ISO 29841-2009 Vegetable fats and oils - Determination of the degradation products of chlorophylls a and a- (pheophytins a a- and pyropheophytins)《植物的脂肪和油 叶绿素a和.pdf

《ISO 29841-2009 Vegetable fats and oils - Determination of the degradation products of chlorophylls a and a- (pheophytins a a- and pyropheophytins)《植物的脂肪和油 叶绿素a和.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《ISO 29841-2009 Vegetable fats and oils - Determination of the degradation products of chlorophylls a and a- (pheophytins a a- and pyropheophytins)《植物的脂肪和油 叶绿素a和.pdf（16页珍藏版）》请在麦多课文档分享上搜索。

1、 Numro de rfrence ISO 29841:2009(F) ISO 2009NORME INTERNATIONALE ISO 29841 Premire dition 2009-03-15Corps gras dorigine vgtale Dtermination des produits de dcomposition des chlorophylles a et a (phophytines a, a et pyrophophytines) Vegetable fats and oils Determination of the degradation products of

2、 chlorophylls a and a (pheophytins a, a and pyropheophytins) ISO 29841:2009(F) PDF Exonration de responsabilit Le prsent fichier PDF peut contenir des polices de caractres intgres. Conformment aux conditions de licence dAdobe, ce fichier peut tre imprim ou visualis, mais ne doit pas tre modifi moins

3、 que lordinateur employ cet effet ne bnficie dune licence autorisant lutilisation de ces polices et que celles-ci y soient installes. Lors du tlchargement de ce fichier, les parties concernes acceptent de fait la responsabilit de ne pas enfreindre les conditions de licence dAdobe. Le Secrtariat cent

4、ral de lISO dcline toute responsabilit en la matire. Adobe est une marque dpose dAdobe Systems Incorporated. Les dtails relatifs aux produits logiciels utiliss pour la cration du prsent fichier PDF sont disponibles dans la rubrique General Info du fichier; les paramtres de cration PDF ont t optimiss

5、 pour limpression. Toutes les mesures ont t prises pour garantir lexploitation de ce fichier par les comits membres de lISO. Dans le cas peu probable o surviendrait un problme dutilisation, veuillez en informer le Secrtariat central ladresse donne ci-dessous. DOCUMENT PROTG PAR COPYRIGHT ISO 2009 Dr

6、oits de reproduction rservs. Sauf prescription diffrente, aucune partie de cette publication ne peut tre reproduite ni utilise sous quelque forme que ce soit et par aucun procd, lectronique ou mcanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans laccord crit de lISO ladresse ci-aprs ou du comit

7、 membre de lISO dans le pays du demandeur. ISO copyright office Case postale 56 CH-1211 Geneva 20 Tel. + 41 22 749 01 11 Fax + 41 22 749 09 47 E-mail copyrightiso.org Web www.iso.org Publi en Suisse ii ISO 2009 Tous droits rservsISO 29841:2009(F) ISO 2009 Tous droits rservs iii Avant-propos LISO (Or

8、ganisation internationale de normalisation) est une fdration mondiale dorganismes nationaux de normalisation (comits membres de lISO). Llaboration des Normes internationales est en gnral confie aux comits techniques de lISO. Chaque comit membre intress par une tude a le droit de faire partie du comi

9、t technique cr cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec lISO participent galement aux travaux. LISO collabore troitement avec la Commission lectrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation lectrotechnique. Les Nor

10、mes internationales sont rdiges conformment aux rgles donnes dans les Directives ISO/CEI, Partie 2. La tche principale des comits techniques est dlaborer les Normes internationales. Les projets de Normes internationales adopts par les comits techniques sont soumis aux comits membres pour vote. Leur

11、publication comme Normes internationales requiert lapprobation de 75 % au moins des comits membres votants. Lattention est appele sur le fait que certains des lments du prsent document peuvent faire lobjet de droits de proprit intellectuelle ou de droits analogues. LISO ne saurait tre tenue pour res

