1、ICS 65.020 B 61 DB1301 石 家 庄 市 农 业 地 方 标 准 DB 1301/T 3292020 照山白杜鹃组培快繁育苗技术规程 2020 - 04 - 14 发布 2020 - 06 - 14 实施 石家庄市市场监督管理局 发 布 DB1301/T 3292020 I 目 次 前言 . II 1 范围 . 1 2 规范性引用文件 . 1 3 术语和定义 . 1 4 组培实验室所需的设备、器材和试剂 . 1 5 母本材料 . 2 6 培养基选择与母液配制 . 2 7 培养基制备 . 2 8 外植体预处理与消毒 . 2 9 接种准备与外植体接种操作 . 3 10 组织培养
2、过程 . 3 11 移栽后管理 . 4 12 苗木出圃质量标准 . 4 附录 A（规范性附录） WPM 培养基母液配制 . 5 附录 B（资料性附录） WPM 等缩略语名称对照表 . 6 附录 C（资料性附录） 照山白常见病虫害及防治方法 . 7 DB1301/T 3292020 II 前 言 本标准按照 GB/T 1.12009 给出的规则起草。 本标准由石 家庄市农业农村局提出。 本标准起草单位：石家庄市农林科学研究院、石家庄市神州花卉研究所有限公司。 本标准起草人：蒋淑磊、徐秋良、白霄霞、李振勤、李国松、杨红涛、边光亚、刘雅、王乃泽、吴 然、张晓英、刘伟、陈洪波、牛晓丽。 DB1301/
3、T 3292020 1 照山白杜鹃组培快繁育苗技术规程 1 范围 本标准规定了照山白组培快繁育苗生产 过程中组 培实验室所需的设备、器材和试剂、母本材料、培 养基选择与母液配制、培养基制备、外植体预处理与消毒、接种准备与外植体接种操作、组织培养过程、 移栽后管理、苗木出圃质量标准等要求。 本标准适用于照山白通过组织培养快繁育苗的全过程。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 NY/T 23062013 花卉种苗组培快繁技术规程 DB13/T 24222
4、016 高山杜鹃工厂化育苗技术规程 3 术语和定义 NY/T 23062013 界定的以及下列术语和定义适用于本文件。 3.1 照山白 Rhododendron micranthum 杜鹃花科杜鹃花属，多分枝灌木，花冠钟形白色，花期5月7月，果期7月9月，夏季观花，冬季 观叶。 3.2 幼嫩茎段 young stem segment 腋芽萌发茎取1 cm2 cm的长茎段。 4 组培实验室所需的设备、器材和试剂 4.1 实验室设计要求 按照NY/T 23062013 中第4章执行。 4.2 所需设备 按照NY/T 23062013 中附录B 执行。 4.3 所需试剂 DB1301/T 32920
5、20 2 除 按照 NY/T 23062013中 附录D的 要求执 行外， 还需增加 异戊烯基 腺嘌呤 化学 名： N6-(2-Isopentenyl)adenosine)。 4.4 所需器械和培养容器 按照NY/T 23062013 中第6章执行。 5 母本材料 选择无病虫害健壮植株为母本材料。 6 培养基选择与母液配制 6.1 培养基选择 以WPM培养基为初代培养、继代培养、增殖培养基本培养基；1/2 WPM为生根培养基本培养基。 6.2 基本培养基的母液配制和保存 培养基母液配制方法和保存注意事项见附录A。 6.3 植物生长调节剂的母液配制和保存 植物生长物质的母液配制及存储方法按照DB
6、13/T 24222016 中5.3 执行。 7 培养基制备 7.1 配制 根据培养基成分准备好蒸馏水、琼脂、砂糖和各种母液。制作1 L培养基，需要700 ml蒸馏水，添 加琼脂粉6.5 g7.0 g,加热搅拌使之完全溶解，加砂糖30 g,根据母液要求取量，添加植物生长调节剂， 用pH计测pH值，用0.1 mol/L的 NaOH 或 HCl 调节pH值至要求值，一般为5.55.8。 7.2 分装 用量以不同规格培养瓶培养基分装量不同，分装培养基注意勿将培养基沾到培养瓶瓶口，分装完成 后注明日期和编号。 7.3 高压灭菌 培养基分装完成后应在10 h 内进行湿热灭菌，灭菌调节为121 ,18 m
