1、ICS 65.020.01 CCS B 05 DB21 辽宁省 地 方 标 准 DB21/T 3610 2022 紫叶稠李 组培技术 规程 Technical regulation on tissue culture of Padus virginiana 2022-07-30 发布 2022-08-30 实施 辽 宁 省 市 场 监 督 管 理 局 发布 DB21/T 3610 2022 I 目 次 前言.II 1 范围.1 2 规范 性引 用文 件.1 3 术语 和定 义.1 4 外植 体采 集与 处理.2 5 培养 基配 制.2 6 外植 体消 毒.3 7 培养 条件.3 8 组织 培养
2、.3 9 温室 炼苗 与驯 化.3 10 定植.4 11 档 案管 理.4 附 录 A（资 料性）紫 叶稠李 生物 学特 性.5 附 录 B（资 料性）常 用植物 生长 调节 物质 配制 方法.6 DB21/T 3610 2022 前 言 本文件 依据GB/T 1.1 2020 标 准化 工作 导则 第1 部 分：标准 化文件 得结 构和 起草规 则 给出 的规则编写。本文件 由辽 宁省 林业 和草 原局提 出并 归口 管理。本文件 起草 单位：辽 宁省 沙地治 理与 利用 研究 所。本文件 主要 起草 人：王斯 彤、曹 宇、王曼、成 文博、金星、迟 琳琳、王 帝沣、张柏 习、王浩、刘 淑玲、
3、李 红、艾婷 婷、陈江 燕、白 雪峰、刘 建华、安 宇宁、石亮、张 日升、韩 辉、王 贺秋、尚 健。本文件 发布 实施 后，任何 单 位和个 人如 有问 题和 意见 建议，均可 以通 过来 电和 来 函等方 式进 行反 馈，我们将 及时 答复 并认 真处 理，根 据实 际情 况依 法进 行评估 及复 审。归 口 管 理 部 门 通 讯 地 址：辽 宁 省 林 业 和 草 原 局（沈 阳 市 和 平 区 太 原 北 街2 号），联 系 电 话：024-23448927。文件起 草单 位通 讯地 址：辽宁省 沙地 治理 与利 用研 究所（阜新 市细 河区 中华 路东段55 号），联 系 电话：04
4、18-3996169。DB21/T 3610 2022 1 紫 叶稠李 组培快繁 技术规 程 1 范围 本文件 规定 了 紫 叶稠 李（Padus virginiana）组 织培 养 快速繁 殖技 术方 法，具体 包括外 植体 的采 集与处理、培养 基的 配制、组 织培养 程序 等技 术和 要求。本文件 适用 于辽 宁省 范围 内紫叶 稠李 的组 培快 繁育 苗。2 规范性 引用 文件 下列文 件中 的内 容通 过文 中的规 范性 引用 而构 成本 文件必 不可 少的 条款。其 中，注日 期的 引用 文件，仅该日 期对 应的 版本 适用 于 本文 件，不注 日期 的引 用文件，其 最新 版本（
5、包 括所有 的修 改单）适 用 于 本文件。GB/T 6001-1985 育 苗技 术规程 LY/T 1000-2013 容 器育 苗技术 LY/T 1882-2010 林 木组 织培养 育苗 技术 规程 NY/T 2306-2013 花 卉种 苗组培 快繁 技术 规程 3 术语和 定义 下列术 语和 定义 适用 于本 文件。3.1 紫叶稠 李 Padus virginiana 为 蔷薇 科（Rosaceae）稠 李属（Padus）落叶 乔木。生物学 特性 参见 附 录 A。3.2 外植体 explant 用于植 物组 织培 养的 离体 植物器 官、组 织、细 胞以 及原生 质体。3.3 母液