12、ponsable de ne pas avoir identifi de tels droits de proprit et averti de leur existence. LISO 29841 a t labore par le comit technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comit SC 11, Corps gras dorigines animale et vgtale. NORME INTERNATIONALE ISO 29841:2009(F) ISO 2009 Tous droits rservs 1 Corps

13、 gras dorigine vgtale Dtermination des produits de dcomposition des chlorophylles a et a (phophytines a, a et pyrophophytines) 1 Domaine dapplication La prsente Norme internationale spcifie un mode opratoire permettant la dtermination des produits de dcomposition des chlorophylles, savoir les phophy

14、tines a et a et la pyrophophytine a. La mthode sapplique uniquement aux corps gras dorigine vgtale. 2 Rfrences normatives Les documents de rfrence suivants sont indispensables pour lapplication du prsent document. Pour les rfrences dates, seule ldition cite sapplique. Pour les rfrences non dates, la

15、 dernire dition du document de rfrence (y compris les ventuels amendements) sapplique. ISO 661, Corps gras dorigines animale et vgtale Prparation de lchantillon pour essai 3 Termes et dfinitions Pour les besoins du prsent document, les termes et dfinitions suivants sappliquent. 3.1 pyrophophytine a

16、(teneur dans les produits de dgradation de la chlorophylle) masse de pyrophophytine a divise par la somme des masses de phophytines a et a et de pyrophophytine a 4 Principe Sparation des pigments (chlorophylles, phophytines a et a , pyrophophytine a), par chromatographie miniaturise sur colonne de g

17、el de silice, des constituants majoritaires des lipides (triglycrides). Lluat est analys par CLHP sur colonne RP 18 et les composants spars sont dtects 410 nm laide dun dtecteur photomtrique. Lanalyse de certaines huiles issues de graines olagineuses (par exemple lhuile de colza) ncessite une sensib

18、ilit plus leve qui peut tre obtenue par dtection par fluorescence avec une longueur donde dexcitation de 430 nm et une longueur donde dmission de 670 nm. Une dtermination directe par CLHP avec dtection par fluorescence est galement possible et dcrite lAnnexe C. ISO 29841:2009(F) 2 ISO 2009 Tous droi

19、ts rservs5 Ractifs AVERTISSEMENT Lattention est attire sur les rglementations spcifiant la manipulation des substances dangereuses. Les mesures de scurit sur les plans technique, organisationnel et de la scurit personnelle doivent tre suivies. Au cours de lanalyse, sauf indication contraire, utilise

20、r uniquement des ractifs de qualit analytique reconnue. 5.1 Chlorophylle a. NOTE Du fait de labsence dtalons de phophytine et de pyrophophytine, de la chlorophylle a est utilise pour obtenir ces produits de dcomposition. Les phophytines sont obtenues partir dune solution de chlorophylle a par acidif

21、ication, les pyrophophytines en procdant un chauffage supplmentaire ( 100 C) (Rfrence 4). 5.2 Actone. 5.3 Mthanol. 5.4 ther dithylique. 5.5 ther de ptrole, domaine dbullition compris entre 40 C et 60 C. 5.6 n-heptane ou en cas dindisponibilit n-hexane. ATTENTION Du fait de sa toxicit, viter lutilisa

22、tion du n-hexane si le n-heptane est disponible. 5.7 Mlange dther de ptrole et dther dithylique, de fractions volumiques PetE= 90 ml/100 ml et Et 2 O= 10 ml/100 ml. 6 Appareillage Matriel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui suit. 6.1 Installation de CLHP. 6.1.1 Systme de CLHP, constitu

23、 dune pompe, dun dispositif dinjection dchantillon (boucle de 20 l) ou dun auto-chantillonneur, dun dtecteur photomtrique pour les mesurages 410 nm ou dun dtecteur de fluorescence (longueur donde dexcitation ex= 430 nm et longueur donde dmission em= 670 nm) et dun systme dintgration. 6.1.2 Colonne d

24、e CLHP, de 250 mm de longueur, 4,0 mm ou 4,6 mm de diamtre intrieur, remplie de particules RP 18 en phase inverse, dune taille de 5 m. Les conditions suivantes ont t juges appropries: Phase stationnaire: Partisil ODS 3, 5 m, 250 mm 4,6 mm 1) ; Phase mobile: Eau, mthanol et actone (6.1.3); Dbit: 1,0

