ISO TS 10832-2009 Soil quality - Effects of pollutants on mycorrhizal fungi - Spore germination test《土质 菌根真菌上污染物的影响 孢子发芽试验》.pdf

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1、 Numro de rfrence ISO/TS 10832:2009(F) ISO 2009SPCIFICATION TECHNIQUE ISO/TS 10832 Premire dition 2009-10-15Qualit du sol Effets des polluants vis- -vis des champignons mycorhizognes Essai de germination des spores Soil quality Effects of pollutants on mycorrhizal fungi Spore germination test ISO/TS

2、 10832:2009(F) PDF Exonration de responsabilit Le prsent fichier PDF peut contenir des polices de caractres intgres. Conformment aux conditions de licence dAdobe, ce fichier peut tre imprim ou visualis, mais ne doit pas tre modifi moins que lordinateur employ cet effet ne bnficie dune licence autori

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7、Case postale 56 CH-1211 Geneva 20 Tel. + 41 22 749 01 11 Fax + 41 22 749 09 47 E-mail copyrightiso.org Web www.iso.org Publi en Suisse ii ISO 2009 Tous droits rservsISO/TS 10832:2009(F) ISO 2009 Tous droits rservs iiiSommaire Page Avant-propos .iv Introduction.v 1 Domaine dapplication 1 2 Rfrences n

8、ormatives.1 3 Termes, dfinitions et termes abrgs2 4 Mthodes dessai.3 4.1 Principe.3 4.2 Conditions normales.3 5 Matriaux dessai.3 5.1 Eau distille3 5.2 Matriel biologique3 5.3 Substrat tmoin .4 5.4 Substance de rfrence4 5.5 Bleu trypan.4 5.6 Appareillage .5 6 Conservation et prparation des chantillo

9、ns .5 7 Mode opratoire.6 7.1 Systme biologique.6 7.2 Prparation du mlange dessai 6 7.3 Mise en place de lessai 7 7.4 Choix de la fraction massique soumettre essai.9 7.5 Conditions de culture9 7.6 Arrt de lessai .9 8 Calculs et expression des rsultats 10 8.1 Calculs10 8.2 Expression des rsultats10 9

10、Critres de validit 10 10 Rapport dessai10 Annexe A (informative) Dispositif exprimental 12 Annexe B (informative) Exemple de tableau de rsultats.13 Annexe C (informative) Exemple de rsultats14 Annexe D (informative) Donnes de fidlit.16 Bibliographie.18 ISO/TS 10832:2009(F) iv ISO 2009 Tous droits rs

11、ervsAvant-propos LISO (Organisation internationale de normalisation) est une fdration mondiale dorganismes nationaux de normalisation (comits membres de lISO). Llaboration des Normes internationales est en gnral confie aux comits techniques de lISO. Chaque comit membre intress par une tude a le droi

12、t de faire partie du comit technique cr cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec lISO participent galement aux travaux. LISO collabore troitement avec la Commission lectrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation

13、 lectrotechnique. Les Normes internationales sont rdiges conformment aux rgles donnes dans les Directives ISO/CEI, Partie 2. La tche principale des comits techniques est dlaborer les Normes internationales. Les projets de Normes internationales adopts par les comits techniques sont soumis aux comits

14、 membres pour vote. Leur publication comme Normes internationales requiert lapprobation de 75 % au moins des comits membres votants. Dans dautres circonstances, en particulier lorsquil existe une demande urgente du march, un comit technique peut dcider de publier dautres types de documents: une Spci

15、fication publiquement disponible ISO (ISO/PAS) reprsente un accord entre les experts dans un groupe de travail ISO et est accepte pour publication si elle est approuve par plus de 50 % des membres votants du comit dont relve le groupe de travail; une Spcification technique ISO (ISO/TS) reprsente un

16、accord entre les membres dun comit technique et est accepte pour publication si elle est approuve par 2/3 des membres votants du comit. Une ISO/PAS ou ISO/TS fait lobjet dun examen aprs trois ans afin de dcider si elle est confirme pour trois nouvelles annes, rvise pour devenir une Norme internation

17、ale, ou annule. Lorsquune ISO/PAS ou ISO/TS a t confirme, elle fait lobjet dun nouvel examen aprs trois ans qui dcidera soit de sa transformation en Norme internationale soit de son annulation. Lattention est appele sur le fait que certains des lments du prsent document peuvent faire lobjet de droit

18、s de proprit intellectuelle ou de droits analogues. LISO ne saurait tre tenue pour responsable de ne pas avoir identifi de tels droits de proprit et averti de leur existence. LISO/TS 10832 a t labore par le comit technique ISO/TC 190, Qualit du sol, sous-comit SC 4, Mthodes biologiques. ISO/TS 10832