6、 stock solution 按照培 养基 配方 将培 养基 的成分 配制 成一 定浓 度和 比例的 溶液 或混 合溶 液。3.4 初代培 养 primary culture 将经灭 菌处 理的 外植 体接 种于琼 脂培 养基 上，诱导 出愈伤 组织 或芽 的培 养过 程。DB21/T 3610 2022 3.5 继代培 养 subculture 外植体 经初 代培 养后，再 次以及 以后 各次 接种 于新 培养基 继续 培养 的过 程。3.6 生根培 养 rooting culture 诱导无 根试 管苗 产生 根的 过程。4 外植体 采集 与处 理 4.1 外植体 采集 外植体 的采 集
7、一 般 在6 月 中旬，选 择优 良母 树当 年 生 茎段 作 为 外植 体，采 集 宜在晴 天进 行，宜 随采随用，若需 长途 运输，需 将外植 体保 存在 装有 冰块 放入保 鲜盒 中。4.2 外植体 处理 将采集 的外 植体 枝条 进行 如下处 理：剪除 枝条 上的 叶片，并将 其剪 成长 约2 cm 3 cm 的 带腋 芽（顶芽）茎 段，放入 烧杯 中用 洗衣粉 或洗 洁精 浸泡5 min，流水 冲洗2 h3 h，再 用 蒸馏水 冲洗2次，转 至超净工作 台 上 备用。5 培养基 配制 5.1 MS 培 养基 母液 配制 MS 培 养基 母液 配制 注意 如 下事项。a)母液配 制使
8、用蒸 馏水。b)配制大 量元 素母 液时，每 个组分 单独 溶解，避 免沉 淀发生。c)配制后 的母 液应 置 于4 冰箱中 冷藏 保存，微量元 素母液 用棕 色瓶 盛装 保存，母 液配 制后 应贴 好 标签，注 明名 称、配制 日期 并及 时 使用，贮 存时 间不 宜超 过 3 个 月，发现 有沉 淀或絮 状物 出现 应 停 止使用。5.2 植物生 长调 节物 剂母 液配 制 植物生 长调 节物 质母 液的 配制浓 度 为0.1 mg/mL 1.0 mg/mL，其配 制方 法参 见 附录 B。母 液配 制好后贴好 标签 并置 于4 冰 箱中冷 藏，保存 期不 超 过3 个月。5.3 培养 基
9、 制作 培养基 的制 作按LY/T 1882 中4.2 中执 行。培养 基配 制 参考用 量见 附录B。5.4 培养基 灭菌 培养基 灭菌 按LY/T 1882 中4.2 执行 5.5 培养基 保存 DB21/T 3610 2022 3 灭菌后 的培 养基 应注 明编 号及配 制日 期，同时 按培 养基 种 类、配制 先后 顺序 分别储 存于 接种 室 或 培养室。存储 时间 不宜 超过2 周。5.6 培养基 配方 初代培 养：MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.05 mg/L 或MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA0.1 mg/L；继代培 养：MS+6-BA 0.8 mg/L+
10、NAA0.08 mg/L；生根培 养：MS+NAA0.5 mg/L。6 外植体 消毒 在超净 工作 台上，用 0.1%的 Hgcl2 消 毒液浸 泡顶 芽 部分 1 min 3 min，腋 芽 部分 2 min 5 min，用无菌 水冲 洗5 次7 次，再用无 菌滤 纸吸 干水 分后，最后 剪 成 1.5 cm2.5 cm 的单 芽茎 段备 用。7 培养条 件 培养室 内温 度为 25 2，光照强 度为2000 Lx，光 照 时间为 每天12 h 16 h。8 组织培 养 8.1 初代培 养 将已消 毒的 外 植体 接种在 初代 培 养基上，接 种操作 参照NY/T 2306 中10.5执行。