25、ml/min. 1) Exemple, disponible dans le commerce, de phase inverse C 18 avec une charge de carbone de 10,5 % en fraction massique, avec masquage des hydroxydes rsiduels pour dsactivation des silanols afin de limiter le plus possible la ncessit dagents de suppression ou dappariement dions. Cette infor

26、mation est donne lintention des utilisateurs de la prsente Norme internationale et ne signifie nullement que lISO approuve ou recommande lemploi exclusif du produit ainsi dsign. ISO 29841:2009(F) ISO 2009 Tous droits rservs 3 6.1.3 Phase mobile, mlange eau, mthanol et actone: fractions volumiques H

27、2 O= 4 ml/100 ml; MeOH= 36 ml/100 ml; Me 2 C=O= 60 ml/100 ml. Tous les solvants doivent tre de qualit CLHP. 6.2 Fiole conique, dune capacit de 10 ml ou 25 ml. 6.3 Bchers, de diffrentes capacits. 6.4 vaporateur rotatif, comportant un bain-marie. 6.5 Flacons pour auto-chantillonneur, dune capacit appr

28、oprie. 6.6 Cartouche de silice, 1 000 mg/6 ml, 55 m, 700 nm ou cartouche de diol, 3 ml 2) . NOTE Des mini-colonnes de silice prpares au laboratoire peuvent galement tre utilises pour la sparation. 7 chantillon 7.1 chantillonnage Lchantillonnage ne fait pas partie de la mthode spcifie dans la prsente

29、 Norme internationale. Une mthode dchantillonnage recommande est donne dans lISO 5555 1 . Il est important que le laboratoire reoive un chantillon rellement reprsentatif et non endommag ni modifi lors du transport ou du stockage. 7.2 Prparation de lchantillon pour essai Prparer lchantillon pour essa

30、i conformment lISO 661. IMPORTANT Les chantillons pour essai doivent tre conservs froids et labri de la lumire dans des rcipients en verre. Aprs purification, les solutions dessai doivent tre immdiatement analyses afin dviter toute dgradation et oxydation. viter le contact des chantillons pour essai

31、 avec le plastique. 8 Mode opratoire 8.1 Peser environ 300 mg de lchantillon pour essai (7.2) dans un petit bcher (6.3), dissoudre dans 1 ml de n-heptane ou de n-hexane (5.6) et verser la solution sur la cartouche de silice (colonne de gel de silice) (6.6). Rincer le bcher deux fois avec des fractio

32、ns de 1 ml dther de ptrole (5.5), verser galement ces solutions de lavage sur la cartouche (colonne). 8.2 Ds que le solvant sest coul la partie suprieure de la cartouche (colonne), luer les substances apolaires avec deux fois 5 ml de mlange dther de ptrole et dther dithylique (5.7). 8.3 luer la frac

33、tion de la phophytine avec deux fois 5 ml dactone (5.2) et recueillir cette fraction dans une fiole conique (6.2), labri de la lumire. 2) Strata Si-1 (cartouche de silice) et Supelclean LC-Diol SPE Tubes - Supelco 57016 (cartouche de type diol) sont des exemples de produits disponibles dans le comme

34、rce. Cette information est donne lintention des utilisateurs de la prsente Norme internationale et ne signifie nullement que lISO approuve ou recommande lemploi exclusif des produits ainsi dsigns. ISO 29841:2009(F) 4 ISO 2009 Tous droits rservs8.4 vaporer le solvant sec laide dun vaporateur rotatif

35、(6.4) 20 C maximum. Dissoudre le rsidu dans 200 l dactone. Introduire immdiatement cette solution dans le systme CLHP (6.1). IMPORTANT Les phophytines sont trs instables la lumire et soxydent facilement. 8.5 Des chromatogrammes types obtenus dans les conditions de colonne numres en 6.1.2 sont prsent