7、in。 7.4 储存 灭菌后的培养基放在储存间，注意储存时间不超过7 d。 7.5 接种操作 按照NY/T 23062013 中第10章执行。 8 外植体预处理与消毒 DB1301/T 3292020 3 从健康母本材料上切取带芽幼嫩茎段2 cm为外植体放 入烧杯。将外植 体用0.2%0.3% 的洗涤剂溶 液浸泡并振荡4 min6 min，自来水冲洗30 min。在超净环境中，用75%酒精浸泡外植体 30 s，用无菌 水冲洗外植体3 次4 次。用0.1% 的HgCl 2 溶液浸泡3 min5 min，用无菌水冲洗3 次5 次，备用。 9 接种准备与外植体接种操作 接种准备及外植体接种操作按照N
8、Y/T 23062013 中第10章执行。 10 组织培养过程 10.1 培养条件 培养温度为20 2 ，光照强度3000 lux3500 lux，每日连续光照12 h13 h。 10.2 初代培养 将外植体接种在初代培养基上，至幼芽萌发生长到1 cm2 cm。 初代培养的培养基配方为: WPM + NAA 0.2 mg/L + 2ip 6 mg/L + 白砂糖 30 g/L + 琼脂 6.5 g/L， pH值调至5.55.8。 注： 10.210.5 中WPM等缩略语名称对照表参见附录B。 10.3 继代培养 将初代培养基上长出的幼嫩组织转接到继代培养基上长出丛生芽。 继代培养基配方为：WP
9、M + NAA 0.25 mg/L + ZT 0.5 mg/L + 白砂糖 30 g/L + 琼脂 6.5 g/L，pH 值调至5.55.8。 10.4 增殖培养 将丛生芽分切成0.5 cm1 cm组织块,转接在增殖培养基上培养。 增殖培养基配方为: WPM + NAA 0.1 mg/L + ZT 2.0 mg/L + 白砂糖 30 g/L + 琼脂 6.5 g/L，pH 值调至5.55.8。 10.5 生根培养 将高度为2 cm3 cm的增殖苗转接在诱导生根培养基，生根培养60 d，幼苗基部长出4 条7 条新 根，根长3 cm4 cm时，进行炼苗移栽。 诱导生根的培养基配方为: 1/2WPM
10、 + IBA 0.8 mg/L + NAA 0.25 mg/L + 白砂糖 15 g/L + 琼脂 6.5 g/L，pH值调至5.55.8。 10.6 炼苗与移栽 10.6.1 炼苗 将生根苗从培养室中取出，置于温度控制在(202) ，经彻底消毒的温室中，炼苗驯化3 d4 d， 再打开瓶口炼苗3 d4 d，进入移栽阶段。 10.6.2 移栽 DB1301/T 3292020 4 从瓶中取出组培苗，放在盛有(202) 左 右的温 水中，将附着在根上的培养基清洗掉，洗时注意 不伤根，用50% 多菌灵WP 1500 倍液浸泡5 min，清洗灭菌。 选用1 mm3 mm的珍珠岩与草炭 1:3 配比制成
11、基质，装入穴盘。将基质喷湿至含水量达到60% 左 右。 清洗灭菌后的苗移栽到穴盘中。浇透水，并使根系和基质紧密接触。 11 移栽后管理 11.1 光照与温湿度控制 移栽后保温保湿10 d，相对湿度保持在80% 左右，温度保持在18 22 ，每天中午通风0.5 h 1 h，用遮阳网控制光照强度在5000 lux8000 lux之间。 施肥每15 d20 d进行叶面喷肥一次，喷施1/10WPM培养基溶液 + 0.1% 的鳌合铁溶液，共施3 次。 11.2 病虫害防治 移栽苗管理期间，实时监测病虫害发生情况，及时预防。照山白常见病虫害及防治方法参见附录C。 12 苗木出圃质量标准 12.1 组培穴盘
12、苗 株形植株挺拔，叶深绿色，无黄叶现象。 12.2 根系 根系嫩白密集，根毛浓密，根系将基质紧紧缠绕，形成完整根坨，基质不散。 12.3 苗高 苗高10 cm15 cm。 12.4 叶片数 叶片数在8 片以上。 12.5 整齐度 同一批次90% 以上的苗高达到要求的高度。 12.6 病虫害状况 无检疫性病虫害。 DB1301/T 3292020 5 A A 附 录 A （规范性附录） WPM 培养基母液配制 WPM培养基母 液配制见 表A.1。 表A.1 WPM 培养基母 液配制 种 类 成 分 称取量 （mg） 母液体积 （ml） 配 1 升培养基吸取量 （ml） 大 量 元 素 NH4NO