11、用记 号笔在 培养 瓶上注明 接种 日期、编 号或 名称，放至 培养 室进 行培 养。10 d 15 d 后芽 开始 萌 发，20 d 左右 茎尖 变绿 并伸长生 长，茎段 腋芽 萌发 新芽，诱导30 d 左右 可获 得1cm 2 cm 的 新芽。8.2 继代培 养 将初代 培养 诱导 形成 的幼 芽或丛 生芽，接 种到 增殖 培养基 上进 行培 养。增殖 培养周 期 为30 d 40 d。8.3 生根培 养 选取壮 苗高2 cm 3 cm的 幼苗，接种 于生 根培 养基 中进行 生根 培养。9 温室炼 苗与 驯化 9.1 炼苗 生根培 养23 周后，选取 叶片绿 色、株 高大 于3 cm，根
12、长1.5 cm 2.5 cm，须根柔 软且不 少于3 条的无菌 苗，将组 培苗 置于 温室自 然散 射光 下，封口 炼苗2 d3 d，温度 范围 在 18 28。9.2 驯化 驯化基 质为 细河 沙、珍珠 岩与草 炭土 比例 为1:1:1，并加入0.5 g/L 的多 菌灵 搅 拌均匀，然后装 入穴盘中压 紧待用。将 无菌苗 从培养 容器中 取出，将根 部粘附 的琼脂 用清 水（或 用0.01%高锰 酸 钾）清 洗 干净，移 到营 养钵 中，用 基 质将根 埋好，浇 水，覆 膜，在膜 上扎 几个 透气 小孔。每天 用细 雾喷 壶喷 水，使环境湿 度保持 在90%左右。外面用 遮阳网 罩着，避免
13、阳光直 射。当 发现 小苗基 部或基 质上出 现白 色絮 状菌丝时，用 多菌 灵液 喷洒 基质。驯化 时间 为2 周3 周。DB21/T 3610 2022 9.3 移栽 经过驯 化后，当 苗木 表现 为叶色 深绿、叶 片增 大、有新叶 长出 时，将苗 木移 栽至12 cm 12 cm 相同基质的 营养 钵中 培养。9.4 苗期管 理 a)水肥管 理 移栽后，每 天向 叶面 喷水1 次，在 遮阴 且通 风条 件下 培养。1 周后，撤 掉遮 荫，注意通 风。施肥 管理参照GB/T 6001 执行。b)病虫害 防治 当 发生 红蜘 蛛 危 害时，可 喷施500倍1000 倍 的乐 果 稀释液 防治
14、。10 定植 翌年春 季移 栽至 圃地。容 器苗的 定植 参考LY/T 1000 执行。11 档案管 理 每批移 栽驯 化的 苗木 都要 配有标 签，并建 立管 理档 案，按LY/T 1000 执 行。DB21/T 3610 2022 5 A A 附 录 A（资料 性）紫叶稠 李生 物学 特性 紫叶稠 李（Padus virginiana）为蔷 薇科 落叶 乔木，树 高可 达 7 m。树皮 灰褐 色，小枝 紫红 色，有 光泽。单叶互 生，叶缘 有锯 齿，近叶片 基部 有 2 腺 体。叶 质地较 厚，叶片 长椭 圆形至 倒卵 形，先端 渐尖，锯齿较 稠李 尖锐，初 生叶 为绿色，进 入 5 月后
15、 随着 温度升 高，逐渐 由绿 色转 至紫红 色，叶背 脉 腋 白 色 簇毛变淡 褐色，整 个叶 背有 白粉，秋后 变成 红色。紫 叶稠李 为总 状花 序，花白 色，花 期 4 5 月。核 果，果实为 球形，较 大，径 约 111.2 cm，果皮 光亮，果熟 期 78 月。随 着果 实 逐渐成 熟，果色 由浅 绿到淡黄再 到橘 红，秋 季呈 紫 红色或 紫黑 色，不 断换 颜 色的核 果具 有较 高的 观赏 价值。紫 叶稠 李原 产于 北 美洲。在 我国 三北 地区 以及 青海西 藏等 地区 均有 栽植。紫叶 稠李 对土 壤要 求不 高，耐 寒、耐旱、耐 瘠 薄。日常养 护和 管理 成本 低，是我国 北方 地区 园林 绿化 的优良 树种。DB21/T 3610 2022 B B 附 录 B（资料 性）常用植 物生 长调 节物 质配 制方法 植物生 长调 节物 质母 液 配 制方法 参见 表B.1。表B.1 母液 配制 方法 类别 种类 配制方法 配制浓度（mg/mL）细胞分裂素 6-BA 先用少量的 95%的乙醇溶解，然后加蒸馏水定容。1 mg/mL 生长素 NAA 先用少量 0.1 mol/L 的 NaOH溶解，然后加蒸馏水定容。1 mg/mL _