19、:2009(F) ISO 2009 Tous droits rservs vIntroduction Les champignons mycorhizognes sont dimportants composants de la communaut microbienne du sol et sont des organismes cls dans les systmes sol-plante. La symbiose racinaire quils forment reprsente un lien direct entre le sol et la grande majorit des e

20、spces de plantes vasculaires (80 %) dans les environnements naturels et agricoles. La plante hte en tire plusieurs bnfices, au nombre desquels on peut citer une stimulation de la croissance, une amlioration de la nutrition minrale, une plus grande rsistance la scheresse et une protection contre les

21、agents pathognes et le stress li aux mtaux lourds. Plusieurs tudes ont montr que les champignons mycorhizognes sont sensibles aux polluants tels que les lments traces mtalliques et les hydrocarbures aromatiques polycycliques, ainsi quaux boues dpuration, et ce mme en labsence deffets phytotoxiques o

22、bservs sur la plante hte. Les champignons mycorhizognes remplissant la plupart des critres requis des organismes bio-indicateurs (ubiquit dans le sol, sensibilit aux polluants, rle cologique pertinent dans la sant des plantes et au sein des cosystmes), il est apparu important de les prendre en consi

23、dration dans lapprciation de la toxicit et des risques environnementaux lis aux polluants, aux sols contamins et lutilisation de boues dpuration en agriculture. La germination des spores chez un champignon mycorhizogne arbuscules, Glomus mosseae, forme la base de lessai propos. Cet essai concerne la

24、 premire phase de la symbiose, tandis quun autre essai, bas sur la colonisation racinaire de la plante hte, est galement en cours dtude. Cet essai peut tre ralis directement avec des boues ou des sols sans aucune tape dextraction. SPCIFICATION TECHNIQUE ISO/TS 10832:2009(F) ISO 2009 Tous droits rser

25、vs 1Qualit du sol Effets des polluants vis-vis des champignons mycorhizognes Essai de germination des spores 1 Domaine dapplication La prsente Spcification technique spcifie une mthode dvaluation des effets de polluants sur la germination des spores dun champignon mycorhizogne, Glomus mosseae. Ce bi

26、o-essai de toxicit aigu directe permet dvaluer les effets potentiels de polluants et de sols contamins sur des micro-organismes bnfiques du sol qui sont importants pour la croissance des plantes dans le concept dune agriculture durable. La prsente Spcification technique est applicable: aux substance

27、s chimiques, et aux sols contamins, aux dchets et aux mlanges sol et dchets. 2 Rfrences normatives Les documents de rfrence suivants sont indispensables pour lapplication du prsent document. Pour les rfrences dates, seule ldition cite sapplique. Pour les rfrences non dates, la dernire dition du docu

28、ment de rfrence sapplique (y compris les ventuels amendements). ISO 10381-6, Qualit du sol chantillonnage Partie 6: Lignes directrices pour la collecte, la manipulation et la conservation, dans des conditions arobies, de sols destins lvaluation en laboratoire des processus, de la biomasse et de la d

29、iversit microbiens ISO 10390, Qualit du sol Dtermination du pH ISO 11263, Qualit du sol Dosage du phosphore Dosage spectromtrique du phosphore soluble dans une solution dhydrognocarbonate de sodium ISO 11268-1, Qualit du sol Effets des polluants vis-vis des vers de terre (Eisenia fetida) Partie 1: D

30、termination de la toxicit aigu en utilisant des substrats de sol artificiel ISO 11274, Qualit du sol Dtermination de la caractristique de la rtention en eau Mthodes de laboratoire ISO 11465, Qualit du sol Dtermination de la teneur pondrale en matire sche et en eau Mthode gravimtrique ISO/TS 10832:20

31、09(F) 2 ISO 2009 Tous droits rservs3 Termes, dfinitions et termes abrgs Pour les besoins du prsent document, les termes, dfinitions et termes abrgs suivants sappliquent. 3.1 champignon mycorhizogne micro-organisme ubiquiste formant une association symbiotique avec les racines despces de plantes vasc

32、ulaires 3.2 BEG IBG Banque internationale des glomromyctes 3.3 spore unit reproductive asexue dun champignon 3.4 sporocarpe groupe de spores entour de myclium 3.5 myclium rseau ramifi form dhyphes 3.6 hyphes filaments qui composent le myclium dun champignon 3.7 substrat tmoin substrat inerte naffect

33、ant pas la germination des spores, utilis comme tmoin ou diluant 3.8 matrice sol, boues ou dchets soumis essai 3.9 sandwich dispositif form de deux membranes filtrantes en nitrocellulose contenant les spores NOTE Les deux membranes sont maintenues ensemble au moyen de deux cadres de diapositive. 3.1

34、0 coloration au bleu trypan coloration non vitale au bleu trypan utilise pour rendre visibles les structures des champignons mycorhizognes (colores en bleu) 3.11 mlange dessai mlange dune substance ou dune matrice dessai avec un substrat tmoin 3.12 fraction massique w xfraction massique de substance

