下，金刚烷胺总离子流图及金刚烷胺和金刚 烷胺 -D6选择离子流图参见附录 A。 6.5 空白试样 除不添加标准品外，按 6.1 6.4 步骤做空白试验。 6.6 结果计算与表述 样品中金刚烷胺的残留量（ X）以 g/kg 表示，按式（ 1）计算： 1 0 0 01 0 0 0 1 20 VVmVC-CX 1 . (1) 式中： X 样品中金刚烷胺的含量，单位为微克每千克（ g/kg)； c1 样品中金刚烷胺的含量，单位为纳克每毫升（ ng/mL ）； c0 空白试验金刚烷胺的含量，单位为纳克每毫升（ ng/mL）； V 最终定容体积，

13、单位为毫升（ mL）； m 试样称取的质量的数值，单位为克（ g）； V1 加入提取液体积，单位为毫升（ mL）； V2 移取提取液体积，单位为毫升（ mL）。 7 结果表示 每个试样以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算数平均值表示，计算结 果表示到小数点后四 位。 DB15/T 1217 2017 5 8 允许误差 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的相对偏差不得超过 20 %。 9 检出限和定量限 本方法的检出限为 5.0 g/kg，定量限为 10.0 g/kg。 DB15/T 1217 2017 6 附 录 A （资料性附录） 标准 物质离子流色谱图 图 A.1 金刚烷胺总离子流色谱图 图 A.2 金刚烷胺和金刚烷胺 -D6选择离子流色谱图 DB15/T 1217 2017 7 附 录 B （资料性附录） 标准 物质 质 谱图 图 B.1 金刚烷胺和金刚烷胺 -D6质谱图 图 B.1 金刚烷胺和金刚烷胺 -D6质谱图 （续）