DB36 T 412-2003 《动物可食性组织中庆大霉素残留的检测方法.微生物学测定法》.pdf
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1、 DB36备案号: 13618-2003 江西省地方标准DB36/T 4122003动物可食性组织中庆大霉素残留的 检测方法-微生物学测定法 2003-05-19 发布 2003-05-19 实施江西省质量技术监督局发布DB36/T 4122003 I 目 次 前言 . II 1 范围 1 2 规范性引用文件 1 3 样品的保存 1 4 测定方法 1 5 检测方法灵敏度、准确度、精密度 3 DB36/T 4122003 II 前 言 庆大霉素又名正泰霉素(Gentamycin),是目前临床最为常用的广谱氨基糖甙类抗生素,对多种革兰氏阴性菌及阳性菌都有抑制或杀灭作用,特别对绿脓杆菌、耐药金葡菌的
2、感染有显著疗效。但庆大霉素同时也存在较大的毒性,它对第八对脑神经、对前庭神经损害较明显,用量过大可致听力减退甚至耳聋,既使是常用量对肾脏也有轻度损害,并可发生肝功能异常。 庆大霉素在兽医临床上也有较大的应用,常和甲氧苄啶等药物协同作用用于抗菌消炎,尤其目前在应用剂量上普遍存在大剂量的误区,所以极可能在动物可食性组织中形成残留。低剂量的残留对人体的危害除可能的药物损害外,耐药性是一个重要的方面。研究表明,长期使用庆大霉素,尤其是长期低于治疗剂量的药物使用时,肠道微生物就可能产生庆大霉素灭活酶,庆大霉素的耐药因子甚至会与新霉素、卡那霉素、妥布霉素等药物产生交叉耐药性,从而给人类和动物疾病的防治造成
3、困难,因此,制订动物组织中庆大霉素残留的检测标准显得尤为重要。 本方法参照美国、欧盟等国的检测标准及相关资料,根据本省的实际检测条件,采取动物可食性组织匀浆物,经磷酸盐缓冲液提取,提取液离心后,取上清液,利用庆大霉素对短小芽孢杆菌的抑菌作用,用管碟法进行测定,根据抑菌圈的大小用标准曲线法定量检测。 本标准由江西省农业厅提出。 本标准由江西省兽药饲料监察所负责起草。 本标准起草人:傅师一、姜文娟、徐国茂。 DB36/T 4122003 1 动物可食性组织中庆大霉素残留的检测方法-微生物学测定法 1 范围 本标准规定了动物可食性组织中庆大霉素残留量检测的制样和微生物学测定方法。 本标准适用于动物肝
4、脏中庆大霉素残留量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。 GB/T 6682-1992 分析实验室用水规则和试验方法 3 样品的保存 20以下冰箱中贮存备用。 4 测定方法 4.1 方法提要或原理 样品组织经磷酸盐缓冲液提取,提取液经离心后,取上清液与短小芽孢杆菌作用,用管碟法进行测定,根据抑菌圈的大小用二剂量法定量。 4.2 试剂和材料 以下所用试剂
5、,除特别注明者外,均为分析纯试剂,水为符合GB/T 6682规定的二级水。 4.2.1 硫酸庆大霉素标准品 由中国药品检定所或中国兽医药品监察所标定,具有准确效价单位。 4.2.2 短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus),菌株号 CMCC63202 由中国药品检定所或中国兽医药品监察所提供,供微生物学测定用。 4.2.3 磷酸二氢钾(KH 2PO4) 4.2.4 磷酸氢二钾(K 2HPO4) 4.2.5 盐酸 4.2.6 氢氧化钠 4.2.7 蛋白胨 生化试剂 4.2.8 牛肉浸膏(或牛肉浸出粉)生化试剂 4.2.9 琼脂 生化试剂 4.2.10 磷酸盐灭菌缓冲液(pH7.8) 取磷
6、酸氢二钾 5.59g 与磷酸二氢钾 0.41g,加水使成 1000ml,滤过,分装,灭菌,即得。 4.2.11 盐酸溶液(1mol/L) 取盐酸 9ml,加水至 100ml,摇匀,即得。 4.2.12 氢氧化钠溶液(1mol/L) 取氢氧化钠适量,加水振摇使溶解成饱和溶液,冷却后,置聚乙烯塑料瓶中静置数日,澄清后备用。取澄清的氢氧化钠饱和液 5.6ml,加新沸过的冷水使成 100ml,摇匀,即得。 4.2.13 庆大霉素标准储备液 精密称取庆大霉素标准品约 50.00mg(精确至 0.01mg),用灭菌水制成1000 单位/ml 的标准贮备液,置 5以下保存,使用期限为七天。 DB36/T 4
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