35、 ou de matrice dessai induisant une inhibition de x % de la germination des spores par rapport au tmoin ISO/TS 10832:2009(F) ISO 2009 Tous droits rservs 34 Mthodes dessai 4.1 Principe Des spores de Glomus mosseae sont places entre deux membranes filtrantes en nitrocellulose, formant un sandwich (3.9

36、) que lon place dans une bote de Petri contenant le mlange dessai (3.11) qui contient la substance ou la matrice dessai (3.8) diffrentes concentrations, dilue ou non avec le substrat tmoin (3.7). Le pourcentage de spores germes est estim au bout de 14 jours. Les rsultats sont compars un substrat tmo

37、in et utiliss pour estimer la fraction massique dinhibition 50 % (w 50 ) de la germination des spores. La dtermination dune autre w xest galement possible, mais pas ncessaire. NOTE La prsente mthode peut tre utilise pour dterminer leffet dune fraction massique unique. 4.2 Conditions normales Utilise

38、r une chambre de culture ou une pice climatise (24 2)C. Lincubation est effectue lobscurit (chambre obscure ou botes de Petri entoures de papier daluminium). 5 Matriaux dessai 5.1 Eau distille Il convient que le pH de leau distille soit neutre et jamais infrieur 5,5. 5.2 Matriel biologique 5.2.1 Cha

39、mpignon Groupe taxonomique: Eumycota, ordre des Glomromyctes (Glomeromycota). Espce: Glomus mosseae (Nicolson YO7656 (squence partielle de la sous-unit 25S de lADNr) (25, 26). 5.2.4 Matriel Utiliser des sporocarpes (3.4) contenant des spores (3.3) (voir Figure 1) achets dans le commerce 1) . Utilise

40、r des cultures en pot de moins de cinq mois pour extraire les sporocarpes. 1) Les sporocarpes du champignon Glomus mosseae, produits et distribus par BioRize, sont un exemple de produit appropri disponible sur le march. Cette information est donne lintention des utilisateurs du prsent document et ne

41、 signifie nullement que lISO approuve ou recommande lemploi exclusif du produit ainsi dsign. ISO/TS 10832:2009(F) 4 ISO 2009 Tous droits rservsLe pourcentage de germination des spores doit tre suprieur 75 %. Conserver les spores et les sporocarpes dans de leau distille (5.1) 4 C. Utiliser dans un dl

42、ai dune semaine pour les sporocarpes et de deux jours pour les spores. 5.3 Substrat tmoin Utiliser du sable ou un sol artificiel conformment lISO 11268-1 comme substrat tmoin (3.7). Utiliser un sable dune teneur en silice suprieure 99 %, un pH compris entre 6,6 7,5, une granulomtrie de 0,8 mm 1,6 mm

43、, lav trois fois leau distille (pH 6) (5.1) puis sch. Le pH final doit tre suprieur 6 (voir lISO 10390). Vrifier que la germination des spores dans le substrat tmoin avant la mise en place du bio-essai est suprieure 75 %. 5.4 Substance de rfrence Utiliser le nitrate de cadmium (CdNO 3 , 4H 2 O). 5.5

44、 Bleu trypan Utiliser le bleu trypan 2) , 0,5 g dans 50 ml de HCl 1 %, 450 ml deau et 500 ml de glycrol. a) Sporocarpes b) Sporocarpe ouvert c) Spore intacte d) Spore abme Figure 1 Sporocarpes et spores de Glomus mosseae 2) Le bleu trypan rfrenc 93595, distribu par Sigma Aldrich, est un exemple de p

45、roduit appropri disponible sur le march. Cette information est donne lintention des utilisateurs du prsent document et ne signifie nullement que lISO approuve ou recommande lemploi exclusif du produit ainsi dsign. ISO/TS 10832:2009(F) ISO 2009 Tous droits rservs 55.6 Appareillage 5.6.1 Microscope bi

46、noculaire, grandissement 32. 5.6.2 Botes de Petri striles en plastique, diamtre 9 cm. 5.6.3 Cadres de diapositive, 24 mm 36 mm. 5.6.4 Membranes filtrantes en nitrocellulose, diamtre 47 mm, porosit 0,45 m, blanches, quadrillage 3 mm. 5.6.5 Pinces ultra-fines 3) . 5.6.6 Papier filtre. 5.6.7 Microtube

47、en plastique, de contenance 1,5 ml. 5.6.8 Film plastique. 5.6.9 Micropipette et pointes coupes lextrmit. 5.6.10 Balance, capable de peser de 0 g 200 g avec une prcision de 0,001 g. 5.6.11 Entonnoir. 6 Conservation et prparation des chantillons Les chantillons de sol doivent tre conservs comme spcifi dans lISO 10381-6. Les chantillons de dchets et de boues sont conservs (4 2) C dans des rcipients hermtiques. Il convient de ne pas remplir compltement les rcipients utiliss pour