13、3 4000 1000 100 (NH4)2SO4 1320 MgSO4.7H2O 3700 KH2PO4 1700 KNO3 4000 K2SO4 9000 中 量 元 素 镁 MgSO4.7H2O 3700 1000 100 钙 CaCl2. 960 Ca(NO3)24H2O 5560 螯 合 铁 Na2-EDTA 3730 500 5 FeSO 4.7H2O 2780 微 量 元 素 H3BO3 310 500 10 MnSO4.H2O 1115 Na2MoO42H2O 12.5 CuSO4.5H2O 1.25 ZnSO47H2O 430 维 生 素 肌醇 5000 500 10 烟酸（
14、维生素PP） 25 盐酸吡多醇 25 盐酸硫胺素 25 甘氨酸 100 注： 母液配制应用去离子水，置于4 左右冰箱保存，贴好标签，注明名称、配制日期。 DB1301/T 3292020 6 B B 附 录 B （资料性附录） WPM 等缩略语名称对照表 WPM等缩略语 名称对照 见表B.1 。 表B.1 WPM 等缩略语名称对照表 缩略语 化学名称（英文） 化学名称（中文） WPM Wood Plant Medicum (1980) 木本植物培养基 NAA -naphthy-acetic-acid -萘 乙酸 2ip N6-(2-Isopentenyl)adenine 异戊烯基腺嘌呤 ZT
15、Zeatin 玉米素 IBA 3-indolebutyrie acid 吲哚 丁酸 DB1301/T 3292020 7 CC 附 录 C （资料性附录） 照山白常见病虫害及防治方法 照山白常见 病虫害及 防治方法 参见表C.1 。 表C.1 照山白常见 病虫害及 防治方法 常见 病虫害 防治方法 生理性病害 黄化病（Chlorosis） pH值保持在5.06.5 范围内，用0.1%0.5%的硫酸亚铁水溶液代 替清水浇灌，症状严重时可在叶面喷施0.1%0.3%的螯合铁水溶 液。 小叶病（Zinc deficiency lobular disease） 叶面喷洒0.1%0.2%的硫酸锌溶液或螯合
16、锌，每隔6 d7 d 喷一次， 喷2 次3 次。 茎尖枯死 （Apical Blight） 叶面喷施0.2%的硼酸水溶液或800 倍1000 倍的禾丰硼溶液，每隔6 d7 d 喷一次，喷2 次3 次。 侵染性病害 白粉病（Powdery mildew） 25%粉锈宁1500 倍 2000 倍水溶液喷雾，每7 天喷药一次，喷药2 次3 次。 杜鹃锈病（Rust） 喷施25%粉锈宁1500 倍液或70%甲基托布津 可湿 性粉剂1000 倍液。 疫霉根腐病（Root Rot） 首先栽培基质要透气排水，浇水适量忌渍 涝 。一旦发病，及时使用70% 甲基托布津800 倍1000 倍液或70%恶霉灵可湿性
17、粉剂500 倍800 倍水溶液或80%乙蒜素1500 倍水溶液对发病植株和区域进行浸灌处 理，每周一次，连续处理3 次5 次，防止病菌向健康植株漫延。该 方法对发病初期植株有效，发病严重时，要对发病植株进行焚烧或深 埋处理。 芽枯病（Bud Blight） 最好的方法是将染病花蕾摘除并处理掉， 千万 不可丢进土堆肥中使 用。暂无杀菌剂可有效控制该病，但可在夏末使用10%氯氰菊酯乳油 1000 倍液或2.5%功夫乳油2500 倍3000 倍液、40%毒死蜱2000 倍 水溶液等杀虫剂控制叶蝉来进行预防。 炭疽病（Anthracnosis） 喷洒70%甲基托布津可湿性粉剂800 倍水溶 液或 80
18、%乙蒜素1500 倍水 溶液、70%代森锰锌可湿性粉剂500 倍水溶液等，每10 天喷1 次，连 喷3 次5 次。浇水时注意不将水淋溅到植株上可避免病毒传播。 虫害 根象（Root Weevil） 喷施40%毒死蜱1500 倍 2000 倍水溶液或2%甲维盐600 倍800 倍水溶液等低毒内吸杀虫剂来防治根象成虫和幼虫。 菜青虫(PierisrapaeLinne) 喷施40%毒死蜱1500 倍2000 倍水溶液或 2%甲 维盐600倍800 倍水溶液。 红蜘蛛（Spider mites） 使用 15%哒螨灵1500 倍2000 倍液或3.2 %阿 维菌素2000 倍2500 倍液等药剂喷洒。 _ 石家庄市农业地方标准 照山白杜鹃组培快繁育苗技术规程 DB1301/T 329 2020 河北省标准化研究院编辑、校对 石家庄市工农路 368 号（ 0311-67501107） 网 址 ： www.bzsb.info 2020null 年 4 月第一版 DB13 01 /T 329 20 20