36、s aux Figures A.1 et A.2. 9 Rsultats de la dtermination 9.1 Identification des pics Le trac chromatographique obtenu lors de lanalyse peut comporter les pics des pigments suivants: chlorophylle a, chlorophylle b ainsi que les phophytines et pyrophophytines correspondantes. Il convient de faire rfren

37、ce aux chromatogrammes types prsents aux Figures A.1 et A.2 car les autres pigments ne sont pas disponibles comme talons du fait de leur instabilit. Pour lidentification de la phophytine a, de la phophytine a et de la pyrophophytine a, voir les Figures A.1 et A.2. 9.2 Calcul de la teneur en pyrophop

38、hytine a Utiliser les aires des pics pour calculer les proportions relatives des analytes dans la solution chantillon. Pour les besoins de la prsente mthode, on suppose que les facteurs de rponse de tous les pigments sont identiques. La teneur en pyrophophytine a, exprime sous forme de fraction mass

39、ique en pourcentage, w PPPa , est calcule sur la base dun rapport daires de pics comme suit: PPP PPP PPP PP 100 () A w AA = + a a ao A PPPaest laire du pic de pyrophophytine a; A PPest la somme des aires des pics de phophytine a et a . Noter le rsultat une dcimale prs. 10 Fidlit de la mthode 10.1 Es

40、sai interlaboratoires Les dtails de lessai interlaboratoires relatifs la fidlit de la mthode sont rcapituls lAnnexe B. Les valeurs obtenues partir de cet essai interlaboratoires peuvent ne pas tre applicables des plages de concentration et des matrices autres que celles indiques. 10.2 Rptabilit La d

41、iffrence absolue entre deux rsultats dessai individuels indpendants obtenus avec la mme mthode, sur le mme matriau dessai, dans un mme laboratoire et par un mme oprateur utilisant le mme appareillage dans un court intervalle de temps, ne dpasse les valeurs de r indiques dans le Tableau B.1 que dans

42、5 % des cas, au plus. ISO 29841:2009(F) ISO 2009 Tous droits rservs 5 10.3 Reproductibilit La diffrence absolue entre deux rsultats dessai individuels, obtenus avec de la mme mthode, sur un matriau identique soumis essai dans diffrents laboratoires, avec diffrents oprateurs utilisant un appareillage

43、 diffrent, ne dpasse les valeurs de R indiques dans le Tableau B.1 que dans 5 % des cas, au plus. 11 Rapport dessai Le rapport dessai doit contenir au moins les informations suivantes: a) toutes les informations ncessaires lidentification complte de lchantillon; b) la mthode dchantillonnage utilise,

44、 si elle est connue; c) la mthode dessai utilise et la rfrence la prsente Norme internationale; d) tous les dtails opratoires non spcifis dans la prsente Norme internationale, ou considrs comme facultatifs, ainsi que les dtails des incidents ventuels survenus lors de lapplication de la mthode et sus

45、ceptibles davoir influ sur le ou les rsultats dessai; e) les rsultats dessai obtenus; f) si la rptabilit a t vrifie, le rsultat final obtenu. ISO 29841:2009(F) 6 ISO 2009 Tous droits rservsAnnexe A (informative) Exemple de chromatogramme type Lgende 1 phophytine a 2 phophytine a 3 pyrophophytine t t

46、emps dlution, min V diffrence de potentiel, volts Figure A.1 Chromatogramme de CLHP dune huile dolive vierge extra avec une teneur de 5 % en fraction massique de pyrophophytine dans les produits de dgradation de la chlorophylle ISO 29841:2009(F) ISO 2009 Tous droits rservs 7Lgende 1 phophytine a 2 p

47、hophytine a 3 pyrophophytine t temps dlution, min V diffrence de potentiel, volts Figure A.2 Chromatogramme de CLHP dune huile dolive vierge extra avec une teneur de 30 % en fraction massique de pyrophophytine dans les produits de dgradation de la chlorophylle ISO 29841:2009(F) 8 ISO 2009 Tous droits rservsAnnexe B (informative) Rsultat dun essai interlaboratoires La fidlit de la mthode est le r